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文档简介

1、,实验五 蔗糖酶的活力测定,实验目的：,掌握3,5二硝基水杨酸测定还原糖的原理和方法 掌握酶的活力测定及其计算方法,实验原理：,蔗糖酶是一种水解酶，它催化蔗糖水解为等量的葡萄糖和果糖。 本实验利用3,5-二硝基水杨酸溶液与还原糖共热后被还原成棕红色的氨基化合物。在一定浓度范围内，还原糖的量与棕色物质颜色深浅程度成一定比例关系，可用分光光度计进行测定。,酶活力单位：在35，0.1mol/L乙酸钠缓冲液（pH4.6）中每分钟能使2.5%蔗糖溶液释放1 mg还原糖的酶量定义为一个活力单位（U）。,试剂与器材,蔗糖酶溶液 5%的蔗糖溶液 DNS试剂（3,5二硝基水杨酸试剂） 1mg/ml的葡萄糖标准液

2、,试剂,器材,微量移液器 移液管 刻度试管 水浴锅 分光光度计 比色杯 卫生纸,操作步骤,1.葡萄糖标准曲线的制作,以葡萄糖（mg）含量为横坐标，A540值为纵坐标，绘出工作曲线。,制作工作曲线的注意事项,1.分光光度计的使用 测样时，光吸收值A应在0.10.8之间，否则，缩小或加大样品的稀释倍数，重测！,2.比色杯的使用： 向杯中加样品时，注意加样到比色杯的2/3处； 如样品外溢，用卫生纸向一个方向擦至透明； 测定样品时，从浓度低到高测定； 测定完成后，一定用洗瓶中的蒸馏水洗干净,然后倒置在滤纸上吸干； 任何情况下都不许把比色杯放在仪器盖上!,2.蔗糖酶的活力测定,取两只试管，各加入0.5ml酶液，其中一支试管A置于100沸水浴2min（做参比），另一支试管B做测定管； 然后在两支试管各加入0.5ml 5%的蔗糖液，置于35水浴，准确计算反应时间10min，然后取出各加入1mlDNS溶液终止反应； 再置于沸水中水浴5min，取出冷却后定容至10ml测定540nm吸光值。,3.蔗糖酶活力的计算,（1）获得葡萄糖标准曲线： y=ax+b x=（y-b）/a 蔗糖酶活力=x*n/0.5*10 (单位：U/ml） n：稀释倍数 0.5：0.5ml酶液 10：10 min,酶活力单位：在35，0.1mol/L乙酸钠缓冲液（pH4.6）每分钟能使2.5%蔗糖溶液

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