纯化水微生物限度检查法确认方案

1、纯化水微生物限度检查法验证方案编 制 人编制日期 年 月 日审 核 人审核日期 年 月 日批 准 人批准日期 年 月 日生效日期 年 月 日变更记载：原编号 批准日期 生效日期 变更原因：目 录1.引言1.1概述1.2目的1.3验证小组成员1.4相关文件2.验证的准备3.验证的内容4.偏差的出现及处理5.验证评价及结论6. 再验证周期7.会审及批准1引言1.1概述纯化水微生物限度检查法是采用薄膜过滤法进行确认纯化水细菌、霉菌及酵母菌数测定。确保该方法的可行性，确保制药用水的安全性，满足生产检验的要求同时保证所检验结果的准确度。1.2 目的纯化水微生物限度检查法是采用薄膜过滤法，确认该方法合于纯

2、化水细菌、霉菌及酵母菌数测定1.3验证小组成员小组职务姓名所在部门职务职责组长负责协调小组的行动，跟进验证方案的审批流程，记录小组的行动，协调与其他部门及小组成员内的交流，组织验证数据并文件化。负责方案、报告审批。成员负责方案与报告的编写，并组织执行、收集、整理、复核数据，监督实施过程。成员负责确认方案与报告的审核。成员按照确认方案进行验证。成员按照确认方案进行验证。1.4 相关文件1.4.1 所用仪器设备使用、清洁、维护和保养操作规程1.4.2所用仪器设备使用说明书。2.验证的准备2.1验证前必须对设备所用仪表进行校验，且在有效期内。2.2验证试验过程中所用的标准仪器在使用前和全部过程结束以

3、后要进行校正。2.3验证试验所用的清洁器具和玻璃容器应按SOP程序清洁并符合要求。3验证的内容3.1 仪器设备：3.1.1薄膜过滤器3.1 2蒸汽灭菌器3.1.3电热恒温培养箱 3.1.4电热恒温干燥箱3.1.5净化工作台 3.2 验证用培养基（表1）名称生产厂家批号营养琼脂培养基营养肉汤培养基玫瑰红钠琼脂培养基改良马丁培养基验证菌株代数大肠埃希菌金黄色葡萄球菌枯草芽孢杆菌白色念珠菌黑曲霉菌3.3 验证用菌株（表2）3.4菌液制备 3.4.1接种大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌至营养肉汤培养基中，于3035培养1824小时。取经3035培养1824小时的大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草

4、芽孢杆菌在营养肉汤新鲜培养物1ml加入到9ml0.9%无菌氯化钠溶液中，10倍稀释至10-610-7约为50100cfuml的菌悬液备用。3.4.2接种白色念珠菌的新鲜培养物至改良马丁培养基中，于2328培养2448小时。取经2328培养2448小时的白色念珠菌改良马丁液体培养物1ml加入到9ml0.9%无菌氯化钠溶液中，10倍稀释至10-5约为50100cfuml的菌悬液备用。3.4.3将已培养好的黑曲霉菌，将孢子洗脱。然后，用适宜方法吸出孢子悬液至无菌试管内，用0.9%无菌氯化钠溶液制成每1ml含孢子数50100cfuml的菌悬液备用。3.5菌液计数(每种菌液接种2个平皿)3.5.1取大肠

5、埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌的菌液（50100cfu/ml）各1ml，分别注入无菌平皿中，立即倾注营养琼脂培养基，每株试验菌平行制备2个平皿，混匀，凝固，置3035培养48小时，计数；取白色念珠菌、黑曲霉菌的菌液（50100cfu/ml）各1ml，分别注入无菌平皿中，立即倾注玫瑰红钠琼脂培养基，每株试验菌平行制备2个平皿，混匀，凝固，置2328培养72小时，计数。3.5.2菌落计数结果(cfu/ml)(2个平皿计数取平均值)见下表试验次数10-5稀释10-6稀释10-7稀释大肠埃希菌金黄色葡萄球菌枯草芽孢杆菌白色念珠菌黑曲霉3.6验证方法：细菌、霉菌及酵母菌计数方法的验证至少应进行3次

6、独立的平行试验，并分别计算各试验菌每次试验的回收率。3.6.1验证日期：201 年 月 日至201 年 月 日。3.6.2供试品名称及取样点：纯化水；取样点：1 2 3 3.6.3试验组：取纯化水1ml和50100cfu试验菌加至同一个滤膜中，再加100ml的0.9%无菌氯化钠溶液过滤，取出滤膜，菌面朝上贴于琼脂培养基平板上培养，每株试验菌平行制备2个平皿，计数。3.6.4供试品对照组：取纯化水1ml至滤膜中，再加100ml的0.9%无菌氯化钠溶液过滤，取出滤膜，菌面朝上贴于琼脂培养基平板上培养，平行制备2个平皿，计数。3.6.5稀释剂对照组：取0.9%无菌氯化钠溶液100ml和50100cf

7、u试验菌加至同一个滤膜中过滤，取出滤膜，菌面朝上贴于琼脂培养基平板上培养，每株试验菌平行制备2个平皿，计数。3.6.6结果见表独立试验一：各试验组菌落计数（回收率%） 取样点： 试验时间： 年 月 日 完成时间： 年 月 日验证菌株平皿号试验组个/ml（回收率%）菌液组个/ml供试品对照组个/ml稀释剂对照组个/ml（回收率%）大肠埃希菌12平均值金黄色葡萄球菌12平均值枯草芽孢杆菌12平均值白色念珠菌12平均值黑曲霉12平均值备注：试验组及菌液组的霉菌及酵母菌培养72小时后开始计数，供试品对照组的霉菌及酵母菌培养72小时后疑有菌落，但不宜观察，所以霉菌及酵母菌计数以培养96小时后计数为准，试

8、验周期为4天。结论：本次试验各试验组的菌回收率和各稀释剂对照组的菌回收率均不低于70%，按标准规定，本次试验结果 规定。复核人： 试验人： 独立试验二：各试验组菌落计数（回收率%） 取样点： 试验时间： 年 月 日 完成时间： 年 月 日验证菌株平皿号试验组个/ml（回收率%）菌液组个/ml供试品对照组个/ml稀释剂对照组个/ml（回收率%）大肠埃希菌12平均值金黄色葡萄球菌12平均值枯草芽孢杆菌12平均值白色念珠菌12平均值黑曲霉12平均值备注：试验组及菌液组的霉菌及酵母菌培养72小时后开始计数，供试品对照组的霉菌及酵母菌培养72小时后疑有菌落，但不宜观察，所以霉菌及酵母菌计数以培养96小时

9、后计数为准，试验周期为4天。结论：本次试验各试验组的菌回收率和各稀释剂对照组的菌回收率均不低于70%，按标准规定，本次试验结果 规定。复核人： 试验人： 独立试验三：各试验组菌落计数（回收率%） 取样点： 试验时间： 年 月 日 完成时间： 年 月 日验证菌株平皿号试验组个/ml（回收率%）菌液组个/ml供试品对照组个/ml稀释剂对照组个/ml（回收率%）大肠埃希菌12平均值金黄色葡萄球菌12平均值枯草芽孢杆菌12平均值白色念珠菌12平均值黑曲霉12平均值备注：试验组及菌液组的霉菌及酵母菌培养72小时后开始计数，供试品对照组的霉菌及酵母菌培养72小时后疑有菌落，但不宜观察，所以霉菌及酵母菌计数以培养96小时后计数为准，试验周期为4天。结论：本次试验各试验组的菌回收率和各稀释剂对照组的菌回收率均不低于70%，按标准规定，本次试验结果 规定。复核人： 试验人： 4. 偏差的出现及处理当出现偏差时应分析偏差原因并提出处理意见。偏差： 检查人： 日期： 年 月 日5.验证评价及结论5.1 验证评价：试验组、供试品对照组、稀释剂对照组、菌落计数结果的各项内容和指标进行总的评价。5.2 验证建议：试验组、供试品对照组、稀释剂对照组、菌落计数结果均应符合4项验证合格标准。如有少量数据超过上述标准，则应由验证小组成员分析找出不合格原因，修订验