1 沉淀反应.ppt

1、实验一,潘云华,实验内容,实验室规则 免疫学检测技术 沉淀反应 双向琼脂扩散试验（操作/人） 对流免疫电泳（示教） 录像 血清免疫球蛋白定量技术,实验要求,微生物广泛分布于自然界和人的体表与体腔。为此，实验操作中必须强调无菌操作，树立无菌、灭菌、消毒的正确观念。 微生物学实验室所接触的材料多为病原微生物本身或含有病原微生物的检材，具有感染性，如不慎发生意外，不仅实验人员本身可遭受感染，而且还可传染给他人，引起传染和流行，因此在实验时应严格遵守实验室规则。,实验室规则,进实验室应穿白大衣，离开时脱下反折叠好。 除实验必须的实验指导、笔记本等外，其他物品尽量不带入实验室，更不能放在实验台上。 实验

2、操作应严格按照实验指导和教师的说明进行，以期获得正确结果。 实验室内应保持安静、守秩序。绝对禁止饮食、吸烟、用嘴湿润铅笔和标签等，以免发生感染事故。 实验过程中如因不慎发生割破皮肤、培养物破损、传染物外溢以及菌液吸入口中等意外时，应及时报告教师以便紧急处理。,损坏物品及时报告，登记，根据情况进行赔偿。 实验室内任何物品，特别是实验材料，未经教师许可，一律不准带出室外，使用器材药品要爱护，并注意节约。 每次实验之后应将所用物品放回原处。需要培养或消毒处理的物品及时送到指定的地点。关好门窗、水电。 离开实验室前，应在消毒液中将双手浸泡5-10分钟，再用清水洗净，或用肥皂洗手。 值日生：打扫、收拾实

3、验物品,免疫学检测技术原理,一、体外抗原抗体结合反应的特点 特异性 可逆性 比例性 两个阶段 第一阶段：特异性结合不可见 第二阶段：免疫复合物沉积可见,影响抗原抗体反应的因素,*电解质：0.85%NaCl *酸碱度：pH69 *温度：1540 *酸凝集：当pH为3左右时，接近细菌Ag的等电点，可出现非特异性凝集。,二、免疫学检测的对象及应用,检验对象 免疫系统组分：评价免疫功能；辅助临床诊断 抗原抗体：诊断 任务：辅助临床诊断,检测抗原和抗体的体外试验,沉淀反应：可溶性抗原抗体反应。 凝集反应：颗粒性抗原或抗体的抗原抗体反应。 免疫标记：酶标记、放射性核素标记、荧光素标记,沉淀反应,原理:可溶

4、性抗原与抗体发生特异性结合，在比例合适，有电解质存在下形成肉眼可见的白色沉淀线，用于抗原或抗体检测。 分类 液体内沉淀反应：免疫比浊 凝胶扩散试验：双向琼脂扩散、单向琼脂扩散试验、免疫电泳（如对流免疫电泳）,双向琼脂扩散试验（操作/人）,原理：在琼脂内抗原和抗体各自向对方扩散，在最恰当的比例处形成抗原抗体沉淀线，观察这种沉淀线的位置、形状以及对比关系，可作出对抗原或抗体的定性分析。,方法步骤,浇板：4ml热琼脂 打孔：冷却后，梅花状孔 加样：12微升/孔，加满不要溢出。 放湿盒，37c，24h。,生理盐水,1:8人血清,1:2人血清,抗人血清,结果观察,抗原孔与抗体孔间有无沉淀线 有：说明抗原抗体相对应，定性测定 无：说明抗原抗体不对应，定性测定 有几条：纯度测定 如有三条，说明有三对免疫复合物，即抗原或抗体有三种组分,抗原间性质测定 1）相接 抗原的性质完全相同 2）相交 完全不同 3）相切 部分相同,对流免疫电泳（结果观察）,原理：碱性条件下，抗原带负电，电场中向阳极