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文档简介
1、农药残留试剂盒的评价方案1 .评价项目:农药残留2 .判定标准:2.1检测酶催化剂活力:吸光率在0.3之间。2.2假阳性率152.3假阴性率52.4重现性: cv,批间差异10%。2.5最低检测限:最低检测样品中农药残留量的抑制率接近50%范围的能力。2.6样品的适用范围:样品中色素和二次生质能源对试剂本身的影响最低。3 .评价方法:3.1样品准备:将20min的白菜、韭菜、菠菜洗净浸泡,切成东鳞西爪备用。3.2仪器易耗品的准备:多通道IQMC、恒温箱、电子天平、容量瓶(500ml )、比色皿(10个)、移液器枪(5ml,200ul )、枪头(5ml,200ul )3.3实验原理:酶催化剂抑制
2、率法。 在某些条件下,有机磷和乌拉坦类农药对胆碱酯酶有抑制作用,其抑制率与农药浓度呈正相关。 通常,胆碱酯酶催化底物水解作用,其水解作用产物与显色剂反应生成黄色物质。 用分光光度修正在412nm下使吸光率变化一定时间,计算抑制率。 抑制率50%表明样品中的农药超标。抑制率=(a0-at)/a0x100%,A0:空白溶液3min的吸光率变化值。 At :样品溶液3min的吸光率的变化值。3.4试剂配置:3.4.1配置缓冲液:将一包缓冲液粉末放入锥形瓶中,取一定量的脱络离子水漂亮地洗涤缓冲液粉末,定容至500ml,溶解于一盏茶中准备。3.4.2显色剂的配置:取10ml配置的缓冲液,放入显色剂瓶中,
3、混合。3.4.2配置酶制剂:将10ml脱络离子水装入酶制剂瓶中,混合。3.5程序说明:测定3.5.1酶活力:将2.5ml脱络离子水放入比色皿中,分别加入酶液,加入显色剂100ul,放入相应的通道内,然后调为零。 之后放入恒温箱温育15分钟。 然后加入基质100ul,装入通道内,测定吸光率。3.5.2实验步骤:3.5.2.1空白对照0 :将缓冲液2.5ml放入比色皿中,分别加入100ul的酶制剂和显色剂后,放入恒温箱中进行中温培养。 将温润的比色皿放入100ul基质中,放入机器对应的通道中,喀呖声后喀呖声调零。3.5.2.2样品检验:从3.1中的白菜样品2g向5oml离心管中装入10ml缓冲液浸
4、泡2分钟。 将浸泡过的样品液2.5ml置于比色皿中,分别加入100ul的酶制剂和显色剂后,装入恒温箱中进行中温培养。 将温驯的比色皿放入100ul基质,放入机器对应的通道中,喀呖声检查。3.5.3实验的具体方案:3.5.3.1假阴性率、假阳性率、重现性的判断:分别准备了3.1中浓度0.5ppm的普罗夫桑黄素、0.2ppm的减多威、0.02ppm的百威、0.2ppm的敌畏、0.1ppm的敌百虫白菜样品,按照3.5.2.2的顺序分别进行10次(表1 )表1普罗夫罗桑黄素加纯量0ppm0.5ppm次数1234567891012345678910灭多威加纯量0ppm0.2ppm次数1234567891
5、012345678910库拜韦加纯量0ppm0.02ppm次数1234567891012345678910恐敌加纯量0ppm0.2ppm次数1234567891012345678910敌百虫加纯量0ppm0.1ppm次数12345678910123456789103.5.3.2最低检测限:不制备3.1中浓度为0.5ppm的普罗夫桑黄素、敌畏灭绝多威、0.02ppm的百威白菜样品。 按照3.5.2.2的顺序分别重复5次实验,观察结果。 (表2 )表2普罗夫罗桑黄素0ppm0.25ppm0.25ppm11234512345恐敌0ppm0.1ppm0.2ppm11234512345库拜韦0ppm0.
6、01ppm0.02ppm112345123453.5.3.2样品的适用范围:根据国家发布的指导意见,以白菜为对照,选取农残试剂产生假阳性的样品,以0.5ppm的普罗夫桑黄素为例,按照3.5.2.2的程序分别进行5次重复实验,并观察结果。 (表3 )表3浓度样品白菜韭菜菠菜0ppm1112223334445550.5ppm1112223334445554结论根据以上内容,表1可以通过修正计算得到假阳性率和假阴性率,以及试剂盒的批次间差CV空白样品中的假阳性率=阳性个数/总阴性数X100%标记样品中的假阴性率=阴性个数/总阳性数X100%CV=标准离差/平均值由表2可知,1/2检测限能否检测出阳性。由表3的结果可知,样品本身不会对试剂本
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