维生素B12含量测定

1、分析化学实验,维生素B12注射液鉴别、检查和含量测定,P91实验十四,1、维生素B12主要来源是动物性食物，存在于动物肝脏、牛肉、猪肉、蛋、牛奶和奶酪中; 2、在吸收时需与钙结合才能有利于人体的机能活动; 3、维生素B12能促进红血球的形成和再生，防止贫血； 4、促进儿童发育；能使脂肪、碳水化合物、蛋白质适宜地为体内所利用。 5、主要用于治疗恶性贫血，与叶酸合用治疗因抗叶酸药、脂肪泻等引起的巨幼红细胞性贫血。也用于多发性神经炎、肝炎、肝硬化、白细胞减少症等的辅助治疗，目前疗效有争议。口服维生素B12仅用于已证实维生素B12吸收正常的营养性维生素B12缺乏。,维生素B12是含钴的有机药物； 为深

2、红色结晶，又称为红色维生素B12或氰钴胺； 是唯一含有主要矿物质的维生素。 分子量：1355.38 分子式：C63H88CoN14O14P,一、实验目的： 1、掌握Uvmini-1240型的使用方法。 2、掌握维生素B12注射液的紫外分光光度法鉴别及含量测定。 3、掌握吸收系数法定量测定的计算公式。 4、熟悉绘制吸收曲线的一般方法。,二、主要仪器与试药 维生素B12注射液、维生素B12对照品 Mini-1240型紫外-可见分光光度仪、石英比色皿、50ml容量瓶，5ml 吸量管,精密仪器，小心！,三、实验准备 1. 用标示量0.5mg/ml维生素B12配制贮备液（样品）：吸量管精密量取2.5ml

3、于50ml容量瓶中，用水溶解并稀释至刻度，摇匀，作为贮备液（约25 g/ml）。 2 . 25 g/ml对照品溶液（实验室提供）,四、实验内容 实验原理：维生素B12分子结构中有共轭体系，具有紫外吸收，故可采用紫外分光光度法鉴别和测定含量。 实验步骤： 1、取B12贮备液（约25 g/ml），以蒸馏水做空白液做光谱图（粗扫描），在278nm，361nm，550nm处有吸收峰。 2、精测：在以上278nm，361nm，550nm波长分别1 范围内测定吸光度（每转换一次波长以水做空白）记录各最大吸收值。,仪器的使用方法 开机：打开电源，仪器初始化，约3min完成，然后预热大约0.5h。 方法菜单：

4、 1，光度值 2，光谱 3，定量 4，选购程序包 5，系统设计 - 输入项目号 参数 IC包 文件发送 PC控制,五、实验结果 鉴别：维生素B12吸收光谱上有三个吸收峰：278 nm、361 nm、550 nm。 检查：A361/ A278 应为1.70-1.88， A361/ A550应为3.15-3.45 。 含量测定： 吸收系数法：利用上述361nm处测定得到的吸收度，按其吸收系数E11cm=207 计算含量及标示量百分含量。,计算公式 维生素B12吸收光谱上有三个吸收峰：278 nm、361 nm、550 nm。维生素B12在361 nm的吸收峰干扰因素少，吸收又最强，中国药典2010版规定：以361 nm处吸收峰的比吸光系数E1%1 cm值（207）为计算含量依据 本品为注射剂，采用紫外吸收系数法测定含量，其计算公式为： 按吸收系数法定量计算： C样品（g/ml）=A36148.31,见P92,取对照品测A361做对照,A样品 B12含量= 100% A对照,C=ECL,六、思考题 如果