色谱定性定量分析方法

1、china pharmaceutical university,色谱定性定量分析方法,company logo,色谱分析方法验证,色谱定量分析方法,联用技术定性方法,色谱定性分析方法,company logo,一、色谱定性分析方法,保留时间 tr 相对保留时间 rrt，t/tr 相对保留值 , (t-t0)/(tr -t0） 保留指数 i,company logo,二、色谱-光谱联用技术定性,广泛用于药物中的杂质、体内外代谢产物的结构鉴定,company logo,气相色谱-质谱联用,多用于分离易挥发、热稳定、极性小的化合物,gc-ms：采用ei离子源。 ei：获得分子离子峰及丰富的分子结构信

2、息；,company logo,分离对象较广,lc-ms： 采用api 离子源; 一级质谱获得分子量信息； 高裂解电压（cid）或二级质谱（ms/ms）获得分子结构信息。,液相色谱-质谱联用,company logo,例：盐酸乙哌立松片主要降解产物的定性鉴别,company logo,鉴定要点： 1、利用lc-uv选择最佳lc分离条件，并确定主峰与降解产物的峰位；,供试品溶液的lc-uv图,company logo,2、选择合适的离子源，利用lc-ms获得杂质的准分子离子峰。,lc-esi-ms的 总离子流色谱图,lc-apci-ms的 总离子流色谱图,company logo,3. 获得降解

3、产物准分子离子峰的裂解信息。 方式一：在apci条件下采用较高的cid电压或二级质谱裂解m/z 175.3，获得碎片信息； 方式二：在gc-ms(ei)质谱获得分子离子峰及其裂解途径；,company logo,4、利用原药的质谱裂解途径确定降解产物的可能结构；,杂质yj的结构,company logo,apci,ei,company logo,联用技术定性鉴定规律,1、分析物质结构，确定色谱分离模式； 2、以常用检测器（gc:fid/lc:uv）为手段，优化色谱分离条件，确定待鉴定组份峰位；,company logo,3、根据化合物结构，选用合适的光谱技术鉴定； 4、依据光谱信息进行结构鉴定

4、： 根据质谱提供的分子量和分子碎片信息，结合原药的光谱信息初步推断未知物结构；,company logo,三、色谱定量分析方法,1、色谱信号的测量: 色谱峰峰高与峰面积反映检测器对样品的响应值，定量分析中峰面积更为常用；,2、定量分析的方法 面积归一化法；外标法；内标法；标准曲线法,company logo,三、不同检测器的色谱信号与物质浓度关系 fid、ecd、uv检测器的响应（峰面积）与样品的浓度呈线性关系； elsd响应的自然对数与样品的浓度或质量呈线性关系； 质谱（ms-esi）检测器高浓度时的响应与样品的质量可能呈二次或更复杂的方式。,company logo,四、色谱分析方法验证,

5、目的： 证明所采用的色谱分析方法适合于相应的检验 要求，判断能否用于药品分析。 效能指标：评价分析方法的尺度 效能指标包括: 精密度、准确度、专属性、检测限、定量限、线性与范围、耐用性、稳定性、系统适用性等,company logo,药品质量标准分析方法验证 药物制剂人体生物利用度和生物等效性试验指导原则 药物稳定性试验指导原则 缓释、控释制剂指导原则,不同分析测定方法的要求,company logo, 专属性（specificity）: 意义：指有其他成分可能存在情况下，采用的方法能准确测定出被测物的特性。 内容： 药物制剂含量测定时的专属性考察内容： a、杂质中间体与主成份的分离情况； b

6、、破坏性试验产生的降解产物与主成份的分离情况：酸、碱、热、氧化、光破坏 c、辅料是否干扰测定。,company logo,准确度（accuracy）： 意义：测量值与真实值接近的程度。 药物制剂的含量测定以回收率表示。 内容：即通过在空白基质中加入已知量不同浓度的对照品，比较测定值和加入值确定。 一般在期望浓度的80%、100%、120%三个水平量，各测定三次，回收率均值在98-102%。,company logo,线性范围（linearity range）： 意义： 待测物浓度与响应值成线性关系的浓度范围； 内容：用不同浓度对照品溶液分析测定（至少5种），以峰面积与浓度进行线性回归。 制剂分

7、析时方法要求r不小于0.999；生物样品分析要求r不小于0.99，与准确度的要求有关系。 注意：与定量方法中标准曲线法的异同。,company logo,精密度（precision）： 意义：同一样品多次测量值之间相互接近的程度。 内容： 重复性: 同一实验室,同一人多次测定的精密度 中间精密度: 同一实验室，不同人，不同仪器测定的精密度 重现性: 不同实验室，不同人测定的精密度 制剂分析时精密度rsd应不小于2%。,company logo,检测限和定量限（lod and loq）： 意义： lod是能检测到的最低量，s:n=3:1。 loq是能定量测定的最低量，s:n=10:1。 内容： 生物样品分析时定量下限即为标准曲线最低浓度点，定量上限即位标准曲线最高浓度点。,company logo,稳定性（stability）： 意义： 考察分析样品与试剂在一定时间内稳定性。 内容： 根据样品与试剂测定时实际可能所处的环境进行考察。,company logo,耐用性（ robustness ）： 意义： 考察测定条件发生小变动时测定结果的变化。 内容： 流动相的组成和