12维生素B12的吸收曲线绘制及注射液的含量测定

1、新乡医学院分析化学实验课教案首页 授课教师姓名及职称：一、实验名称维生素B12的吸收曲线绘制及注射液的含量测定二、授课对象药学授课形式实验教学三、教学目标1掌握分光光度计的使用方法2掌握注射剂含量的测定和计算方法3熟悉测绘吸收曲线的一般方法四、教学内容1吸收曲线的绘制方法2应用吸光系数法测定注射剂含量及计算方法3752型紫外可见分光光度计的使用方法五、教学安排与课时分配1讲解演示 40 min2学生操作 教师辅导 120min六、授课重点1吸收曲线的绘制方法2752型紫外可见分光光度计的使用方法七、注意事项1752型分光光度计光源的使用 2每次改变波长，需重新调T为“0”3B12应避光八、授课

2、方法教师示范讲述，学生操作九、使用教材分析化学实验自编教材十、教研室审查意见主任签字新乡医学院化学教研室 年 月 日实验 维生素B12的吸收曲线绘制及注射液的含量测定一、实验目的1. 掌握分光光度计的使用方法；2. 掌握注射剂含量的测定和计算方法；3. 熟悉测绘吸收曲线的一般方法。二、实验原理维生素B12是含Co的有机化合物，其注射液为粉红色至红色的澄明液体。要测定B12注射液的含量，可以用紫外可见分光光度法测定，用此法进行含量测定，必须知道B12的max，max可以通过绘制吸收曲线来得到。吸收曲线：将不同波长的单色光依次通过被分析的物质，分别测得不同波长下的吸光度，以波长为横坐标，以吸光度为

3、纵坐标所描绘的曲线。吸光度最大时对应的波长为max，在max处测吸光度。B12在278，361，550nm处有最大吸收，在max处测得A，根据吸光系数法可以求出注射液中B12的含量。吸光系数法：A=Ecl实验中要求测361nm处的A，相应的吸光系数为207。三、仪器与试剂752型紫外可见分光光度计，10mL容量瓶，5mL吸量管；0.1gL-1维生素B12水溶液，维生素B12注射液(市售品)。四、实验步骤1752型分光光度计的使用（1）开启电源开关，使仪器预热20分钟。（2）用波长选择旋钮设置所需的分析波长。（3）将装参比溶液的比色皿置于光路，打开样品室盖，调节T旋钮，使显示器指针指在“0.00

4、”。（4）将装参比溶液的比色皿置于光路，关闭样品室盖，调节A旋钮，使显示器指针指在“100.00”。（5) 重复操作(3)和(4)，直至仪器显示稳定。（6）将装参比溶液的比色皿置于光路，关闭样品室盖，进行测定，在显示器上读出A。（7）仪器使用完毕，关闭电源，拔下电源插头。取出比色皿，洗净、晾干。复原仪器，盖上防尘罩。2吸收曲线的绘制将0.1gL-1维生素B12溶液置于1cm比色皿中，以蒸馏水为空白溶液，在不同波长(340nm580nm之间，其中从350nm370nm和540560nm每间隔5nm测量一次，其余每间隔20nm测量一次吸光度)下测量相应的吸光度。然后以波长为横坐标，吸光度为纵坐标绘

5、出吸收曲线。从吸收曲线上得到最大吸收波长，从而选择测定维生素B12的适宜波长。3注射液含量测定避光操作。准确吸取0.50ml维生素B12注射液于10ml容量瓶中，加水定容至刻度线。然后将溶液置于1cm比色皿中，在361nm波长条件下以蒸馏水作为空白测定吸光度，按C63H88CoN14O14P的吸收系数为207计算维生素B12标示量的百分含量。计算公式：五、注意事项1在每次测定前，首先应做吸收池配套性试验。即将同样厚度的4个比色皿都装相同溶液，在所选波长处测定各比色皿的透光率，其最大误差T应不大于0.5%。2仪器在不测定时，应随时打开暗箱盖，以保护光电管。3为使比色皿中测定溶液与原溶液的浓度一致，需用原溶液荡洗比色皿23次。4比色皿内所盛溶液以超过皿高的2/3为宜。过满溶液可能溢出，使仪器受损。使用后应立即取出比色皿，并用自来水及蒸馏水洗净，倒立晾干。5比色皿一般用水荡洗，如被有机物污染，宜用HCl乙醇(1+2)浸泡片刻，再用水冲洗，不能用碱液或强氧化性洗液清洗。切忌用毛刷刷洗，以免损伤比色皿。6350