细胞因子检测技术及其应用.pptx

1、细胞因子检测技术及其应用,2015年12月30日,细胞因子检测的意义,细胞因子具有极强的生物学活性 , 可作为药物用于临床许多疾病的治疗中。 细胞因子发挥治疗作用的浓度非常低 , 治疗指数也比较低 , 剂量的增加一般都伴随明显的毒副作用。 另一方面 , 细胞因子在体内具有重要的病理作用。 在感染、 炎症、 自身免疫病、 AIDS等疾病状态下，有些细胞因子明显增高。 通过检测血清或组织液中的细胞因子含量 , 可以对诊断和治疗作出评价 ,具有重要的临床意义。根据检测原理和手段的不同 , 细胞因子的检测技术大致分为三类: 免疫学方法、 生物学方法和分子生物学方法。,一、细胞因子检测概述,一、细胞因子

2、的类型与作用特点 二、细胞因子检测的特点与方法,由非神经内分泌细胞产生的一大类与免疫应答活动密切相关的低分子蛋白与多肽。,细胞因子,细胞因子的类型与作用特点,1、细胞因子的分类 2、细胞因子的作用特点,以生物学作用进行划分的分类,白细胞介素（Interleukin） IL-1、IL-2、 IL-18 干扰素（Interferon） IFN-、IFN-、IFN- 肿瘤坏死因子（Tumor necrosis factor） TNF- 、 TNF- 集落刺激因子（Colony-stimulating factor） M-CSF、G-CSF 转化生长因子（Transforming growth fac

3、tor） TGF- 趋化因子（Chemokine） IL-8、GROs、MCP-1 生长因子（Growth factor） EGF、FGF、IGF、PDGF,TNFs,ILs,IFNs,TGFs,Chemokines,CSFs,各类细胞因子间关系,1、旁分泌（paracrine）、自分泌（autocrine）性 2、多源与同源性 3、高效性 4、多效性（pleiotropy） 5、丰余性（redundancy） 6、协同性 7、拮抗性 8、网络性,细胞因子,细胞因子,细胞因子受体,细胞因子受体,细胞因子的自分泌与旁分泌性,I L-2 I FN- TNF-,细胞因子的同源性与多源性,I FN-,

4、T细胞,T细胞,NK细胞,IL-4,肥大细胞,Th细胞,细胞因子的多效性,细胞因子的丰余性,IL-2 IL-4 IL-5,细胞因子的协同性,IL-4 IL-5,细胞因子的拮抗性,IL-4,I FN-,细胞因子的网络性,IL-3、IL-5、IL-4、IL-6、 GM-CSF,TNF TGF IL-1 IFN,IL-1 IFN,TNFIL-1 TGF,IFNIL2 IL-4,IFN IL2 IL-4 IL-5 IL-6,TNF IFN IL-1 TGF,TNF IL-1 IFN IL-5 GM-CSF G-CSF M-GSF,TNF,TNF IL-1 TGF,IL-1 IL-6 GM-CSF G-

5、CSF M-GSF,IL-1 IL-6,IL-1 IL-6 GM-CSF G-CSF M-GSF IFN,内皮细胞,成纤维细胞,T,B,细胞因子检测的特点与方法,1、检测的特点 2、检测的方法,细胞因子检测的特点,免疫原性较弱 样品含量低 样品具有时效性 生物效应特异性差,细胞因子检测的方法,免疫学检测方法抗原性检测 细胞生物学检测方法生物活性检测 分子生物学检测方法基因表达检测,二、细胞因子检测的方法与原理,一、细胞因子的细胞生物学检测 二、细胞因子的免疫学检测 三、细胞因子的分子生物学检测,细胞因子的细胞生物学检测,1、检测方法与原理 2、检测中的操作注意要点,检测方法与原理,细胞增殖或增

6、殖抑制试验 细胞病变抑制试验 细胞毒试验 细胞趋化试验,滤膜：计数受趋化细胞,趋化因子,细胞,趋化试验原理示意,检测中的操作注意要点,靶细胞的选择与培养 检测标本的制备 显示检测结果,靶细胞的选择与培养,1、对所测的细胞因子有特异的敏感性 2、易培养、保存、生物学特性稳定 3、有良好的生长状态 4、种属适配,各类细胞因子检测的常用靶细胞,细胞因子 实验系统 干扰因素 IL-1 D10（M）增殖法 IL-2、IL-4 EL-4（M）增殖法 IL-4 A352（H）增殖抑制法 IL-2 CTLL（M）增殖法 IL-4 IL-3 KG-1（H）增殖法 TF-1（H）增殖法 GN-CSF、IL-5 I

7、L-6、EPO IL-4 CTLL（M）增殖法 IL-2 IL-5 BCL-1（M）增殖法 IL-4,各类细胞因子检测的常用靶细胞,细胞因子 实验系统 干扰因素 IL-6 B9（M）增殖法 IL-4、IL-11 BM60（H）增殖法 IL-7 Clone-IXN/2b（M）增殖法 IL-8 中性粒细胞（M、H）趋化法 GM-CSF TF-1（H）增殖法 IL-3、IL-5 IL-6、IL-5 TNF/ L929 （M、H）细胞毒法 IFN wish（H）病变保护法 IFN- 、 IFN- L929（M）病变保护法 IFN- 、 IFN- ,检测标本的准备,1、分离特定的产生细胞 2、对产生细胞

8、进行诱导、激活 3、选择适当的收集时间,显示检测结果,1、细胞增殖状态的显示： 放射性核素掺入法、 胞内酶活性显示法 活细胞染色法 细胞荧光测定法 2、细胞毒或细胞病变状态的显示 活细胞染色法 胞内酶活性显示法 DNA断片测定法,细胞因子的免疫学检测,分泌型细胞因子的检测 细胞内细胞因子的检测,ELISPOT,细胞内细胞因子检测技术,激活,膜抗原标记,细胞内细胞因子标记,细胞因子的分子生物学检测,原位杂交技术 Rt-PCR技术,三、常用细胞因子的检测方法,一、IL-2的检测 二、IFN-的检测 三、TNF的检测,待检样品（细胞上清） 指示细胞（CTLL-2）,按不同稀释度加入,37C，16-2

9、0小时,加入3HTdR（1-5Ci）,37C，4-6小时,收集细胞,测定,白细胞介素-2的测定示意图,待检样品（细胞上清） 指示细胞（L929）,按不同稀释度加入,37C，4小时,37C，24-48小时,弃取上清，加入VSV,观察细胞病变（镜检或比色）,干扰素的测定示意图,肿瘤坏死因子的测定示意图,待检样品（细胞上清） 指示细胞（L929）,按不同稀释度加入,37C，24小时,弃取上清，洗涤,加入结晶紫染液，洗涤,加入细胞裂解液，比色,四、细胞因子受体的检测,一、细胞因子受体的类型 二、细胞因子受体的检测,细胞因子受体的类型,膜型细胞因子受体 分泌型细胞因子受体,细胞因子受体的检测方法,膜型细胞因子受体的检测 配体检测法 抗体检测法 分泌型细胞因子受体的检测 标记抗体检测法,小结,细胞因子的检测技术发展较快 , 不断有新方法出现 ,但是基本上都是利用其生物活性或免疫原性。一方面由于待测生物样本中可能会存在细胞因子抗