PCR临床应用课件

1、荧光定量PCR技术在临床试验中的应用1、教研室医生PPT、PCR及基因诊断技术、基因诊断通过核酸的分子生物学检查，直接检测基因是否存在或缺陷，学习诊断疾病的方法。聚合酶链反应(PCR)，快速扩增DNA。PCR技术通过两个称为引物的短DNA片段和耐热酶的作用，在3小时内将特定DNA片段放大1000万倍。20世纪90年代中期，PCR临床应用在国内正式开始，1998年，荧光定量PCR技术开始在中国用于临床试验。2，学习通讯PPT，4基因诊断，3免疫学诊断，临床诊断，细胞膜，核，DNA， 完成第一个PCR周期后2个副本的目标序列，PCRPCR.exe动画，8，学习通信PPT，30次循环后的目标序列放大

2、数，no . ofno . ampliconcycle scopies softarget 124384165326401，048，5751 母婴传播控制及观察遗传病的诊断肿瘤的诊断法医学鉴定，荧光定量PCR的临床应用，13，学习沟通PPT，疾病的早期诊断和预后判断抗病毒药物的疗效的观察，诱导新药验证，14，沟通PPT，1。 病原体含量与病的关系2。病原体含量与药物的关系3。药物和治疗方法的研究与开发4。新的病原体分子诊断标准5。新的优藤表6。传染病疫情监测、预测和预防，临床应用，15，学习沟通PPT，临床应用，2肿瘤1。肿瘤标志物：癌胚抗原、工科酶、抗体、激素、细胞因子、受体等2。检测与肿瘤

3、相关的基因表达：肿瘤基因抗癌基因，包括肿瘤转移基因和转移抑制基因，16，学习交换PPT，3遗传病1。等位基因检测2。多重遗传病的突变检测3。检测基因表达异常导致的遗传疾病，17，学习交换PPT，1。亲子鉴定2。法医证据3。PCR-RFLP技术的法医学应用4。法医鉴定，法医鉴定，18，医生交换PPT学习，免疫学诊断主要是抗原抗体反应，临床上抗体一般产生后应用，许多病原体的免疫学检查有很长的“窗框期”，不利于疾病的早期诊断；直接检测病原体DNA/RNA的PCR方法可以大大缩短“窗框期”，高灵敏度检测也明显有助于疾病的早期诊断。疾病的早期诊断，19，学习沟通PPT，荧光定量PCR在病原体检测中的应用

4、，2性病病原体检测3结核杆菌和呼吸道病原体检测4优生优育(火炬)相关项目检测，临床应用，20，学习沟通PPT，肝炎病毒定量检测HBV，临床应用，21 HBcAb-IgM表明HBV处于复制状态HBeAg:HBV复制和强感染性指标HBeAb:具有一定的保护效果，预后良好，HBV，22，学习通信PPT，HBV，(2) HBV-DNA和，2 .“带菌者”、“大三阳”、“小三阳”等免疫指标不能反应体内病毒复制水平和感染程度。FQ-PCR:检测到的是HBV本身的遗传物质DNA，是病毒存在和复制的最可靠、最直接的指标。23，学习交换PPT，3。血清指标()不能排除HBV感染。，HBV，(b) HBV-DNA

5、和“两个半”，“4 .可能会出现HBsAg()或HBV-DNA()。5 .HBsAb()、HBcAb()、HBeAb () 3抗体阳性和HBVDNA2.5103copy/ml结果解释。24，学习交换PPT，HBV，(c) HBV-DNA定量检测的临床意义，3 .HBV-DNA定量及预后a .高含量急性肝炎患者比慢性b .致癌概率低的人高得多。1.HBV-DNA数量和HBV复制级别和传染性，2 .HBV-DNA定量和乙型肝炎药物疗效a .专家将103copy/ml作为语音或临床治疗标准b.HBV-DNA定量分析和干扰素治疗(前、中、后)c .拉米普蒂，25，学习通信PPT，HBVHBV-DNA定

6、量分析有助于指导怀孕、怀孕、哺乳检查，6 .血液产品和献血者筛选，26，学习交换PPT，HBVDNA检查的临床意义，HBVDNA是HBV存在的最直接依据，HBVDNA对乙型肝炎起到2/2的补充作用，HBV DNA是目前判断乙型肝炎抗病毒药疗效最敏感的指标HBV DNA隐匿慢性单个长链RNA病毒2。E1和E2区域基因很可变。(1)丙型肝炎病毒特征、hcv、感染特征：HCV在血液中微量输血后，肝炎的主要原因免疫学标志只有抗HCV、非中和抗体，在某些生成时间感染HCV后不会引起抗HCV感染。(。慢性化(50-85%)疫苗开发没有成功，单链RNA，28，学习通讯PPT，(b) HCV-RNA定量检测的

7、临床意义，1 .早期诊断a .以临床80copy/ml为无感染或治愈标准。B.HCV感染1-3W可以检测HCV-RNA的存在。c .严格审查献血者，提高对肠呼气感染者的检出率。HCV，29，学习交换PPT，HCV，(b) HCV-RNA定量检测的临床意义，2 .HCV-RNA负载与抗HCV逆、ALT级别的相关性。随着HCV-RNA负荷量的增加，抗HCV液滴和ALT异常率增加。3 .HCV-RNA是评价抗病毒治疗效果的重要指标。4 .通过慢性丙型肝炎长期抗HCV阳性、HCV-RNA定量分析，可以确定活动性、复制程度。30，学习通信PPT，两种常见性病病原体，淋球菌(NGH)沙眼衣原体(CT) t

8、riureaplasma urealyticum(人是淋球菌的唯一宿主。2 .发病率最高，约60%的性病。发病趋势：a .男性多于女性。b .城市向农村扩展，c .高收入人群向低收入人群扩展，4 .人对淋球菌感染没有自然抵抗力，免疫不长，再感染和慢性患者普遍存在。5.淋病患者母亲出生时淋球菌结膜炎，32，沟通PPT，CT，衣原体感染及致病性，1。严格的细胞内寄生。2 .不仅是眼部感染、肺部感染，还是STD的主要病原体。最近在欧美等国家，衣原体的感染率和危险性超过了Neisseria gonorrhoeae，位居STD之上。4.在我国，非淋菌性尿道炎中排在第一位。泌尿生殖系统感染妨碍怀孕。骨盆感

9、染会引起生殖能力损伤。33，学习交换PPT，UU，解脲支原体感染和致病性，合成脲酶，分解因子，2。非淋菌性尿道炎感染率仅次于衣原体。3 .堕胎超过4次，检出率达80%。30-40%的男性尿道炎是由感染UU引起的。5 .与男性不育相关。男性不育患者的精液中尿素的体检比例达66.6。检出率随着精子数的减少和精子运动力的减少而增加。34，学习交换PPT，1。非培养或形态检查诊断技术，快速、特殊、敏感。无症状或症状较轻的人可以接受早期诊断。3.对NGH、CT、UU等混合感染者的诊断和鉴别诊断。4.指导药物，评价疗效。NGH/CT/UU的重要性，NGH/CT/UU，35，学习通信PPT，NGH/CT/U

10、U，荧光定量PCR诊断NGH/CT/UU的重要性，5。不孕，优生。6.提供性病监测依据的流行病学调查。、36、学习通信PPT、CT、UU、NGH、HPV、TP除NGH之外，其他培训或培养都很困难。即使可以培养，所需时间也是48小时。37，学习交换PPT，人乳头瘤病毒感染和致病性，1。HPV宿主和组织特异性，人类皮肤和粘膜上皮细胞，人是HPV的唯一宿主。2.有100多种类型。3.低风险：HPV6、11为良性病变(尖锐湿疣、喉乳头状瘤等)、HPV、38、学习通讯PPT、人乳头瘤病毒感染和致病性、HPV、4。高风险：HPV16、18是恶性肿瘤(宫颈癌、肛门癌、口腔癌等)5。免疫原性低，容易发生持续感

11、染。新生儿分娩感染。39.学习沟通PPT，死于宫颈癌的这些年轻艺人的认识率正在提高。梅艳芳(40岁)，国家一级演员李文文(41岁)，40，学习交流PPT，HPV，41，学习交流PPT，1。可以对典型事例进行明确诊断。2.如果临床和组织病理学的变化都是非典型的话，也可以进行诊断。无症状和隐性HPV感染诊断。4.基因型。评价疗效和预后。病毒负载和癌症风险。HPV，荧光定量PCR检测HPV的重要性，42，学习交换PPT，HPV，43，学习交换PPT，3结核杆菌和呼吸道病原体检测，Tb:tuberclebacillicp:chlamydiapneumonityTB，45，交换ppt学习，结核杆菌流行情

12、况(2)，我国结核病的发病继印度之后排在世界第二位的2000年，全国人口结核病感染率为44.5%。其中1544岁人口占53%，每年约有25万人死于肺结核，46人学习交流ppt，结核杆菌感染，肺部感染：原发性肺结核，开放性肺结核。肺部感染：脑、肾、骨、关节、生殖结核、肠结核、结核性腹膜炎、系统性结核。47，学习交换PPT，现有结核病实验室诊断方法和不足，1 .抗酸染色的痰涂片：阳性率低，时间消耗性2。细胞培养“黄金标准”:周期太长(3-4W)3。血清诊断：接种a. BCG可能出现阳性b。活动性结核和治疗后留下损伤的病床的c .交叉反应，假阳性不能早期诊断！容易错过误诊和误诊！TB，48，学习通信

13、PPT，荧光定量PCR对TB-DNA的重要性，1 .能可靠检测10copy的TB-DNA，灵敏度高，特异性2。结核病的早期、快速、准确诊断。痰、肺、支气管灌洗液结核血液传播结核和各器官结核脑脊液中枢神经系统结核颈端面棒、尿道面基泌尿生殖系统结核、TB、49、学习交换PPT、3。荧光定量PCR对结核分枝杆菌阳性率明显高于痰涂片除酸染色和改良罗氏培养法。4.TB-DNA浓度可用于判断疗效：痰标本中结核分枝杆菌的数量逐渐减少，TB-DNA拷贝数量减少。根据病原体DNA浓度的药物治疗和疗效观察的参考资料，TB，荧光定量PCR分析TB-DNA的意义，50，学习通讯PPT，tettortoching感染特

14、征和检测，tox 3360 Toxoplasma : rubellavirus CMV : hub母胎传播的主要病原体2。造成胎儿畸形新生儿缺陷的重要原因3。自然状态下隐性感染4。容易发生在怀孕、多次输血、艾滋病等方面的显性感染5。多发性，全身性感染6。只有风疹才能获得长期的免疫力，疫苗预防，火炬，52，沟通PPT学习(a)弓形虫感染和致病性，营养像弓一样广泛分布，人和兽共感染。寄生在核细胞上的猫和高阳科有很多宗主性感染者，免疫者有我国智力低下的弓形虫抗体IgM阳性率12.25名艾滋病患者，约2080人因Toxoplasma感染艾滋病死亡的重要原因之一和发病的Toxoplasma tox，53

15、，了解沟通PPT，人口的自然感染率为60免疫缺陷病毒(怀孕、多次输血、器官移植、艾滋病)的显性感染主要是血液、尿液、牛奶、精液和分泌物感染的子宫内感染和胎儿畸形的主要病毒之一；(2)人类巨细胞病毒感染和致病性；torch-CMV，54(3)人类风疹病毒感染和致病性，totch-RV，55，学习通讯PPT，先天性风疹感染是母体首次感染时先天性风疹综合征(CRS)三联症：白内障、听力障碍、心脏病。孕期皮质类固醇的增加和细胞免疫功能的减弱对正常人无害的再感染会传播病毒，影响胎儿。torch-RV，(3)人风疹病毒感染和致病性，56，学习通讯PPT，HSV原发感染大部分是隐性的，大部分没有临床症状或无症状HSV-1主要是口腔和疱疹、疱疹结膜炎、脑炎、皮肤性疱疹HSV-1HSV感染后，大部分个体不能完全消除病毒或防止复发，病毒以潜伏状态长期存在于宿主体内。totch-HSV，(4)人类单纯疱疹病毒感染和致病性，57，学习通讯PPT，