试验考试复习内容(细菌鉴定技术)1

1、细菌鉴定技术常用细菌的生化反应，利用糖发酵试验吲哚试验(印度基质试验)甲基红试验v-p(voges-proskauer )试验柠檬酸盐(或柠檬酸盐)，对试验克二糖铁元素(kia )复合试验动力、吲哚及乌土卫五酶(unsee )进行鉴定。 方法将大肠菌群和伤寒沙门氏菌分别接种葡萄糖、乳糖发酵管，在35c培养18-24h的观察结果。 1 .糖发酵试验【结果】: 首先确定细菌是否生长，细菌生长者培养基呈混浊状：1)不分解糖，培养基的颜色与接种前相同，“-”表示2 )分解糖不产生酸的瓦斯气体发生剂，培养基从紫色变为黄色，“ ”表示3 )分解糖酸产生瓦斯气体发生剂大肠菌群分解葡萄糖和乳糖的产酸剂，伤寒菌

2、分解葡萄糖的产酸剂，不分解乳糖。2 .吲哚试验(印度基质试验)、【原理】:一些细菌具有色阿摩尼亚酸酶催化剂，分解蛋白胨中的色氨酸，生成吲哚，与吲哚试剂形成红色化合物。 方法将大肠菌群和伤寒沙门菌分别接种蛋白胨水培养基中，35c18-24h后，加入吲哚试剂数滴，静置分层，观察结果。 (结果) :培养物液面上层玫瑰红色阳性，不变色者阴性。 大肠菌群为阳性，伤寒菌为阴性。 (3.甲基红试验，【原理】:部分细菌将葡萄糖分解生成焦磷酸，再将焦磷酸分解成甲酸、冰乙酸等酸性物质，因此，培养基的ph在4.5以下，加入甲基红指示剂后呈现红色(阳性)的部分细菌将葡萄糖分解生成的酸再分解成醇和酮方法：在大肠菌群和瓦

3、斯气体发生剂肠杆菌分别接种葡萄糖蛋白胨水的培养基中，加入35c18-24h、甲基红指示剂；观察2-3滴结果。 【结果】:红色为阳性，黄色为阴性。 大肠菌群为阳性，瓦斯气体发生剂肠杆菌阴性。4.v-p(voges-proskauer )试验，【原理】:部分细菌分解葡萄糖生成焦磷酸，进一步脱羧生成乙酰甲基甲醇，在盐化学基性环境下被氧化为二乙酰，后者与蛋白胨中所包含的精氨酸中所包含的胍化学基发生作用方法：将大肠菌群和瓦斯气体发生剂肠杆菌分别接种葡萄糖蛋白胨水中，加入35c、24-48h、vp试剂甲液和乙液各1滴，仔细摇匀观察。 【结果】:红色为阳性，阴性则需培养4h观察，无红色者阴性。 大肠菌群阴性

4、，瓦斯气体发生剂肠杆菌阳性。5 .柠檬酸盐(或柠檬酸盐)利用试验【原理】:细菌作为唯一的氮气源可以利用铵盐，当柠檬酸盐是唯一的碳源时，在柠檬酸盐培养基中生长，将柠檬酸盐分解为碳酸盐，使培养基变成碱，指示剂溴麝香草酚蓝由绿色变为深蓝色【方法】:大肠菌群和气体【结果】:出现菌苔，培养基呈深蓝色成阳性。 细菌不能生长，培养基不变色(绿色)为阴性。 瓦斯气体发生剂肠肝菌为阳性，大肠菌群阴性。6 .克二糖铁元素(kia )复合试验、【原理】:该培养基用酚红指示剂在酸性时呈黄色，在碱性时呈红色。 细菌使乳糖和葡萄糖发酵产生酸的瓦斯气体发生剂，斜面和底层都呈黄色，有气泡。如果只使葡萄糖发酵而不使乳糖发酵，由

5、于葡萄糖的含量少，斜面产生的少量酸与空气接触后氧化挥发，斜面部分能够保持原来的红色的底层，相对来说是因为在缺氧状态细菌使葡萄糖发酵而生成的酸类不氧化挥发，保持黄色。 细菌分解蛋白一旦产生硫化氢，便与硫化第一铁元素起作用生成黑色的硫化铁元素，将培养基变黑。 6 .克氏二糖铁元素(kia )复合试验【方法】:将受检菌接种于克氏二糖铁元素培养基(底层穿刺、上斜面划线)、35c、24h中进行观察。 【结果】:使乳糖和葡萄糖酸产生瓦斯气体发生剂发酵时，上层和下层均呈黄色，仅使产生气泡的葡萄糖发酵而不使乳糖发酵时，下层保持黄色，上层保持红色。 基底变黑，表示该菌产生硫化氢，生成黑色的硫化铁元素沉淀。 二糖

6、铁元素培养基、标准管、痢疾杆菌ka斜面： k红色底层： a黄色、伤寒菌ka、大肠菌群aa、无瓦斯气体发生剂、h2s、h2s、无瓦斯气体发生剂、7 .具有色阿摩尼亚酸酶催化剂的细菌可以将色氨酸分解而产生吲哚， 添加吲哚试剂后培养基上层吲哚变红，具有乌土卫五酶的细菌分解尿素生成阿摩尼亚，可使整个培养基变成碱红色的具有动力的细菌沿穿刺线扩散生长。 方法将大肠菌群和普通变形杆菌穿刺线接种miu培养基中，在35c、18-24h观察动力和乌土卫五酶反应后滴加吲哚试剂。 扩散生长是在滴加动力阳性吲哚试剂后，以玫瑰红色为阳性的培养基为尿素酶催化剂阳性。 大肠菌群miu ()，普通变形杆菌miu ()，m :动

7、力，i :吲哚，u :尿液酶催化剂，请记住：大肠菌群kia(aa)miu ()，上层改变伤寒杆菌kia(k a)miu ()，沙门氏菌属imvic试验()，志贺菌kia(k a)miu ()，志贺菌肺炎克雷伯菌kia(a a )、miu血浆凝固酶催化剂试验：1)原理：金黄色葡萄球菌可产生结合型血浆凝固酶催化剂(凝固因子)，血浆中可溶性纤维蛋白原变为不溶性血纤蛋白，附着在细菌表面，可在玻璃板上形成凝固块的游离型血浆凝固酶使试管中的血浆凝固。 金黄色葡萄球菌的凝固酶阳性，表皮葡萄球菌和腐植葡萄球菌的凝固酶阴性。 原理被称为氧化酶催化剂或细胞色素氧化酶催化剂，是细胞色素呼吸酶系的终端呼吸酶。 在进行

8、氧化酶催化剂试验时，该酶催化剂首先使细胞色素c氧化，然后氧化型细胞色素c进一步使乌尔兹氧化，引起颜色反应。 【方法】取出滤纸的一角，沾点菌落，加入一滴试剂，阳性即变为大头针色，5-10秒内呈深紫色。氧化酶催化剂试验、铜绿假单胞菌：阳性大肠菌群：阴性、【原理】过氧化氢酶将过氧化氢酶分解为分子氧。 【方法】将3%过氧化水素水滴加到玻璃板上，采集固体培养基上的菌落少于过氧化水素水，观察结果。 【结果】30s内产生大量气泡者为阳性。 过氧化氢酶(触酶催化剂)试验，葡萄球菌：阳性链球菌：阴性，【原理】有些细菌产生尿素酶催化剂分解尿素，产生阿摩尼亚，使培养基碱化。 方法将尿素培养基接种受检菌，培养1824

9、h观察结果35。 阴性时请继续进行4d观察。 【结果】酚红指示剂红色阳性，没有阴性。 变形杆菌阳性，大肠菌群阴性。乌土卫五酶试验、【原理】细菌以柠檬酸盐为唯一碳源时，可在柠檬酸盐培养基中生长分解柠檬酸钠，使培养基碱化。 方法在柠檬酸盐琼脂斜面上划出浓密的线条，接种被检菌，用35培养14d，每日观察结果。【结果】细菌在柠檬酸盐培养基的斜面生长，培养基变蓝变成阳性的细菌的生长没有，颜色不变(绿色)的为阴性。 大肠菌群：阴性瓦斯气体发生剂肠杆菌：阳性、柠檬酸盐利用试验、涂片、干燥、固定、染色、水洗、镜检、简单染色方法、干燥、初染玻璃板置于玻璃板架上，草酸铵结晶紫染色液(添加的染色液倾斜，用自来水仔细清洗。 介质滴下(lugol )碘元素液，染色1分钟，水洗。 脱色为滴加95%乙醇，脱色30s立即水洗，中止脱色。 再染滴加蕃红，染色30s，水洗。 最后用吸水纸轻轻地吸。革兰氏染色、注意：水洗时，请不要直接清洗涂装面，而是从载玻片的一端浇水。 水流不要太急。 涂膜薄膜要太大，以免脱落。 抗酸染色法、分枝杆菌属细菌(包括结核分枝杆菌、麻风分枝杆菌等)为抗酸性细菌，一般染色法不易着色，需要抗酸染色法。 注意事项涂膜稍厚，加温染色或染色时间长，加温时随时补充染色液的分枝杆菌为红色() 其他细菌和背景为蓝色(-)。取出操作过程、痰液涂片(稍厚)干燥固定的酚红加温染色810分钟后