枯草芽孢杆菌活菌数含量的测定操作规程_第1页
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文档简介

1、文件名称枯草芽孢杆菌活菌数的测定操作规程文件编号编 制 人编制日期年 月 日颁发部门审 核 人审核日期年 月 日印制份数批 准 人批准日期年 月 日生效日期年 月 日分发部门质量管理部、生产部目 的：建立枯草芽孢杆菌活菌数含量的测定标准操作规程范 围：本方法适用于的枯草芽孢杆菌活芽孢的测定责 任 人：内 容：1.仪器与工具：电子天平、生物显微镜、摇床、18180mm试管、500ml三角瓶、10ml刻度吸管、1ml刻度吸管2试剂与试液：牛肉膏、蛋白胨、琼脂、氯化钠、无菌蒸馏水、等。3.检测培养基配方：牛肉膏3g、蛋白胨10g、琼脂16g、氯化钠5g、蒸馏水1000ml，调至PH7.2，121灭菌

2、30min。4.检测步骤：4.1 菌液制备：采样量不少于500g，从所采的样品中精确称取10.00g试样，加入已灭菌的带玻璃珠（玻璃珠在80个左右）的500ml锥形瓶中，加入90ml已灭菌的无菌水，在摇床上200r/min摇动60min，即成母液的菌悬液。4.2 用1ml无菌吸管吸取1ml上述母液的菌悬液，加入9ml无菌水混匀成1：1102稀释的菌悬液，这样依此稀释，直至得到1：106；1：107；1：108；1：109等浓度（每个稀释度必须更换无菌吸管）。4.3向每个灭菌培养平皿中倒入约12ml培养基，混合均匀，待凝固后备用。4.4用1ml无菌吸管分别吸取不同稀释浓度菌悬液0.2ml，加至已

3、凝固好的培养基中，用涂布棒涂匀，在无菌操作台中静置30min后，倒置于37的恒温培养箱内培养18h24h。每个样品取3个连续适宜稀释度，每个稀释度重复3次，同时加入无菌水的空白对照，每个稀释度取5个到10个菌落的菌体，涂片染色，显微镜观察识别后计数菌落。5.菌落计数：5.1 以平板上出现20个200个菌落数的稀释度平板为记数标准，并确定为稀释倍数。5.2 当只有一个稀释度，其平均菌落数在20个200个之间时，则以该平均菌落数乘以其稀释倍数。5.3 若有两个稀释度，其平均菌落数在20个200个之间时，应按两者菌落数之比值来决定。6、结果统计与计算根据菌落数特征判定，分别数出平板中的枯草芽孢杆菌菌数及杂菌数（杂菌是指除枯草芽孢杆菌外的其他菌种）。统计算出同一稀释度三个平皿上菌落平均数（B）和杂菌数（E）。6.1 有效活菌总数按式（1）计算；A=10BC5 (1) 式中：A有效活菌总数，cfu/gB菌落活菌数；C稀释倍数。6.2杂菌率按式（2）计算：EE+AD=100(2)式中：D杂菌率，%E杂菌数。

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