实验室生物安全手册

1、实验室生物安全规范目录实验室生物安全标准1目录2第一部分基本规格3列入规定三人员保护3实验室工作区4生物安全管理4第二部分实验室技术5移液管和移液管的使用5生物安全柜的使用5血清的分离5离心机的使用5冰箱和冰箱的维护和使用6装有冷冻干燥物的安瓿的打开6第三部分消毒灭菌7一、定义7二、化学杀菌剂7氯(次氯酸钠) 7二氯异氰脲酸钠8氯胺酮8甲醛8戊二醛8酚系化合物9季铵盐系化合物9乙醇9碘和碘螺栓10过氧化氢和过氧乙酸10三、消除局部环境污染10四、洗手/清除手上的污垢10五、高压灭菌10高压灭菌参数11高压灭菌器的搭载11高压灭菌器使用注意事项11附录112机器的安全性12表a1-1可能造成危害

2、的机器设备及其操作12表a1-2仪器设备相关事故的原因13表a1-3生物安全装置14表a1-4个体防护装置15附录216实验室有毒有害物品标准管理规程16第一部分基本规格由于感染性微生物的相对危害程度(危险度2级，病原体可以对人致病，但不易对实验室的工作人员和环境造成严重危害)，本实验室属于基础实验室，属于二级生物安全水平。列入规定1 .实验室门上应标明国际通用的生物危害警告标志(图1 )。2、只有经认可的人员才能进入实验室工作区域。3 .实验室的门必须保持关闭状态。4 .儿童不得被允许进入实验室工作区域。5、进入动物室必须得到特别的批准。6、与实验室工作无关的动物不得带入实验室。图1实验室门

3、上公布的生物危害警告标志人员保护1 .在实验室工作时，必须随时穿工作服。2、进行血液、体液、其他潜在感染性材料或可能接触感染性动物的操作时，要戴上适当的手套。 手套用完后，请消毒后取下，然后再洗。3 .处理感染性实验材料和动物后，在离开实验室工作场所前，必须洗手。4 .为了保护眼睛和脸免受水溢出、碰撞物和人工紫外线的照射，必须佩戴安全眼镜、口罩(口罩)和其他防护设备。5、不得穿着实验室的工作服离开实验室(餐厅、咖啡店、办公室、图书馆、职工休息室和厕所等)。6、在实验室不能穿伸出脚趾的鞋。7 .禁止在实验室工作场所处理饮食、饮水、吸烟、化妆和隐形眼镜。8 .禁止在实验室工作场所储藏食品和饮料。9

4、 .实验室使用的工作服不能和日常服装放在同一柜子里。实验室工作区。1 .实验室要清洁干净，不要放与实验无关的东西。2 .发生有潜在危害性的材料溢出，每天工作结束后，必须去除桌面污染。3 .污染的所有材料、标本和培养物在废弃或清洁再利用前，必须去除污染。4 .进行包装和运输的时候，必须遵守国家和国际有关规定。5、窗户打开的时候，必须设置防止节肢动物侵入的纱窗。生物安全管理1 .实验室主任(直接负责实验室的人员)负责生物安全管理计划和安全或操作手册的制定和采用。2、实验室主管(报告实验室主任)应保证提供常规实验室安全训练。3、将生物安全实验室的特殊危害通知实验室人员，同时要求他们阅读生物安全或操作

5、手册，遵守标准的操作和规程。 实验室负责人必须确保所有的实验室工作人员都理解这些要求. 实验室提供了可用的安全手册或操作手册.4 .应制定节肢动物和啮齿动物的控制方案。5、必要时，必须为所有实验室人员提供适当的医学评价、监测和治疗，并保存适当的医学记录。第二部分实验室技术实验室的伤害及与工作有关的感染主要是由于人为错误、不良实验技术及机器使用错误。 本节概述了避免或最小化此类常见问题的技术和方法。移液管和移液管的使用1 .应用移液辅助器，严禁用口吸。2、所有移液管都应带有棉塞，减少移液管器具的污染。3 .不能向含有感染性物质的溶液中吹入气体。4 .感染性物质不能使用移液管反复吸引混合。5 .无

6、法从移液管中用力喷出液体。6、污染的移液管必须完全浸入适当的消毒液中，在消毒液中浸入适当的时间后再处理。7、放废弃移液管的容器，必须放入生物安全柜。8 .为了防止感染性物质从移液管中溢出扩散，必须把吸了消毒液的纸放在桌面上，使用后用感染性废弃物进行处理。生物安全柜的使用。1 .只有生物安全柜正常运行时才能使用。2 .生物安全柜在使用中不能打开玻璃观察快门。3 .在安全柜内尽量放入器材和标本，不可影响后部压力排气系统的气流循环。4、所有工作必须在桌面的中后部进行，通过玻璃可以看到百叶窗。5 .尽量减少工作人员身后的人的活动。6 .操作者为了不妨碍气流，不能反复伸出手臂进入。7 .请勿让实验记录本

7、、移液管及其他物品切断空气栅。 因为这阻碍了气体的流动，引起物品的潜在污染和操作者的暴露。8、工作结束后，而且每天工作结束前，应该用70%的酒精擦拭生物安全柜的柜台，但禁止用酒精擦拭玻璃板。9 .在安全柜内的作业开始前和结束后，安全柜的风机至少要运行5分钟。10、在生物安全盘内操作时，不能进行文字工作。血清的分离1 .只有受过严格训练的人才能做这项工作。2 .操作时必须戴上手套、眼睛和粘膜的保护装置。3、血液和血清要小心吸入，不要跌倒。 严禁用嘴吸液体。4、使用移液管后，必须完全浸入适当的消毒液中，在消毒液中浸入适当的时间，废弃或灭菌洗净后再使用。5、带有血液凝固块等的废弃标本管，盖好后，必须

8、放入适当的防漏容器中进行高压灭菌。离心机的使用1 .必须按照操作手册操作离心机。2 .离心管在使用前必须检查是否破损。3 .离心用离心管必须经常盖上。4、离心罐的装载、平衡、密封和开放必须在生物安全罐内进行。5、离心桶和十字轴按重量配对，在搭载离心管后保持正确平衡。6、在操作手册中，请表示液面离开心管喷嘴所需的空间大小。7、空离心罐应用蒸馏水保持平衡。8 .每次使用后，必须去除离心槽、转子和离心机室的污染。9 .使用后，必须把离心罐倒着保管，使平衡的流动干燥。10 .必须每天检查离心机内转子部的空洞壁是污染还是污垢。 污染严重时，必须重新评价离心操作的规范。冰箱和冰箱的维护和使用1 .冰箱、低

9、温冰箱和冰箱必须定期除霜清洁。 请清除储藏过程中破碎的安瓿和试管等物品。 清扫时要戴上厚橡胶手套，进行面部保护，清扫后要消毒里面。2 .冰箱中保管的所有容器都必须明确标明内容物的科学名称、保管日期和保管人的名字。 没有明确记载的东西和废品必须高压灭菌后扔掉。3 .必须保存冻结保存品的清单。4 .除非有防爆措施，否则冰箱内不得放入易燃溶液。 冰箱门上要注明这一点。装有冷冻干燥物的安瓿的打开1 .首先清除安瓿外表面的污染。2 .如果软管内有棉或纤维堵塞的东西，可以在软管上留下棉或纤维堵塞的中部或锉刀的痕迹。3、用浸在酒精里的棉花包着安瓿，保护双手，手拿安瓿从标记的锉刀痕迹上打开。4 .小心去除上部

10、，用污染物处理。5、插头还在安瓿上时，用消毒镊子去除。慢慢地将液体放入安瓿中，使冷冻干燥物悬浮，以免起泡。第三部分消毒和灭菌一、定义消毒和灭菌有许多不同的术语，以下是生物安全常用的抗菌剂(antimicrobial )是能杀死微生物，抑制增殖的制剂。防腐剂(antiseptic )能抑制微生物的生长和繁殖，但它是不充分的物质。 防腐剂经常用于体表。生物杀菌剂(biocide )能杀死生物的所有制剂的总称。化学杀菌剂(chemicalgermcide )被用于杀死微生物的化学物质和化学混合物。清除污染去除和/或杀死微生物的过程。 这句话也用于去除和中和有害的化学物质和放射性物质。消毒剂(disi

11、nfectant )用于杀微生物的化学物质和化学混合物，但不一定杀孢子。 消毒剂经常用于非生命体及其表面。消毒(disinfection )可以杀死微生物的物理或化学手段，但不一定杀孢子。灭菌剂(microbicide )可以杀死微生物的化学物质和化学混合物。 这个词经常代替“生物杀菌剂”、“化学杀菌剂”或“抗菌剂”。孢子杀菌剂(sporocide )被用于杀死微生物和孢子的化学物质和化学混合物中。灭菌(sterilization )杀死或去除所有微生物及其孢子的过程。二、化学杀菌剂很多杀菌剂对人和环境有害，必须按照厂家的说明慎重选择、储藏、操作、使用、废弃。 为了个人的安全，稀释化学杀菌剂时

12、建议佩戴手套、围裙和保护眼睛的器具。下面介绍一般使用的化学杀菌剂，并给出了一般用途和安全特性。 除非特别说明，杀菌剂的浓度以重量/体积(w/v )表示。 表3-1总结了氯类消毒剂的推荐使用浓度。表1氯类消毒剂的推荐使用浓度“清洁”的情况a“污染”的情况b必要的有效氯浓度0.1%(1 g/l )0.5%(5 g/l )次氯酸钠溶液(含5%有效氯)20 ml/l100毫升/升次氯酸钙(含70%的有效氯)1.4克/升7.0克/升二氯异氰脲酸钠粉剂(含60%有效氯)1.7克/升8.5克/升二氯异氰脲酸钠片剂(每片含1.5 g有效氯)每升一张每升4张氯胺酮(含25%有效氯) c20克/升20克/升a去除

13、大部分污染物后b溢出的情况(血液等)和大量的污染物没有被除去的情况参照c正文氯(次氯酸钠)1、氯是一种起快速作用的氧化剂，是一种广泛应用的光谱化学杀菌剂。 一般销售次氯酸钠(naocl )溶液作为漂白剂。 但是，氯的很多副产物可能对人体和环境有害，应该避免滥用氯系消毒剂，特别是漂白剂。2、普通实验室消毒剂的有效氯浓度为1 g/l。 在含有大量生物危害性物质溢出和有机物的情况下，使用含有5 g/l有效氯的更强的溶液。 家庭用漂白剂的次氯酸钠溶液中含有50 g/l的有效氯，工业用漂白剂的次氯酸钠溶液中含有接近120 g/l的有效氯，因此必须进行相应的稀释以达到工作浓度。3、次氯酸钙ca(clo)2

14、颗粒或片剂一般含有70%的有效氯。 用颗粒或片剂调制浓度为1.4 g/l或7.0 g/l的溶液，有效氯浓度分别为1 g/l和5 g/l。4 .虽然没有提出漂白剂作为防腐剂使用，但可以作为一般目的的消毒剂及非金属类的浸泡污染材料使用。 紧急情况下，还可以用含有12 mg/l有效氯的漂白剂对饮用水进行消毒。5、氯气有很强的毒性。 因此，漂白剂只能保管在通风好的地方使用。6 .漂白剂与酸混合，不能避免氯气的迅速释放。二氯异氰尿酸钠1、血液和其他生物危害性液体溢出时，使用固体nadcc，将其作用至少10min后去除，使污染区域更加清洁。2、二氯异氰酸钠(nadcc )粉剂含有60%的有效氯。 用nad

15、cc粉剂调制的浓度为1.7 g/l和8.5 g/l的溶液中，分别含有1 g/l和5 g/l的有效氯。3、nadcc片剂一般每片含有1.5g有效氯，1片或4片溶解于1升水中可以分别得到约1 g/l和5 g/l浓度的溶液。4、粉剂或片剂的nadcc贮藏方便安全。氯胺1、氯胺释放氯的速度比次氯酸慢，而且，有机物对氯胺溶液的影响不如次氯酸溶液大，因此，“清洁”和“污染”两者都推荐20 g/l的浓度。2、氯胺溶液实际上没有臭味，但浸在氯胺中的要彻底清洗，去除氯胺t粉剂中添加的填充剂的残留物。甲醛，甲醛1、市场上销售的产品为聚甲醛种固体多聚物，呈薄片状或小块状，或福尔马林种浓度约370 g/l(37% )

16、的气体水溶液，其中含有甲醇(100 ml/l )作为稳定剂。 两种形式的加热都可以产生气体，用于密闭空间(例如生物安全柜或房间)的污染和消毒。2、甲醛(5%福尔马林水溶液)可作为液体消毒剂。3 .温度超过20时，甲醛(hcho )是杀死所有微生物及其孢子的气体。 但是，甲醛对朊病毒没有杀菌活性。4、甲醛效果相对缓慢，相对湿度必须达到70%左右。5、甲醛被怀疑是致癌剂。 有刺鼻的气味，该气体会刺激眼睛和粘膜，所以必须储藏在通风柜和通风好的地方使用。 必须遵守国家化学品的安全规定。戊二醛1、戊二醛ohc(ch2)3cho对繁殖的细菌、孢子、真菌和不含脂肪的病毒有活性。 没有腐蚀性，比甲醛作用更快，

17、但是杀死细菌孢子需要几个小时。2、通常供给的戊二醛为浓度约20 g/l(2% )的溶液，大部分产品在使用前需要加入与产品一起供给的碳酸氢盐混合物，使其“活化”(变成碱性)。 活化后的溶液，根据其配方设计、应用类型、使用频率等，可反复使用14周。 戊二醛溶液混浊时，必须废弃。3、戊二醛有毒性，对皮肤和粘膜有刺激性，应避免接触。 必须在通风柜和通风好的地方使用。 不推荐使用那个喷雾剂和溶液去除环境表面的污染。 必须遵守化学物质安全国家的规定。酚类化合物1、很多酚类产品可以用于去除环境表面的污染，部分(三氯生和氯甲酚等)是最常用的抗菌剂。2、酚类化合物是使用最早的杀菌剂。 但是，最近为了安全而被限制使用。3 .它们对