第四章： 抗生素效价的微生物检定法.ppt

1、第四章：抗生素效价的微生物检验法，讲课人：王穗福(高级讲师)苏惠虹(助理讲师)广州市压电石英药物专门学校，教学目标：阐述抗生素概念，阐述医用抗生素的特征，了解抗生素的主要作用机制.阐述抗生素的效价及其表示方法，探讨抗生素效价检测操作的趋势和、 教学重点：抗生素概念、医用抗生素的特点、抗生素的效价和单位及其表示方法抗生素的效价检测操作方法和基本要求，教学难点：抗生素效价检测操作方法二剂量法修订公式抗生素的主要作用机制，第一节是第二节抗生素的效价和单位第三节管碟法测定操作第四节二剂量法的总结和工作第一节概要1， 2、抗生素的主要作用机制：抑制细胞贴壁合成，影响胞质膜功能，阻碍蛋白质合成，抑制核酸合

2、成；2、抗生素概念：抗生素是主要由微生物产生的极微量的、选择性杀死或抑制其生物、肿瘤、细胞球生长的天然有机化合物。 三、压电石英药用抗生素特点： (1)具有较大的差异毒力：差异毒力越强，越有利于临床应用。 (2)抗菌活性强： MIC值越小表示活性越强。 (3)抗菌谱广泛：广谱抗生素，广谱抗生素(4)不产生副作用和不良反应；(4)抗生素效价微生物检测技术；(1)效价检测技术；(1)物理、化学法：简便、快速、自身纯度不高； 采用该方法引起的微生物法：根据抗生素的最小抗菌浓度化学基而订的稀释法根据不同浓度的抗生素对微生物生长速度的影响程度而订的比浊法抗生素渗透到含有敏感菌的琼脂培养基中，以产生抗菌环

3、为化学基而订的管皿法(扩散法， 也称为杯皿法或垂直扩散法)根据对微生物的呼吸抑制的程度而修正的呼吸测定法和基于对微生物代谢产物的影响而修正的快速法、对微生物体内酶体系产生影响的脱氢法。 浊度法：利用液体培养基抗生素对试验菌的生长抑制作用，测定培养后细菌浊度值的大小，从而比较标准品和供试品对试验菌的生长抑制程度，测定供试品的效价的方法。 管皿法：利用含有敏感试验菌的琼脂培养基中抗生素的球面扩散渗透作用，形成一定的抑菌圈。 用琼脂培养基可以观察测定抗菌环的大小。 在一定的抗生素浓度范围内，对数接触剂量(浓度)与抑菌圈的表面积或直径成比例。 (二)抗菌环的形成1、抗菌环：将不锈钢小管(通称奥克斯福特

4、杯)放置在含敏感试验菌的琼脂培养基中，将抗生素溶液注入小钢管中，抗生素分子和溶剂一起呈球面状、放射状扩散至培养基内。 在云同步将培养基放入适合试验菌生长的孵化机中，琼脂培养基中的试验菌开始生长。 琼脂培养基中抗生素分子的浓度随距小钢管距离的增大而降低，远原来如此于小钢管，琼脂培养基中抗生素分子减少，相应抗生素浓度降低。 抗生素分子扩散到某个时间节点后，在小钢管的周围形成能有效抑制试验菌生长的范围，即所谓抗菌环。 2、影响抗菌环大小的因素：抗菌环的半径(大小)与最小抗菌浓度c、琼脂层的厚度h、琼脂内的抗生素扩散系数d、小钢管中的抗生素量m、以及抗生素的扩散时间t有关：这些个的因素变化多影响抗菌环

5、的大小和亮度。按设定、修订原理分为：管盘法、一剂量法(标准曲线法)、二剂量法(22法)、三剂量法(33法)，日常多采用二剂量法，有争议的结果，应仲裁用三剂量法测定的结果。3、管碟法常用的三种方法：第二节抗生素效价和单位，一、抗生素效价和单位抗生素含量以效价和单位表示。 这个词有时不加区别地统称为效价单位。 效价(otency ) :指检验品的实际单位数与其显示量的比。 很好地表现为效价的百分比。 效价是检验品和标准品的生物活性的比较。 单位(unit，u ) :测定抗生素有效成分的具体尺度。 二、抗生素效价单位的表示方法，质量单位为抗生素生物活性部分质量单位，麦克计程仪克()单位，毫克单位。

6、相似质量单位以特定纯抗生素盐类的质量为单位。 例如，单纯的强力注音字盐酸盐及抗四环素盐酸盐(含无生物活性的盐酸根)麦克计程仪拉姆()单位、毫克单位。 质量换算单位以特定纯抗生素盐的质量单位换算。 特定单位以特定抗生素样品的某种质量为单位。 复习旧课：1，1，所谓抗生素，主要是指： 2 .作为医疗用抗生素，应该具有、的特征。 3 .抗生素效价的微生物检定法常用、方法进行。 4 .表示抗生素的效价和单位，有、等方法。 5 .中国药典规定的应用方法中，22种方法中第一种和第二种分开显示，两种分开显示。 教学目标：熟悉抗生素效价检测操作的流程和基本要求教学重点：抗生素效价检测操作方法和基本要求教学难点

7、：抗生素效价检测操作方法、第三节管碟法检测操作、第三节管碟法检测操作；1 .试验用菌液、缓冲液、培养基的制备按药典规定配制。 2 .标准品和供试品溶液的调制按照药典的规定调制标准品和供试品的高低不同浓度的溶液。 3 .两皿的调制基础层(每个培养皿20ML )和含有一定量试验菌的菌层(每个培养皿5ML )，定径套了小钢管。 4 .向小钢管内滴加药液将标准品、供试品溶液滴加到相应的小钢管中。 5 .培养用恒温孵化机培养到规定时间。 (注意换瓦盖)、6 .测定抗菌环可以手动测定，也可以用机器测定。 7、校正结果先进行可靠性试验，满足规定后再进行效价校正，抗生素效价检测管皿法操作流程：二、影响因素的控

8、制1直线斜率的控制2直线切片的控制3抗菌环尺寸的控制4培养基的厚度5 .接触剂量反应直线范围控制6 .抗菌环圆整及亮度的控制3、抗生素操作要求(3) (2)抗生物质污染防治；(3)操作步骤误差；(3)抗菌环测定应避免误差，教学总结：抗生素效价检定管皿法操作流程，抗生素效价检定管皿法操作流程：配置工作： P92综合检定问题1，填埋场问题7，82，以同一培养基平皿进行对比另一方面，导出有效价格修正公式2用量法的有效价格修正公式，得到供试品的有效价格修正公式。v=t1t2s1s2(43 ) w=t2t1s2s1(44 ) lgr=(w/v ) . 操作步骤：1.称量2 .稀释3 .双硬盘的制造4 .放置钢管5 .滴入抗生素溶液6 .抗菌环测定，图46 :钢管放置器(北京牌先驱地面锋技术开发公司的生产开发)，教育总结：抗生素概念，医疗用抗生素特征，抗生素的主要作用配置作业： P91-92综合检查问题，标准品的称量，标准