水稻愈伤组织的诱导实验报告

1、水稻愈伤组织的诱导一、实验目的1 .掌握外植体的消毒方法和接种技术2 .了解愈伤组织诱导的过程。二、实验原理以植物器官、组织、细胞等为外植体进行体外培养时，在一定的诱导培养条件下可诱导愈伤组织化。 经过愈伤组织培养，可以通过器官发生路径和体细胞胚胎发生路径再生植物体。外植体的自然环境都来源于带菌状态，接种前必须消毒。 对于难以消毒的材料，配合几种消毒剂使用的很多毛表面粗糙的材料，为了提高消毒效果，必须加入着色剂(吐温20 )。三、实验材料和工具1、材料：水稻成熟种子(愈伤组织诱导用)2、试剂： 75%酒精、2% NaCLO、无菌水(每组400毫升)3、培养基：诱导培养基： nb2，4-d2mg

2、/l蔗糖30g/L琼脂8g/L(pH5.8 )4、仪器设备：培养室、超洁净桌、培养皿(2卡卡卡卡卡卡卡卡卡卡卡卡卡卡卡卡卡卡卡卡卡卡卡卡卡卡卡耶伊耶伊耶伊四、实验程序1 .接种室、培养基及器具表面消毒用75%酒精棉球擦拭超纯桌子、镊子，把培养基和器具放在桌子上，打开紫外线灯，照射20分钟对表面消毒。 之后，关闭紫外线灯，打开桌子风扇，换气30分钟后，可以进行无菌操作。2 .种子从壳里出来选择丰满而不发霉的成熟水稻种子，用手脱下谷壳(注意保持胚的完整性)，每人准备30粒取壳种子，每组装入三角瓶。3 .操作者双手的清洗和消毒进入无菌室前，各操作者用自来水洗两手晾干，进入无菌室，坐在超清洁台前面的座

3、位上后，用含有75%酒精的酒精喷雾器消毒双手，在超清洁台风口风干后，进入超清洁台。 (注意：在酒精喷雾器的两手喷洒酒精时，请注意不要在超清洁台的有机玻璃板上喷洒酒精！ (请参见。)4 .超清洁工作台的表面消毒(以下作业在超清洁工作台内进行)用枪镊子从装有75%酒精棉球的容器中取出棉球，慎重地擦拭整个超清洁桌，尽量减少超清洁桌上的带菌量，将废棉球落在废液罐中，点亮放在超清洁桌上的酒精灯。5 .外植体消毒(分组操作，各组通过代表性操作完成外植体消毒工作)。将脱谷米粒转移到50mL无菌三角瓶中加入适量的无菌水洗(以不掉种子为基准，以下相同)扔掉水，适量加入75%的酒精，摇动搅拌，放置30秒(过程中适

4、度摇动混合)抛弃酒精加入适量的无菌水洗扔掉水适量的NaCLO 合计30分钟处理NaCLO扔掉无菌水洗3次，每次停留1分钟注入无菌水，将种子从三角瓶转移到带无菌滤纸的无菌培养皿中吸取。6 .接种和观察把干消毒种子用无菌镊子放在培养基中均匀放置，每盘接10粒，每人接种2盘。 接种结束后，用保鲜膜将培养皿封入培养皿中，将接种了材料的培养皿从超清洁台移出，注明日期接种者，按班放入篮子，把篮子放入培养室，进行25的暗培养。 注意每23天观察一次实验现象，一周后调查污染率，14天后调查愈伤组织诱导率。接种总种数污染率(%=100%被污染的种子数量接种总种数电感率(%=100100%形成愈伤组织的种子数量数

5、数儿组诱导率(%=编织物制导五、实验结果在这次实验中，我小组没有出现被污染的种子，污染率都是0。 在实验过程中，本组成员解释了操作规范，保证接种的种子不被污染。最后，我们组的两个培养皿分别能诱导7株和8株水稻苗，诱导率分别为70%和80%。六、讨论和分析1 .本实验分析污染的原因。1 )外植体消毒不完全，表面残留很多微生物2 )实验器具如镊子等消毒不完全，操作中会把微生物带入种子，污染种子3 )实验前，超清洁工作台没有被充分消毒，工作台内(主要是空气中)残留着很多微生物4 )培养皿的密封措施不顺利，培养期间微生物进入培养皿繁殖。2、降低实验中污染率的方法。1 )外植体、实验器具、超洁净工作台必须彻底消毒2 )采取密封措施3 )操作时不要离酒精灯太远4 )尽量缩短操作时间5 )按时更换消毒液(75%