标准解读
《GB/T 38165-2019 人体外周血中循环游离DNA浓度检测 基于Alu序列实时荧光PCR法》是一项国家标准，旨在规范通过Alu序列实时荧光定量PCR技术对人体外周血中的循环游离DNA（cfDNA）进行浓度测定的方法。该标准适用于临床实验室、科研机构等需要对血液样本中的cfDNA含量进行准确测量的场合。
根据此标准，首先需准备合适的实验材料与试剂，包括但不限于：外周血样本、DNA提取试剂盒、特异性针对人类基因组Alu序列设计的引物和探针以及用于实时荧光PCR扩增的相关耗材。接着，按照规定步骤从全血样品中分离出无细胞DNA，并利用特定的Alu引物及探针体系，在荧光定量PCR仪上完成目标片段的扩增过程。通过比较未知样品与已知浓度标准品之间Ct值的关系，可以计算得到待测样本中cfDNA的具体含量。
整个检测流程强调了操作过程中质量控制的重要性，如设置空白对照、阳性对照及内参等措施来确保结果准确性；同时对于数据处理也给出了具体指导，比如如何利用标准曲线法求得样本浓度值等。此外，还详细描述了可能影响实验结果的因素分析及其应对策略，帮助实验人员更好地理解和掌握该方法的应用条件和技术要点。
本标准为我国在循环游离DNA领域提供了统一的技术规范，促进了相关研究工作的标准化发展。
如需获取更多详尽信息，请直接参考下方经官方授权发布的权威标准文档。
....
查看全部
- 现行
- 正在执行有效
- 2019-10-18 颁布
- 2019-10-18 实施
文档简介
犐犆犛０７．０８０
犃４０
???????????
犌犅／犜３８１６５—２０１９
??????????犇犖犃????
??犃犾狌??????犘犆犚?
犇犲狋犲犮狋犻狅狀狅犳犮犻狉犮狌犾犪狋犻狀犵犮犲犾犾犳狉犲犲犇犖犃犮狅狀犮犲狀狋狉犪狋犻狅狀犻狀犺狌犿犪狀狆犲狉犻狆犺犲狉犪犾犫犾狅狅犱—
犚犲犪犾狋犻犿犲犘犆犚犿犲狋犺狅犱犫犪狊犲犱狅狀犃犾狌狊犲狇狌犲狀犮犲
２０１９１０１８??２０１９１０１８??
??????????
????????????
??
??
?????ＧＢ／Ｔ１．１—２００９???????。
??????????????????（ＳＡＣ／ＴＣ３８７）?????。
???????：???????、???????、????????????。
????????：??、???、??、??、???、??、??、???。
Ⅰ
犌犅／犜３８１６５—２０１９
??????????犇犖犃????
??犃犾狌??????犘犆犚?
１??
??????????????????????（ＤＮＡ）??Ａｌｕ????????????
??（ＰＣＲ）??????。
??????????ＤＮＡ???Ａｌｕ???????。
２???????
??????????????????。??????????，????????????
?。???????????，?????（????????）??????。
ＧＢ／Ｔ６６８２??????????????
ＧＢ１９４８９???????????
３?????
?????????????。
３．１
????犇犖犃犮犻狉犮狌犾犪狋犻狀犵犮犲犾犾犳狉犲犲犇犖犃；犮犳犇犖犃
?????????????????????????ＤＮＡ。
３．２
????犘犆犚狉犲犪犾狋犻犿犲犘犆犚
?ＰＣＲ???????????，???????????????ＰＣＲ????，?????
??????????。
３．３
犆狋?犮狔犮犾犲狋犺狉犲狊犺狅犾犱
??????????????????????????。
３．４
犃犾狌??犃犾狌狊犲狇狌犲狀犮犲
?????????????????????。
?：Ａｌｕ????７０％～９８％???，?????????５％～１０％，????????３００ｂｐ。
４??
???????????ＤＮＡ????????，??????????ＤＮＡ???????
???，??????ＰＣＲ??，???????????Ａｌｕ??????１１５ｂｐ?２１９ｂｐ??
?，????????ＤＮＡ?????????，Ｃｔ?????，??????。????????
??????Ａｌｕ?????，???ｃｏｐｉｅｓ／μＬ??。
１
犌犅／犜３８１６５—２０１９
５??
??Ａｌｕ?????????１。
?１????
??????（５′３′）???????／
ｂｐ
Ａｌｕ１１５ＦＣＣＴＧＡＧＧＴＣＡＧＧＡＧＴＴＣＧＡＧ２０
Ａｌｕ１１５ＲＣＣＣＧＡＧＴＡＧＣＴＧＧＧＡＴＴＡＣＡ２０
１１５
Ａｌｕ２１９ＦＣＡＣＧＣＣＴＧＴＡＡＴＣＣＣＡＧＣＡＣＴＴＴ２３
Ａｌｕ２１９ＲＡＴＣＴＣＧＧＣＴＣＡＣＴＧＣＡＡＣＣＴＣＣ２２
２１９
６??
??????，?????????。??????ＧＢ／Ｔ６６８２???????。
６．１????犇犖犃?????
??????????????ＤＮＡ?????。
６．２????犘犆犚?????
２０μＬ?????１Ｕ～２Ｕ?
犜犪狇
ＤＮＡ???、１×ＰＣＲ???、２．０ｍｍｏｌ／Ｌ?
Ｍｇ
２＋、
０．２Ｕ
ＵＮＧ?（???犖????）、０．２ｍｍｏｌ／Ｌ?ｄ（Ａ，Ｃ，Ｇ）ＴＰｓ（ｄＡＴＰ????????，ｄＣＴＰ??
??????，ｄＧＴＰ????????）、０．２ｍｍｏｌ／ＬｄＵＴＰ（???????）、ＳＹＢＲＧｒｅｅｎＩ??
??。?????????ＳＹＢＲＧｒｅｅｎ??????ＰＣＲ?????。
６．３犇犖犃????
???Ａｌｕ??????ＤＮＡ????，?????????????????。
６．４????（犚犗犡）
??????????????。
７????
７．１????ＰＣＲ?。
７．２?????。
７．３?????。
７．４?????：０．５μＬ～１０μＬ、
１０μＬ～１００μＬ、２０μＬ～２００μＬ、１００μＬ～１０００μＬ。
８????
８．１????犇犖犃??
????ＤＮＡ???????：
２
犌犅／犜３８１６５—２０１９
ａ）２ｍＬ??????４℃?１６００×犵??１０ｍｉｎ，?????????１．５ｍＬ?????，
???????????；
ｂ）???４℃１６０００×犵??１０ｍｉｎ??????，???????????，?????
??；
ｃ）???５００μＬ??????１ｍＬ?????（Ｂｉｎｄｉｎｇｂｕｆｆｅｒ）３５μＬ（２０
μｇ
／μＬ）???Ｋ
６０μＬ（１
μｇ
／μＬ）ｃａｒｒｉｅｒＲＮＡ??????，????????１ｍｉｎ～２ｍｉｎ；
ｄ）????????１００００×犵，４℃??５ｍｉｎ，?????????１．５ｍＬ????，???
?１０μＬ????，??，??１５ｍｉｎ～２０ｍｉｎ；
ｅ）?????????１．５ｍＬ????，??????，??１ｍｉｎ～２ｍｉｎ，????；
ｆ）???????５００μＬ，?????????，??１ｍｉｎ～２ｍｉｎ，????；
ｇ）??７０％??５００μＬ，?????????，??１ｍｉｎ～２ｍｉｎ，????；
ｈ）??４０μＬＴＥ???，５５℃???１０ｍｉｎ（?３０ｓ????）；
ｉ）??????，??１ｍｉｎ～２ｍｉｎ，???????????，???????ＤＮＡ；
ｊ）????????ＤＮＡ??????????????ＰＣＲ????。
?：???????????????????ＤＮＡ。
８．２犇犖犃?????????
?ＤＮＡ????????????。????????????ＤＮＡ?????????
２８０Ｗ、????５ｓ、????５ｓ、?????２０ｍｉｎ???????３００ｂｐ～５００ｂｐ??，???
????２????????。
?１：ＤＮＡ???????????????????????。
?２：??????，???１．５％?????????ＤＮＡ??????３００ｂｐ～５００ｂｐ。
?２犇犖犃??????????
ＤＮＡ???????
????
犡×１０
３ｃｏｐｉｅｓ／
μＬ
?１０μＬ???????９０μＬ??
犡×１０
２ｃｏｐｉｅｓ／
μＬ
?１０μＬ犡×１０３ｃｏｐｉｅｓ／μＬ???????９０μＬ??
犡×１０
１ｃｏｐｉｅｓ／
μＬ
?１０μＬ犡×１０２ｃｏｐｉｅｓ／μＬ???????９０μＬ??
犡×１０
０ｃｏｐｉｅｓ／
μＬ
?１０μＬ犡×１０１ｃｏｐｉｅｓ／μＬ???????９０μＬ??
犡×１０－１ｃｏｐｉｅｓ／μＬ
?１０μＬ犡×１００ｃｏｐｉｅｓ／μＬ???????９０μＬ??
?：犡??????ＤＮＡ???????，ＤＮＡ???????????。
８．３????犘犆犚??
８．３．１????犘犆犚????
?????ＳＹＢＲＧｒｅｅｎ?，??３??????，?????３???，???????ＤＮＡ?
??????????，???????ＰＣＲ????１９μＬ／?，????????????１μＬ／
?，???????，????，????ＰＣＲ??。
３
犌犅／犜３８１６５—２０１９
?３????犘犆犚????（???２０μ犔）
???????／μＬ
????ＰＣＲ?????（２×）１０
ＰＣＲ????（１０ｍｍｏｌ／Ｌ）０．４
ＰＣＲ????（１０ｍｍｏｌ／Ｌ）０．４
???８．２
ＤＮＡ??（????????）１
８．３．２????犘犆犚????
?????ＰＣＲ??????????ＰＣＲ?，??４???????。
?４????犘犆犚??????
??１（１???）??２（１???）
??３（４０???）
??????????（????）
５０℃９４℃９４℃６０℃
２ｍｉｎ１０ｍｉｎ５ｓ３０ｓ
?：??????????、????????????????。
９????
?????３???，???????????［??ａ）、ｂ）］?????：
ａ）???????????，?????????????????????，???????
???????（?犚２≥０．９９）?????。???????????????３?。
ｂ）???????????Ｃｔ???????０．５?，????????。
??????７０％～１１０％??；
?????????犚２≥０．９９；
????：Ｃｔ?≥３０．０，?????Ｃｔ???３０．０??????????Ⅰ（ＤＮａｓｅⅠ）????
??ＰＣＲ??????????，??ＤＮａｓｅⅠ?????。
１０????
???????，?????????，??????????????Ｃｔ?，?Ｃｔ?????、
??????????????（
ｌｇ
犡０）??????，?????????????，??????
??Ｃｔ????（１）。????????Ａｌｕ??１１５ｂｐ???Ａｌｕ??２１９ｂｐ??????。
犡０＝犕×（１＋犈）
－Ｃｔ
…………
温馨提示
- 1. 本站所提供的标准文本仅供个人学习、研究之用，未经授权，严禁复制、发行、汇编、翻译或网络传播等，侵权必究。
- 2. 本站所提供的标准均为PDF格式电子版文本（可阅读打印），因数字商品的特殊性，一经售出，不提供退换货服务。
- 3. 标准文档要求电子版与印刷版保持一致，所以下载的文档中可能包含空白页，非文档质量问题。
最新文档
- 房地产管理法责任制度
- 执业药师岗位责任制度
- 扶梯岗位责任制度
- 技术责任制考核制度
- 护士责任制度
- 拆迁安全生产责任制度
- 换气站岗位责任制度
- 推脱责任制度
- 支架维护包机责任制度
- 政务大厅岗位责任制度
- 2026年安徽水利水电职业技术学院单招职业适应性测试题库带答案详解
- 2025年江苏城乡建设职业学院单招职业技能测试题库（含答案）
- 2026年人教版八年级道德与法治下册全册知识点（分课编排）
- 2026广西河池市姆洛甲文化旅游投资有限公司招聘文旅策划主管1人考试参考试题及答案解析
- 2026国网吉林省电力有限公司招聘129人（第二批）考试参考题库及答案解析
- 25188442第1课《个性与从众交响》课件【北师大版】《心理健康》六年级下册
- 胆囊切除术 胆总管切开取石术
- 幼小衔接数学练习题10套打印版
- 灭火器消防栓检查维护记录表
- 儿童炎症性肠病
- 人音版初中音乐九年级下册教学计划
评论
0/150
提交评论