实验一 糖的呈色反应.ppt

1、实验一糖的显色反应和定性鉴定，李立家，生命科学学院3102，3139 tel 336068754505 email 3360，目的，糖类鉴定以及学习酮糖和醛糖区分方法了解还原糖的鉴定方法及其原理，糖相关知识，单糖中的果糖是酮糖、糖的显色反应和定性鉴定、 Molish反应-萘酚反应.蒽酮反应.酮糖的Seliwanoff反应. Fehling试验. Benedict试验. Barfoed试验、I、Molish反应-萘酚反应糠醛、紫红色复合体、 单糖、二糖、多糖通常发生这种反应，而氨基糖不发生这种反应。 丙酮、甲酸、乳酸、草酸、葡萄糖醛酸、各种醛类衍生物、乙醛等产生近似的颜色反应。 因此，阴性反应证

2、明不存在糖类，而呈阳性则表明可能存在糖，为了确认糖的存在，必须进一步进行其他糖的定性试验。 Molish反应非常灵敏，0.001葡萄糖和0.0001蔗糖呈呈阳性。 因此，请勿在样品中混入纸屑等异物。 果糖浓度过高时由于浓硫酸的焦炭作用，不呈紫色而是呈红色和褐色，稀释后再进行。Molish反应、操作方法取试管、编号，分别加入1 mL待测糖溶液，然后加入2滴Molish试剂，振混。 倾斜试管，沿管壁小心加入浓硫酸约1mL，绝对不要摇动，小心垂直后，仔细观察双层液面边界的颜色变化。 用水代替砂糖溶液，重复一遍，观察结果。、蒽反应，实验原理：糖经浓酸作用生成的糠醛及其衍生物与蒽(10酮9、10二氢蒽)

3、作用生成蓝绿色复合体。 该复合体在630nm处有最大的吸收峰，并且在一定范围内，颜色与糖量的多少成正比，该方法可用于测定戊糖、己糖、多糖等碳水化合物的大部分含量。 测量水溶性碳水化合物的含量时，请勿将未溶解的沉淀部分混入试剂。 否则细胞壁中的纤维和半纤维素混入样品，测定值上升。 不同糖类与蒽酮试剂反应后色泽深度不同，果糖发色最深，葡萄糖次，半乳糖和甘露聚糖浅，五碳糖浅，测定混合糖含量时混合物中不同糖的比例不同会产生误差。 在测定单糖时可以避免这种误差。蒽反应、操作方法取试管、编号，全部加入1ml蒽溶液，向各管中滴加待测糖溶液2 3滴，充分搅拌，观察各管的颜色变化并记录。 III、酮糖的Seli

4、wanoff反应(谢瓦诺夫反应)、实验原理：酮糖在酸的作用下比醛糖更容易生成羟甲基糠醛。 后者与间苯二酚起作用生成鲜红色复合体，反应20-30秒即可。 醛糖在浓度高时和长时间煮沸后才产生微弱的呈阳性。 这种反应是鉴定酮糖的特殊反应。 果糖与Seliwanoff的试剂反应非常快，呈鲜艳的红色，葡萄糖所需时间长，仅产生黄色到淡黄色。 戊糖也与Seliwanoff试剂反应，戊糖通过酸脱水生成糠醛，与间苯二酚缩合，从绿色生成蓝色的生成物。 酮基本上没有还原性，只有在变成烯醇式后才显示还原作用。酮糖的Seliwanoff反应、操作方法取试管、编号，放入各Sediwanoff试剂1mL，再将测定对象糖溶液

5、依次各放入4滴混合，同时放入沸水浴，比较各管颜色的变化过程。、Fehling试验，实验原理：弗林试剂为含有硫酸铜和酒石酸钾钠的氢氧化钠溶液。将硫酸铜和碱溶液混合加热，生成黑色氧化铜沉淀。 还原糖同时存在时，会产生黄色或砖红色的氧化亚铜沉淀。 根据沉淀的速度形成的粒子的大小不同，粒子大的是红色，粒子小的是黄色。 为了防止铜离子和碱的反应引起的氢氧化铜或碱碳酸铜的沉淀，在Fehlin试剂中加入酒石酸钾钠，使Cu2形的酒石酸钾钠与铜离子络合是可溶性的络合离子，这种反应是可逆的。 平衡后溶液内保持一定浓度的氢氧化铜。 弗林试剂是一种弱氧化剂，不与酮和芳香醛反应。 将一定量的甲液和乙液等进行体积混合后，

6、硫酸铜与氢氧化钠反应，生成氢氧化铜沉淀：2NaOH CuSO4=Cu(OH)2 Na2SO4、Fehling试验反应过程， 碱溶液中生成的氢氧化铜沉淀与酒石酸钠反应生成可溶性的样品液中的还原糖与酒石酸钾钠铜反应，酒石酸钾钠铜被还原糖还原，生成红色氧化铜沉淀，其反应如下：糖酸、Fehling试验、操作方法如下摇摆后，分别加入4滴待测糖溶液，在沸水浴中加热2 3min，取出冷却，观察沉淀和颜色变化。v、Benedict试验(Benedict试验)、实验原理： Benedict试剂是对Fehling试剂的改进。 Benedict试剂利用柠檬酸作为Cu2的络合剂，其碱性比Fehling试剂弱，灵敏度高

7、，干扰因子少。Benedict试验、操作方法取试管、编号，分别放入2mL Benedict试剂和4滴待测糖溶液，在沸水浴中加热5分钟，取出后冷却，观察各管中的颜色变化。VI、Barfoed试验(伯克霍夫试剂)、试验原理：在酸性溶液中，单糖和还原二糖的还原速度有明显差异。 Barfoed试剂是弱酸性。 单糖在Barfoed试剂的作用下可以将Cu2还原成砖红色的氧化亚铜，时间约为3分钟，但还原二糖需要20分钟左右。 因此，该反应可用于单糖和还原二糖的区别。 加热时间过长时，非还原性二糖水解后仍显示呈阳性。 还原二糖：麦芽糖、乳糖、纤维二糖、Barfoed试验、操作方法取试管、号，分别加入2mL Barfoed试剂和2滴待测糖溶液，煮沸2-3分钟，放置20分钟，比较各管的颜色变化。思考题、清单本实验六色反应的原理和应用总结比较。 采