动物细胞培养和核移植技术(上课用)

1、动物细胞培养和核移植技术,第一课时,动物细胞工程常用的技术手段：,动物细胞培养、 动物细胞核移植、 动物细胞融合、 单克隆抗体 动物细胞培养技术是其他动物细胞工程技术的基础。,提问：,植物细胞工程常用的技术手段有哪些？,植物组织培养, 植物体细胞杂交,一、动物细胞培养,原理：,1、动物细胞培养过程,细胞增殖 （有丝分裂）,221 动物细胞培养和核移植技术,从动物机体中取出相关组织，将它们分散成单个细胞，然后放在适宜的培养基中，让这些细胞生长和增殖。,一、动物细胞培养 1 、动物细胞培养的概念,动物胚胎或幼龄动物的组织、器官（剪碎）,细胞悬浮液,单个细胞,原代培养: 将动物组织经胰蛋白酶等处理后

2、的初次培养。 传代培养: 对贴满瓶壁的细胞用胰蛋白酶处理，然后再分瓶继续培养。,动物组织,单个细胞,细胞悬液,贴壁生长,分瓶培养,10代细胞,50代细胞,不死细胞,原代培养,传代培养,胰蛋白酶或胶原蛋白酶,剪碎,加培养液,接触抑制,少数癌变,少数,动物细胞培养技术流程,失去接触抑制现象,细胞核型不变,当贴壁细胞生长到表面相互接触时，细胞就会停止分裂增殖细胞出现接触抑制。,哪些细胞失去了接触抑制？,传代培养时，少数超过50代的细胞，由于遗传物质发生改变，可无限增殖，并失去了接触抑制肿瘤细胞。,接触抑制,动物胚胎或幼龄动物的组织、器官,胰蛋白酶,10代细胞,无限传代（不死性）,遗传物质改变,遗传物

3、质未改变,例1、正常细胞在分裂时，只要和相邻细胞接触，就停止活动，不再分裂。这一现象称为“接触抑制”。对这一事实的有关推测，正确的有 （ ） A动物体细胞培养过程中，在遗传物质发生变化以后，只能形成单层细胞。 B癌细胞在体外培养时，不可能成为隆起的多层细胞。 C癌细胞不受“接触抑制”，这可能与它的细胞表面发生变化有关。 D单细胞生物分裂产生的子细胞，彼此间也存在“接触抑制” 。,C,多细胞生物的细胞膜上存在着糖蛋白，细胞之间的信息识别功能使细胞间存在“接触抑制”。单细胞生物分裂产生的子细胞，能独立进行生命活动，不存在“接触抑制”。,4、动物细胞培养条件：,1、无菌、无毒的环境 （添加一定量的抗

4、生素，定期更换培养液） 2、营养 （葡萄糖、氨基酸、无机盐、维生素、动物血清等。） 3、温度和PH 36.5+（-）0.5度, 7.2-7.4 4、气体环境： O2和CO2（95%空气和5% CO2 ） O2是细胞代谢所必需的，CO2的主要作用是维持培养液的pH。,保证细胞顺利的生长增殖,维持培养液的PH,4、应用,、生产生物制品（病毒疫苗、干扰素、单克隆抗体）。 、作为基因工程中的受体细胞。 、培养正常细胞或各种病变的细胞，用于生理、病理、药理等方面的研究。 、培养的动物细胞可以用于检测有毒物质，判断某种物质的毒性。检测有毒物质毒性大小，原理是动物细胞经该物质处理后，根据变异率判断（畸变细胞

5、所占的比例越大，说明该物质毒性越大）。,思考：,2、为什么选用动物胚胎或幼龄个体的器官或组织做动物细胞培养材料？,1、动物细胞培养液的主要成分是什么？较植物组培培养基有何独特之处？,3、为什么培养前要将组织细胞分散成单个细胞？,4、动物细胞培养能否像绿色植物组织培养那样最终培养成新个体？,主要成分：葡萄糖、氨基酸、无机盐、维生素和动物血清等。独特之处有：1、液体培养基 2、成分中有动物血清等,因为这些组织或器官上的细胞生命力旺盛，分裂能力强,成块组织不利培养，分散了做成细胞悬浮液利于培养,不能，动物细胞培养只能使细胞数目增多，不能发育成新的动物个体,小结：植物组织培养和动物细胞培养的比较,二.

6、动物细胞核移植技术和克隆动物,将动物的一个细胞核，移入一个已经去掉细胞核的卵母细胞中，使其重组并发育成为一个新的胚胎，这个新的胚胎最终发育为动物个体（克隆动物）。,1.动物细胞核移植概念：,（难度高）,细胞质,细胞核,细胞核移植,多莉羊的培育过程,胚胎 移植,2.体细胞核移植过程（体细胞克隆动物）,原理：动物细胞核具有全能性,显微 操作,3.体细胞核移植技术的应用前景：,1.加速家畜遗传改良的进程,2.保护濒危物种,3. 生产医用蛋白质及组织器官的移植,4.了解胚胎发育和衰老过程；追踪研究疾病的发展过程和治疗疾病,4、体细胞核移植技术存在的问题 P173,（1）成功率非常低 （2）克隆动物以表

7、现早衰、生理缺陷等健康问题 成功率低，绝大多数克隆动物存在健康问题并表现出遗传和生理缺陷：如体型过大，异常肥胖，发育困难，脏器缺陷，免疫失调等。,在动物细胞培养的有关叙述中正确的是（ ） A. 细胞的癌变发生于原代培养向传代培养的过渡过程中 B. 动物细胞培养液中通常含有葡萄糖、氨基酸、无机盐、生长素和动物血清等 C. 动物细胞培养的目的是获得大量的细胞 D. 动物细胞培养前和培养过程中都要用胰蛋白酶处理,D,治疗性克隆有希望最终解决供体器官的短缺和器官移植出现的排异反应。下图表示治疗性克隆的过程，下列说法正确的是,A上述过程利用了动物体细胞融合技术 B上述过程实现了动物细胞的全能性C胚胎干细胞的不断增殖和分化潜能保证过程的进行D、过程不进行DNA复制和蛋白质合成,AC,下