土壤中细菌总数的测定实验VIP

1、实验四细菌总数的测定纯种分离一、目的1 .掌握从环境(土壤和活性污泥等)微生物群中得到的单纯微生物的分离和培养技术。2 .掌握无菌操作技术。二、材料和器皿1 .扭转天平、扫土工具、涂布棒(接种棒)。2 .无菌三角瓶、试管、培养皿、移液管、玻璃珠。3 .无菌水。4 .培养基：牛肉膏的胨培养基。三、实验操作步骤1 .挖土方式选择采样点，以对角交叉(五点法)进行采样。 首先除去表层约用2cm的土壤将铁锹插入土中数次，采集210cm的土壤。放土的容器必须是无菌的。 充分搅拌5个样品约1kg，去除破碎石头、植物的残根等。 取土样品后，尽快投入实验，同时10-15g、称量后用105oC干燥8小时，用干燥器

2、冷却后，再次称量计算含水量。2、逆平板溶解上述4种灭菌培养基，冷却至45oC左右板，凝固待机，每培养基稀释度3片平板。三、号码取5根无菌空试管(15150mm )，10-3、10-4，十五、十六、十七。4 .分注无菌水无菌操作，用5mL移液管把无菌水4.5mL标上号码在各无菌空试管里。5 .调制土壤稀释液据说里面装有1g土样99mL的无菌水和无菌生理盐水，还装有玻璃玻璃珠三角瓶振动1020min，将土中的菌体、芽胞孢子均匀分散，这是10-2浓度的菌悬浊液。 无菌转移液体软管将悬浊液0.5mL吸上4.5mL无菌水试管，用移液管吸3次然后摇动，这是10-3浓度。 用同样的方法，依次稀释为10-7。

3、稀释过程在无菌室和无菌操作条件下进行。环境要求：琼脂平板在桌子上暴露15分钟，每块平板不得超过15个菌落。代表：采集固体样品，必须采集几个部位，均质或研磨液体样品需要振动以获得均匀的稀释液。减少误差：每次阶段性稀释时更换一根灭菌吸管，使吸管内的液体沿管壁流动请勿将吸管前端放入稀释液中，请充分摇动稀释液。6 .培养和计数培养条件：跌倒到361的温箱内培养482h计数时间：达到规定的培养时间后，应立即计数。 如果不能马上计数，就必须放置平板。设定在0-4，但不能超过24小时。平皿中菌落数：用肉眼观察，必要时用放大镜检查。 记录各平板的菌落总数，求同希放出度的各平板的平均菌落数。规则：不同稀释度的菌

4、落数必须与稀释倍数成反比(相同稀释度的两个平板菌落)。数量应该几乎接近)，即稀释倍数越高菌落数越少，稀释倍数越低菌落数越少很多。发生逆现象时，应该视为检查中的错误(也有可能发生逆现象的食品)。例如，酸性饮料等)不能作为样品计数报告的依据。在平板上生长着链状菌落时，如果链状生长的菌落之间没有明确的边界，作为一个菌落计，有几个不同来源的链的情况下，不能按每个链计算一个菌落，而分别计算链上生长的各个菌落。 片状菌落生长时，该平板一般不应该采用，片状菌落不到平板的一半，另一半均匀分布时，一半平板的菌落数乘以2，就能表示全平板的菌落数。计数平板内菌落数过多(即所有稀释度超过300 )时，分布均匀，最好是

5、平板的一半或1/4的计数。 作为该平板的菌落数，乘以相应的稀释倍数。计数原则：选择平均菌落数在30300之间的进行计算1 .如果稀释度仅为1个的平均菌落数在该范围内，则将该平均菌落数乘以该稀释倍数进行报告申诉。2 .如果有两个稀释度，平均菌落数在30300之间，则由两者的菌落总数的比来决定如果常数小于2，则报告其中小菌落的总数，如果比应报告的两者的平均值大于2。3 .所有稀释度的平均菌落数超过300时，稀释度最高的平均菌落数乘以稀释倍数一数报告。4 .如果所有稀释度的平均菌落数都小于30，则应对稀释度最低的平均菌落数乘以稀释度解放倍数报告。5 .如果所有稀释度的平均菌落数不在30300之间，则

6、为最近的300或30的平均菌落数乘以稀释倍数进行了报告。6 .所有菌落数量均“数不清”时，必须注明水样的最大稀释倍数。7 .求出相同稀释度的平均值时，如果其中一个平板上生长了大片状的蚁群，则不优选为了采用该稀释度的平均菌落数，必须采用片状菌落未生长的平板。 薄片状菌落只要平板的一半，另一半平板上的菌落分布均匀，就可以用半平板上的菌落来计数然后，作为平板整体的菌落数乘以了2。报告原则例次不同稀释度的平均菌落数2个稀释度菌菌落数报告方式10-110-210-3落数之比(个/mL ) (个/mL )11365164 201640016000或1.610422760 295 461.637750380

7、00或3.810432890271602.22710027000或2.71044650513 -无法计算513000510000或5.1105527115 270270或2.71026不能计数305123050031000或3.11047不能计数。7、菌落总数报告方式蚁群数的报告，按照国家标准的方法，蚁群数为1100时，实际用数字报告，大于100时，报告前2位的有效数字，第3位按四舍五入计算。 可以用10的指数来表示，以缩短数字后面的零。固体体检样品以克(g )为单位报告，液体体检样品以毫升(mL )为单位报告，表面涂抹后以平方厘米(cm2 )报告。8 .计数选择菌落分散、菌落数适量、各平行盘菌落数接近的稀少放出度的平皿数通常是细菌和放线菌选择的菌落数为30300间的平盘，霉菌选择菌落数为101