2.2.1动物细胞培养和核移植技术(新).ppt

1、动物细胞融合、单克隆抗体技术、动物细胞核移植、(基础)，在治疗烧伤患者时，通常采用取烧伤患者健康皮肤进行自体移植的方法。 但是，对于大面积烧伤患者来说，自我健康皮肤非常有限，缺乏使用他人的皮肤来源，会引起免疫排斥反应。 动物细胞培养技术怎样才能得到大量的自我健康皮肤呢？1、概念：从动物身体中提取相关组织，将其分散到单一细胞中，然后放入适当的培养基中，使这些细胞生长增殖。 2、原理：细胞增殖，(有丝分裂)，概念：动物组织消化后的初次培养通常称为原代培养。胰蛋白酶/胶原酶处理、组织块的提取、胚胎或幼龄动物器官组织、切割、单细胞、细胞悬浮液、初代培养、细胞悬浮液、CO2培育箱，有增殖能力强、分裂旺盛

2、的接触抑制现象，放入培养瓶内进行初代培养，贴壁过程、 细胞壁贴附：培养瓶或培养皿壁要求：内面光滑无毒无菌，易贴附，在培养瓶悬浊液中分散培养的细胞立即贴附于瓶壁，称为细胞壁贴附。 原代培养的特征是贴壁细胞分裂生长到表面相互接触时，细胞停止分裂增殖的现象称为细胞的接触抑制。 细胞的接触抑制、初代培养的特征、接触抑制：传代培养(扩大培养)、CO2培育箱、初代培养的细胞在接触抑制后，用胰蛋白酶处理，使细胞脱离瓶壁后，加入新的培养液，分离稀释细胞， 从原培养瓶内新的分瓶扩大培养：以1:2或l:3以上的比率分注，1050代细胞、无限继代、分瓶、胰蛋白酶、原代培养接触抑制、110代细胞、继代培养、单层细胞、

3、细胞核型正常、多层细胞继代数为分瓶次数的各代细胞培养， 从细胞壁贴附到瓶壁贴附的过程中，细胞多次分裂，思考问题，传代培养中，传代/次数与细胞增殖/分裂次数相同，1 .为什么动物细胞培养过程使组织分散到单一细胞，成块的组织细胞靠在一起，限制细胞的生长和增殖，排除细胞营养物质的吸收和代谢废物思考题2 .胰蛋白酶的作用是什么？ 由此可以说明细胞间的物质是怎样的成分。 可以用胃蛋白酶代替胰蛋白酶吗？ 为什么？ 胰蛋白酶真的不消化细胞吗？ 胰蛋白酶水解蛋白，细胞间成分为蛋白质，不能。 由于两者的最佳pH值不同，胰蛋白酶的长时间作用也消化细胞膜蛋白质，因此必须控制胰蛋白酶的处理时间。 4 .继代培养的细胞

4、能继续继代吗？ 5 .为什么能永远传达？ 不行。 传代培养到50多岁时，大多数细胞停止分裂，最终老化死亡，但少数细胞可以继续传代。它们发生突变，得到不死性，向癌细胞的方向发展(变成癌化细胞)，3 .培养的细胞数量达不到人们的需要，该怎么办，用胰蛋白酶处理将贴满瓶壁的细胞分离，然后分瓶继续培养(继代培养)，8 不过，动物细胞培养只能增加细胞数，不能形成新的动物个体。 7 .动物细胞培养是为了得到这些细胞吗？既可以得到细胞，也可以得到细胞产物。6 .人类一般保存的是哪种细胞呢？ 保存10代以内的细胞，一方面可以维持细胞的正常二倍体核型，另一方面10代以后的细胞核型可能发生变化，一部分还发生突变向癌

5、细胞方向发展，4 .动物细胞培养条件，1 .无菌、无毒的环境， 对培养液和培养用具进行无菌处理，向培养液中添加一定量抗生素，定期交换培养液，2 .营养、葡萄糖、氨基酸、无机盐、生长促进因子、微量元素等动物血清和血浆，3 .温度和pH，温度36.50.5度，ph 7.27.4，4，4 .气体环境。 维持CO2培养液的pH，培养目的、蔗糖、植物激素、培养基特有的成分、液体培养基、固体培养基植物组织培养与动物细胞培养的比较、葡萄糖等动物血清，如细胞、细胞的万能性、细胞和细胞产品、新的个体和细胞产品、培养结果，或细胞产品、快速繁殖、无病毒株的培养等。 动物细胞培养技术的应用： 1，1 .病毒疫苗、干扰

6、素、单克隆抗体等生物制品的生产2 .基因工程的应用主要是受体细胞3 .检测有毒物质，判断某些物质的毒性4 .细胞的生理1 .用于动物细胞培养的组织和细胞多为胚胎或出生不久的幼龄动物器官或组织其主要原因是这样的组织细胞() a .容易产生种种变异的b .具有更强万能性的c .采访对d .分裂增殖非常方便的能力强2 .动物细胞培养的特征()细胞壁有丝分裂细胞分化接触抑制减数分裂原代培养一般继代110代a，b，c，d，a，3 .以下动物细胞培养和植物组织培养的主要差异是() a .培养基成分不同的b .动物细胞培养是指在无菌条件下不需要进行c .而植物细胞d .动物细胞不能大量培养，而植物细胞只能在

7、植物中培养，a、c项：愈伤组织条件在继代培养中不分化(可扩大培养)正因为是d项： c项，植物细胞也能在大量细胞中培养为了将贴壁的细胞从瓶壁分离，需要用酶处理，可以利用。 (2)随着细胞继代次数的增加，大部分细胞分裂停止，并且出现的现象，但是极少数细胞连续增殖，这些细胞根据遗传物质的变化变成细胞，其细胞的粘着性、细胞膜表面的蛋白质(糖蛋白)的量。相互接触、接触抑制、单层、胰蛋白酶、老化或死亡、不死性/癌、降低、减少；(3)检查某些毒物能否改变细胞染色体数量，最好用细胞分裂期细胞显微镜观察。 (4)将细胞培养形成的皮肤组织移植给患者后，之所以发生排斥反应，是因为将移植的皮肤组织视为攻击。 在中、抗

8、原、植物组织培养中，外植体可以在适当的培养条件下诱导，形成完整的植株。想一想。 那么，离体的动物组织细胞经过一定的诱导，能发育成完整的动物体吗？分化潜力变弱：其万能性随着细胞分化程度的提高而逐渐受到限制，分化潜力变弱。 (这对整个细胞来说)细胞核仍具有万能性：细胞核含有保持物种遗传性所必需的全部基因，而且由于细胞分化没有遗传因子丢失，因此高度分化细胞的细胞核仍具有万能性。 对于动物细胞来说：动物细胞核还具有万能性的特征，如何表现动物细胞的万能性，克隆动物的获得，实际上是利用核移植技术来实现的，一想，二.动物细胞核移植技术和克隆动物，是动物细胞(供体)的一个细胞核，去除细胞核的卵母细胞(供体)

9、转移，重组(重组细胞)使其发育成新胚胎，1 .动物细胞核移植的概念：(难易度高； 成功率低)、P51核移植技术、卵母细胞采集、奶牛供体、2 .体核移植的过程：供体细胞(供体)、细胞培养、体细胞、卵巢卵母细胞(m中期：供体)、去核2 .核移植和胚胎移植，2 .体核移植的过程：动物细胞培养、核移植、胚胎移植，1 .整体过程用什么技术1 .原理？ 2 .体细胞核移植的过程：动物细胞核的万能性，2 .繁殖方式无性繁殖(克隆)，3 .据说上述克隆牛有3个母亲，对吧，4 .新生牛的性别，基因？ 性别与供体相同，基因与供体基本相同，5 .体核移植法生产的克隆动物对体细胞供体动物是否进行了100%的复制？ 不

10、，不是。 克隆动物的性状与核供体生物的性状基本相同，不完全形成。 因为克隆动物的细胞质遗传物质来源于受体卵母细胞。 另外，生物的性状受环境的影响。 供体亲本：优质高产奶牛(供体)，受体亲本：普通奶牛(提供去核卵母细胞)，代孕亲本：优质高产奶牛，7 .体细胞细胞核移植到受体卵母细胞之前为什么必须去核，核移植动物的核遗传物质均为有利用价值的动物提供6 .核移植的供体细胞一般选择传代10代以内的细胞，为什么10代以内的细胞一般保持正常二倍体的核型，不发生突变。 8 .受体细胞是为什么选择减数第二次分裂中期(m期)的卵母细胞的最大细胞，细胞核的位置接近第一极体，可以通过微吸吸取细胞核和第一极体，操作容

11、易。 细胞核中含有表达万能性的物质和营养条件(其发育可直接表达性状)。 物理方法：电脉冲等化学方法：钙离子载体、乙醇、蛋白酶合成抑制剂等，电刺激，11 .激活重组细胞的方法：9 .促进供体细胞和受体细胞融合的方法：10 .激活重组细胞的目的： 激活受体细胞2 .医药卫生方面：加快家畜遗传改良进程，促进优良家畜群繁殖，保护濒危物种，增加其存活数量，基因重组克隆动物：作为生产医用蛋白的器官移植供体3，其他领域，胚胎发育和老化过程以克隆动物为疾病模型，更好地跟踪研究疾病的发展过程，治疗疾病，1 )成功率低的代孕母体生产的活克隆动物在移植克隆胚胎中所占的比例平均不足10%。 2 )克隆动物有健康问题的许多克隆动物表现出遗传和生理缺陷，如体型过大、异常肥胖、发育困难、器官缺陷、免疫缺陷等。3 )克隆技术的各个阶段需等待进一步改善4 )克隆动物产品的安全性存在争议，4 )体核移植存在问题，1 .关于体细胞克隆的以下记载如下： () a供体为体细胞，细胞核b受体为去核卵母细胞，细胞质c细胞核移植是体细胞克隆的关键步骤d 下图为血清对正常细胞和癌细胞培养影响的实验结果。 由该图的信息得出的结论是，()，a正常细胞和癌细胞的增殖速度相同，b血清的有无对正常细胞培养的影响不同，在c培养基中补充血清是否在正常细胞的培养d培养基中补充血清对癌细胞的培养的影响很小，