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文档简介

实验四,目的DNA片段的回收,一、实验目的,1. 学习与掌握DNA电泳的方法 2. 掌握凝胶回收kit回收DNA,二、实验原理,电荷效应 分子筛效应 硅胶膜吸附,凝胶回收kit提纯原理,MB打断H键;蛋白解离 MW洗去剩余胶液及杂质 EB洗脱吸附DNA,三、器具及药品试剂,琼脂糖、电泳buffer、EtBr、回收试剂盒、无水alc 电泳设备、微波炉、恒温水浴、紫外灯、离心机、EP管(1.5 ml)、移液器及枪头、刀片,四、实验步骤,1. PCR产物的凝胶电泳 0.4g Aga40ml TAE,煮沸 冷却至55,2l EtBr 倒胶,插梳子,凝固30min 加TAE,浸过胶面 点样: 2l上样液+样品; marker 80V电泳,观察,2. 切胶与溶胶,称EP管,算胶重 UV302nm下切胶,1mg胶加1l MB 55水浴,隔2摇匀,3. DNA结合,切胶1.5ml EP管 加MB,55溶胶 胶液吸附柱收集管 12000g,离心1,4. 清洗与洗脱,600l MW吸附柱 12000g,离心30s 重复;离心2 加25l EB 12000g,离心1,五、注意事项,1. 安全性: EB,UV 2. Aga彻底熔化 3. 垂直上拔梳子 4. 忌点样孔穿透,5. 尽量低电压 6. 长波切胶 7. 胶块尽量小 8. 凝胶全熔,六、作业,1

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