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文档简介

1、软琼脂克隆形成实验（soft agar assay）,软琼脂克隆形成实验,一、实验原理 某些恶性肿瘤细胞，不仅在贴壁状态下能增殖，在悬浮状态下也能增殖，其在软琼脂中形成克隆能力反映其恶性增殖程度，这种方法可用于细胞分化的基础研究和临床肿瘤治疗检验等方面。 让细胞处于不贴壁以及单细胞状态，模拟体内细胞处于半固液的情况，在此情况下检测细胞的增殖能力。单细胞处于软琼脂中，就如同胰酶消化后的状态，此后，细胞继续增殖分裂，形成单克隆。 软琼脂培养法常用来检测肿瘤细胞和转化细胞的增殖能力。 克隆形成率反映细胞群体依赖性和增殖能力两个重要性状。由于细胞生物学性状不同，细胞克隆形成率差别也很大正常细胞克隆形成

2、率弱，肿瘤细胞强。,软琼脂克隆形成实验,二、实验方法 配制1.2%和0.7%的琼脂糖，高压灭菌后置于55的水浴锅中，目的是为了使其保持融化状态。 配制含20%fbs、2x双抗ps的2x1640培养基，用0.2微米的滤器过滤除菌。 铺下层胶：1.2%的琼脂糖胶与2x培养基1:1混合，加入到6孔板中，每孔1.5ml,室温等其凝固。 细胞计数：将细胞用pbs的洗一遍，用胰酶消化终止后离心，加入新的培养基混匀稀释，调整细胞浓度为5x104/ml,每孔加入100ul的细胞悬液。,软琼脂克隆形成实验,铺上层胶：0.7%的琼脂糖胶与2x培养基1:1混合，加入100ul的细胞悬液，即5000个细胞，混合均匀后，每孔加入1.5ml。 放入37，co2培养箱培养，隔三天后补加培养基，约3周后收细胞。计数比较对照组与实验组的细胞数量，最后进行分析，计算单克隆形成率。,软琼脂克隆形成实验,三、注意事项 软琼脂培养法常用检测肿瘤细胞和转化细胞系。 试验中琼脂与细胞相混时，琼脂温度不宜超过40。 接种细胞的密度每平方厘米不超过35个，一般6cm的平皿接种1000个细胞。 软琼脂克隆形成实验主要用于非贴壁生长的细胞

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