Vi-Cell 细胞计数仪使用说明

1、 vi-cell xr 细胞活力分析仪细胞活力分析仪 参考手册 pn 383674 rev. a pn 383674 rev. a 2 操作人员在使用仪器前应认真阅读本产品手册，具体问题请咨询美国贝克曼库尔特有限公司的培训人员。操作人员在使用仪器前应认真阅读本产品手册，具体问题请咨询美国贝克曼库尔特有限公司的培训人员。 技术支持服务电话：1-800-523-3713 11800 sw 147th ave. 弗罗里达州迈阿密 33116-9015 美国贝克曼库尔特有限公司建议，用户在使用 vi-celltm xr 活力分析仪时，应遵循所有的国家卫生安全 标准，如使用隔离防护装置。即在对此仪器（或

2、任意其他的实验室自动分析仪）进行操作或维护时，应佩 戴护目镜、手套并穿上适当的实验服，以及其他相应的防护装置。 pn 383674 rev. a 3 目目 录录 第第 1 章 章 vi-cell xr 导言导言. 5 1.1 使用范围. 5 1.2 惯例. 5 2. 安全. 5 2.1 有害废物处理. 5 2.2 特殊试剂处理. 5 3. 其他注意事项. 5 3.1 警告. 5 3.2 小心. 6 第第 2 章 章 vi-cell xr 介绍介绍. 6 1. 系统概况. 6 2. 细胞活力及细胞参数测量. 6 3. 如何测量细胞活力？. 7 3.1 台盼蓝染色排除法. 7 3.2 图像分析方案

3、 . 7 第第 3 章 安装和测试章 安装和测试. 10 1. 导言. 10 2. 特殊要求 安装前检查 . 10 3. 硬件连接. 11 3.1 保险丝安装和电压调节器. 12 4. 软件安装和启动. 14 4.1 参数设置. 14 4.2 安全配置. 17 5.2 日常测试. 20 第第 4 章章 快速启动指南快速启动指南. 20 1 启动. 20 1.3 登录样品. 23 1.4 选择细胞类型. 24 2 自动取样器队列管理. 25 2.1 登录样品并执行样品分析（自动化取样器）. 27 3 数据检查. 29 3.1 数据输出管理. 29 3.2 数据图 . 31 3.3 打印. 35

4、打印选项制表符： . 38 pn 383674 rev. a 4 第第 5 章 软件菜单章 软件菜单 . 39 1. 文件. 39 2. 视图. 41 3. 仪器. 41 4. 诊断. 42 5. 安全. 42 5.1 用户类型. 44 6. 帮助. 45 7. 导航栏 . 46 8. 仪器控制. 47 9. 运行结果. 48 第第 6 章 专用软件特征章 专用软件特征. 49 1. 生物过程特征. 49 1.2 创建生物过程文件 . 50 1.3 生物过程管理. 51 1.4 将生物过程文件输到 excel . 52 2 质控特征. 52 2.1 什么是质控特征？. 52 2.2 创建质控图

5、 - 总浓度/ml . 53 2.3 质控品管理. 54 2.4 excel 格式输出数据. 54 2.5 修改质控文件. 55 3. 细胞类型的创建和管理 . 56 3.1 什么是细胞类型？. 56 3.2 新建细胞类型. 56 3.2 修改细胞类型. 58 第第 7 章 结果打印和输出章 结果打印和输出. 61 1. 打印选项. 61 2. 数据输出. 64 2.1 生物过程数据输出 . 65 2.2 质控数据输出. 65 第第 8 章 法规顺应性章 法规顺应性 21 cfr 第第 11 部分部分. 66 附录 i 系统技术规格. 75 附录 ii 细胞类型 流程图. 76 附录 iii

6、统计数据. 77 附录 iv 故障排除. 78 附录 v vi-cell 维护. 79 附录 vi 自动调焦程序. 80 pn 383674 rev. a 5 第第 1 章 导言章 导言 1. 手册介绍手册介绍 1.1 使用范围使用范围 本手册的目的在于，向用户提供对 vi-cell xr 系统进行安全有效地安装、操作和维护所需要的所有 信息。 1.2 惯例惯例 对可选择或点击的菜单和对话框，以粗体形式显示。 警告、小心警告、小心和重点重点条款也均以粗体显示。 小心小心 指示如果忽略此条件或程序，将对仪器造成损害。 警告警告 指示如果忽略此条件或程序，将引起人身伤害。 2. 安全安全 2.1

7、有害废物处理有害废物处理 在处理和丢弃有害废物时，应遵循地方和州政府法规执行。详细信息参见材料安全数据单。 2.2 特殊试剂处理特殊试剂处理 特殊处理试剂请注意查看试剂包装（vi-cell reagent pak）上的警告说明，也可查看其他材料（如： 材料安全数据单） 。 3. 其他注意事项其他注意事项 3.1 警告警告 1 电气 仪器内部含有高电压，因此，在移动盖子前务必断开仪器与电源之间接线。 2 仪器必须正确接地。 3 对稀释液和试剂的使用，在任何时侯都必须遵循相应的毒性、安全性和相关处理程序。详细 资料参见相应的安全手册和材料安全数据单。 4 机械机械 在移动玻璃物件如注射器组件时，切

8、勿用力过度。 pn 383674 rev. a 6 5 为避免手被夹住，应使手指远离自动取样盘上的孔及样品抽吸管。 3.2 小心小心 电气电气 在切断电源前，使用 windows shut down（关闭）命令。如果先切断电源，则在下次 启动计算机时窗口将显示错误信息。 第第 2 章 章 vi-cell xr 介绍介绍 1. 系统概况系统概况 vi-cell xr 活力分析仪是视频成像系统，用于分析培养基或悬浮液中的酵母、昆虫和哺乳动物细胞。该 分析仪可自动执行目前已被广泛接受的台盼蓝染色排除法，适用于多种细胞类型的分析。其软件特点为能 够对生物反应器和其他细胞培养过程进行监测， 并按照美国食

9、品和药物管理局 （fda） 条例 （21cfr part11） 的要求进行了电子记录和电子签名设计。 该系统的主要特点为： 细胞活力以百分比、浓度和细胞数表示。 浓度检测范围在 50,000-10,000,000 个细胞/毫升。 细胞直径在 3-7m。 可选 12 位自动化取样器。 用户友好试剂系统。 2. 细胞活力及细胞参数测量细胞活力及细胞参数测量 2.1 为什么要测量细胞活力？为什么要测量细胞活力？ 在测量细胞培养物的整体健康状况时，要求精确测量细胞浓度和细胞存活率。该数据在判断是否要调 整细胞生长所要求的基础培养物，以使生物反应器能够维持最适的培养条件时极其重要。 pn 383674

10、rev. a 7 2.2 传统方法传统方法 血球计血球计 传统上对细胞活力（台盼蓝染色排除法）的检测是使用光学显微镜和血球计进行的。这些方法存在诸 多缺陷。血球计重复性很差；即使是同一样品，在采用不同方法进行分析时，得到结果也有差异。此 外，采用人工法，在当前相对繁忙的实验室环境下也是一件既繁锁又相当耗时的工作。 3. 如何测量细胞活力？如何测量细胞活力？ 3.1 台盼蓝染色排除法 台盼蓝染色排除法 该方法已被广泛用于测量细胞活力。当细胞死亡，细胞膜破裂，从而使台盼蓝染料能够透过。结果， 死细胞或已失去活力的细胞颜色比活细胞要深一些。通过对这种色调的对比测量，从而能够测量到细 胞活力。 3.2

11、 图像分析方案 图像分析方案 贝克曼库尔特 vi-cell xr 系统为自动执行台盼蓝染色法。通过最新的视频捕获技术和样品处理法， vi-cell xr 将抽取细胞样品转移到流动池，然后照相机对其进行拍照。vi-cell xr 至少可拍摄 100 张图像，以用于细胞活力检测。 对细胞是否已吸收台盼蓝染料，可通过软件进行确定。吸收了台盼蓝染料的细胞，颜色要深一些，因 此其灰度值较低。而具有高灰度值的细胞可视为活细胞。 活细胞排除染料活细胞排除染料 染料透过死细胞染料透过死细胞 台盼蓝染色排除法台盼蓝染色排除法 pn 383674 rev. a 8 4. 系统部件系统部件 下图为对 vi-cell

12、 xr 细胞活力分析仪的主要部件进行说明。 试剂阀 （后盖） 样品注射器 样品抽吸管 试剂/废物室 故障指示灯 样品杯指示灯 电源指示灯 样品架 图 1. vi-cell xr 分析仪前视图 pn 383674 rev. a 9 试剂检测器 led （发光二级管） 试剂包 彩色编码试剂管 废液储瓶 用过样品杯 收集容器 图 2. vi-cell xr 右侧图（试剂舱展示） pn 383674 rev. a 10 4.1 产品样本发送选项产品样本发送选项 vi-cell xr 细胞活力分析仪是 vi-cell 类系列产品的最重要代表。 4.2 计算机系统计算机系统 窗口：2000 或 xp 系统

13、 ram（随机存取存储器） ： 至少为 256mb dram 处理器速度：相当于奔腾 4（1.5ghz）或更高级别 硬盘趋动器至少为 40gb cd rom 趋动器至少为 12x cd-rom，优先选用 cd-rw 监视器：xga 或更高级别 至少配有 256 色调色板的 pci 图形卡，屏幕分辨率为 1024768 ohci 要求与 ieee-1394 firewiretm卡兼容。 4.3 软件软件 美国贝克曼库尔特有限公司提供有可供在 pc 上使用的 vi-cell xr 软件和操作系统软件。 第第 3 章 安装和测试章 安装和测试 1. 导言导言 2. 特殊要求特殊要求 安装前检查安装前

14、检查 正常情况下，对 vi-cell xr 的安装将由美国贝克曼库尔特有限公司授权经培训的安装工程师执行。 除非贝克曼库尔特另外授权同意，否则不得擅自打开 vi-cell xr 的包装。 2.1 环境环境 仪器安置表面应避免下面条件干扰： 1 过量的由空气传播的尘埃 2 强烈振动 3 温度和湿度极限情况 2.2 电源要求电源要求 功率：50 瓦（最多为 65 瓦） 电压：100、120、220、240vac 50/60hz 2.3 温度和湿度要求温度和湿度要求 pn 383674 rev. a 11 温度：10 - 40（50 - 104） 湿度：10% - 85% 3. 硬件连接硬件连接 检

15、查 pc 和分析仪之间的所有接线，确保其已连接牢固。线路连接方式如下： 1. 将计算机火线插头上的视频捕获电缆（灰色线）连接到 vi-cell 上（参见下图） 。下图为 pc 插 头示意图。 2. 将 pc 背面的 io 端口 a/1 上的串行电缆（米色线）连接到 vi-cell xr 的系列插头上。 pc 火线插头背面火线插头背面 vi-cell 背面 计算机到背面 计算机到 vi-cell 上的接线上的接线 pc 背面上的背面上的 io 端口端口 a/1 pn 383674 rev. a 12 3.1 保险丝安装和电压调节器保险丝安装和电压调节器 小心！小心！ 在调整电源或更换保险丝前，务

16、必断开其上面的连接电源。在调整电源或更换保险丝前，务必断开其上面的连接电源。 电源开关、插头和电压调节器电源开关、插头和电压调节器 1 在电源开关顶部和保险丝盒间插入螺丝刀。轻轻转动螺丝刀，打开保险丝盒，使呈现出保险 丝。 2 将螺丝刀插入保险丝盒顶部，并继续轻轻地转动螺丝刀，使其迅速打开。选择电压将在顶部 显示。在使用 115v 的电源的电源时，将保险丝盒方向调整在顶部为 115v 的位置。然后将保险丝 安装在右侧相应尺寸和级别处（参见（参见 vi-cell 背面标签或保险丝级别和数量规格章节）背面标签或保险丝级别和数量规格章节） 。 3 插入保险丝盒，并关闭保险丝盖。 4 在使用使用 23

17、0v 的电源时，按照上述步骤 1 和 2 取下保险丝盒。 调整保险丝盒方向，使顶部在 230v 位置。取下保险丝盒（见下页图片）右侧并朝向保险丝 盒背面的夹子，将其置于一可靠地方保存。然后在该保险丝盒两侧插入保险丝（保险丝级别 和数量参见 vi-cell 背后标签） 。 pn 383674 rev. a 13 230v 夹子 本图片显示 方向调整在 115v 的保 险丝盒 115v 保险丝 保险丝盒保险丝盒 夹子 230v 保险丝盒和夹子 保险丝盒和夹子 取下夹子取下夹子 5 确保将电源线安装在 pc 和 vi-cell xr 上，且电源开关上的电压调节器设置符合所在国家 的电源要求。 pn

18、383674 rev. a 14 4. 软件安装和启动软件安装和启动 一旦安装了软件，vi-cell xr 软件图标将在桌面上显示。双击该图标即可启动程序运行。 选择 file（文件） ，preferences（参数选择） ，以访问 preferences（参数选择）对话框。 4.1 参数设置参数设置 对软件的起始设置在 preferences（参数选择）对话框内进行。在这上面可以设定目录，以保存数据、 图像、数据镜像和输出数据。保存图像至内存、自动增加样品名称、自动保存图像、自动打印、自动保存图像、自动打印和自动 保存至 自动 保存至 excel 也均为可选项。 pn 383674 rev.

19、 a 15 这些功能也可通过检查单选按钮设置，使在 log in sample（登录样品）对话框上执行。 缺省打印机也可通过 configuration（配置）对话框设定。 硬件配置和校准将由贝克曼库尔特工作人员进行。硬件配置和校准将由贝克曼库尔特工作人员进行。 选择目录制表符，以检查目录信息是否可接受，或更改路径。数据目录显示将对运行、生物过程和质 控文件进行保存的目录。图像目录显示拍照图像即将保存的位置。输出目录显示运行结果（以 excel 格式）将保存的位置。 pn 383674 rev. a 16 如果系统与服务器或网络连接，则在此制表符上也含有用于选择镜像目录的条款。该条款通过将资料

20、 保存到其他位置如网络服务器，使数据得以安全保存。对该条款进行选择前，应先核对预定选项，并 设置资料将要发送的路径或地址，也可以设置为网络趋动器。 preferences（参数选择）打印输出制表符允许图表选项在打印报告上显示。这些选项也可从软件运行 期间任意可用的打印功能键上选择。 pn 383674 rev. a 17 在 excel 制表符上，可以选择以 excel（xls）格式存档的参数。 4.2 安全配置安全配置 在安全配置对话框内选择 turn on（打开）按钮，以开启安全配置。然后输入有效的管理员姓名 和密码，即可启动安全配置。 在已开启的安全配置上，仪器按照美国食品和药物管理局（

21、fda）条例规定的电子记录和电子签 名（21cfr part11）的要求进行了设计。vi-cell 运行文件按其设计，符合电子记录要求，并以 电子格式提交到 fda。在安全制表符上可以定义签名意义。 pn 383674 rev. a 18 签名后，单击 security（安全） ，add new user（添加新用户）以设置用户及其访问级别。add new user（添加新用户）对话框显示。 pn 383674 rev. a 19 安全选项屏幕安全选项屏幕 添加新用户对话框添加新用户对话框 ? 密码至少为密码至少为 8 个字符。个字符。 ? 密码期限设置在密码期限设置在 60 天。天。 ? 活

22、动禁止设置在活动禁止设置在 15 分钟（最长可设置在分钟（最长可设置在 1439 分钟） 。分钟） 。 pn 383674 rev. a 20 5. 仪器性能测试仪器性能测试 5.1 安装后测试安装后测试 贝克曼库尔特维护人员将执行安装后验证测试。 5.2 日常测试日常测试 系统应每天运行质控品，以确保仪器性能正常。为此，贝克曼库尔特已开发出相关的 vi-celltm浓缩 质控品（pn 175478） 。 第第 4 章章 快速启动指南快速启动指南 1启动启动 1.1 启动仪器及其质控程序 启动仪器及其质控程序 仪器和计算机之间一旦进行了连接，则在打开电源后，直接双击桌面上的 vi-cell x

23、r 软件图标，即 可启动软件运行。启动后用户应听到泵初始化的声音，即仪器正在进入“闲置”模式。 1.2 试剂包安装 试剂包安装 打开仪器右侧的试剂舱，安装 vi-celltm试剂包和废液储瓶及样品杯收集容器。试剂管路和试剂包使 用彩色编码，以便于安装。 重点！重点！ 确保试剂管（彩色编码）正确安装，否则将导致错误结果！确保试剂管（彩色编码）正确安装，否则将导致错误结果！ pn 383674 rev. a 21 1）将彩色编码管连接至试剂包 2）将试剂包置于 vi-cell 试剂舱内部 3）将废液管连接到废液储瓶，然 后将其置于 vi-cell 内部 一旦安装了试剂，单击主屏幕工具栏上的 ins

24、trument （仪器）和 replace reagent pack（更换试剂包） 。 这时系统将对整个管路灌注试剂，并制备样品分析单元。 为验证试剂管是否已装满试剂并准备好进行分析，需检查试剂舱内的 5 个 led，确认其均已发亮。如果存 在一个 led 没有发亮，则在 instrment（仪器）上选择 prime（灌注） ，进行灌注。 pn 383674 rev. a 22 废液储瓶传感器插头 试剂 led 下面以 led 在分析仪上的显示顺序，从左到右进行说明。 1. 绿色绿色 - 缓冲液缓冲液 2. 红色红色 - 消毒剂消毒剂 3. 黄色黄色 - 洗涤剂洗涤剂 4. 蓝色蓝色 - 台盼

25、蓝试剂台盼蓝试剂 5. 废液废液 pn 383674 rev. a 23 1.3 登录样品登录样品 1 将至少为 0.5ml（最多为（最多为 2.0ml）的样品放入样品杯内。 2 将样品杯置于下一个可用的样品架位置。 3 单击 log in sample（登录样品）按钮，以登录样品。 a 在样品架上选择样品杯位置（适用时） 。 b 输入 sample id（样品 id） 。注意不要使用特殊字符如 、= 、: 、 /等。 c 选择 cell type（细胞类型） 。 d 如果样品已预先经过稀释，选择 dilution factor（稀释因子） 。 e 单击 ok（确定） 。 4 按下 start

26、 queue（开始排列） ，即可开始进行分析。 登录样品对话框登录样品对话框 pn 383674 rev. a 24 1.4 选择细胞类型选择细胞类型 在登录样品后，选择适当的细胞类型。如果细胞类型不存在，则按照第 3.2 条新建一个细胞类型。细 胞类型可以通过单击导航栏上的细胞类型图标进行查看。 细胞类型图标细胞类型图标 细胞类型屏幕细胞类型屏幕 操作人员应对每种细胞类型预先设置仪器和测量参数，以确保分析结果准确。 pn 383674 rev. a 25 2自动取样器队列管理自动取样器队列管理 用户可以单击 log in sample（登录样品）按钮或双击一特定的样品队列位置，以登录样品。如

27、果分析是 针对生物过程，则生物过程图标将在该样品位置左边显示。 如果是在登录期间检查单选按钮 save images（图像保存） ，printing（打印）或 exporting to excel（发送 到 excel） ，则图标将在样品队列上的样品位置左侧显示，并指示每个功能键。 完整的样品窗口（在自动取样排列登录屏幕上方）显示带有测量结果的样品的完整信息。检验标识显示， 以指示分析完成。 双击指定的完整样品，其测量结果将在当前屏幕右手边的结果窗口上显示。 单击 clear list（清除列表） ，将清除含所有运行的窗口。点击 print list（打印列表）图标，将打印完整样 品列表。如果

28、要打印完整列表上的所有运行，只需单击 print runs（打印运行）即可。 pn 383674 rev. a 26 在这里也含有适用于签名运行的功能键，即 sign runs（签名运行，遵循 21 cfr 第 11 部分）或 export to excel（发送到 excel） 。 在 preferences（参数选择）对话框上使用 completed list（完整列表）制表符，可对完整列表上显示的 信息进行选择，使其按照一定顺序排列。对 completed list（完整列表）制表符的访问可通过选择 file（文 件） ，preferences（参数选择） ，然后再选择 complete

29、d list（完整列表）进行。 pn 383674 rev. a 27 2.1 登录样品并执行样品分析（自动化取样器）登录样品并执行样品分析（自动化取样器） 1 将至少为 0.5ml（最多为（最多为 2.0ml）的样品放入样品杯内，然后再将该样品杯置于 下一个可用的样品架位置。取样体积不要求准确。样品杯带有刻度标记，即间隔为 0.5ml。 2 单击 log in sample（登录样品）功能键，或双击导航栏上的自动化取样器排列图 标 ，以登录样品。 a 在样品架上选择样品杯位置（适用时） 。 b 输入 sample id（样品 id） 。注意不要使用特殊字符如 、= 、: 、/等。 c 选择 cell type（细胞类型） 。 如果细胞类型不存在，则按照第