食用真菌的组织分离、液体培养和固体培养.ppt

1、食用真菌的组织分离、液体培养和固体培养,于跃 20068101050 张腾岳 20068101057,步骤： 选取生长良好的侧耳子实体，用75%酒精做表面消毒，在超净工作台内，按无菌操作将子实体纵剖，用无菌刀在子实体上四个不同部位划“井”字用接种钩勾取2*3*3mm大的组织块，接种于马铃薯培养基试管斜面正中。将试管放入25的恒温箱中培养，等待菌丝长满斜面，预计时间7-10天。,注意： PDA培养基在灭菌后易分层，所做试管斜面需先摇匀再摆斜面。,1.子实体的组织分离获取纯菌种,结果：接种斜面培养2-3天后，3支试管内均长出大量杂菌，种类各异，平菇菌丝生长不良。 分析：可能是由于勾取的组织块表面仅

2、用75%酒精消毒不能达到理想的消毒效果。,用75%酒精对平菇做表面消毒后，用无菌镊子将平菇表面膜撕掉，取摸下和平菇内部组织培养。可能可以解决以上问题。,因组织培养失败，故将实验室保存的纯种平菇接种到PDA培养基平板上，25培养箱中培养。,结果： 经7-8天的培养，生长出直径为5cm的菌落，菌丝生长稀疏。,注意： 由于培养周期较长，倒平板时将培养基倒得较厚（约20ml），防止培养基干裂。,分析： 经与其他组比较发现，在培养基中加入少量维生素B1，可加快菌丝生长速度并使菌丝生长致密。,因试管斜面面积过小，不利于菌种纯化，改用培养皿平板培养。,步骤: 将培养皿中菌丝连同少量表层培养基铲下约4cm2的

3、菌块至装有50ml玉米粉蔗糖培养基的250ml锥形瓶中。在26-28的培养箱中静止培养2天（静止培养促使铲断菌丝的愈合，有利于繁殖。），再置于摇床中28 120r/min,培养4天。,注意：锥形瓶中不宜装入过多培养基，锥形瓶内液面的上升使液体与空气的接触面积变小，减小了氧的溶解速度，不利于菌丝生长。,2.液体培养：,结果： 在摇床培养后期，培养基由黄色渐渐变白，并在静止一段时间后有团块出现。 可能为菌体大量生长、繁殖所致。,(1)二级种培养,(2).发酵培养：摇床种子以10%接种量接入玉米粉综合培养基，接种后保持液面不要过高。25-28培养3-4天。,分析：本步实验目的为扩增出足量的菌丝体，以

4、备后期发酵用。由于接种玉米粉综合培养基时带入大量原培养基固体成分，加之玉米粉综合培养基内含部分固体成分。干重中培养基固体成分过多，难以与菌丝体分离，对测得的干重生物量影响过大。故未进行生物量的测定。,3.固体栽培,(1)配料，装瓶，消毒：3个铝制啤酒罐。按下述配方配制棉籽壳培养基：棉籽壳50% 过磷酸钙7% 水65-70%（棉籽壳330g）装瓶时，底部压得松，瓶口压得紧些，罐体上柱扎一些小孔，用报纸将罐口封好，121湿热灭菌2小时。,(2)待温度降到室温，用移液枪将液体培养基内的菌液接入到棉籽壳培养基内，将枪头插到罐底，一边向外拔出枪头一边注射，直到表面。均匀注射3-5ml后再在表面加上一些菌

5、液。用报纸封口后移入实验室抽屉内。白天实验室内气温在16-20内变化，变化稍低，由于在室内，昼夜变温不大。,分析：实验室要求控温在20-23，最高不超过29，由于瓶内温度高于实验室4-6，所以在实验室自然条件下可达到菌丝生长温度要求。若置于培养箱中培养可能会造成温度过高。相对湿度70%-75%可由在报纸（瓶口处相当于瓶盖）上洒适量水来控制。由于培养量少，空间足够大，故不需过多考虑CO2浓度问题。7天后菌丝生长速度较快，14天左右长满全罐。,(3) 16天时将瓶口的报纸换成透明的塑料片，将罐移到宿舍阳台处，接受散射自然光照。由于所处宿舍阳台面向北，培养基不会受到阳光直射。周期低温刺激由昼夜温差调节。,(4)两周左右以后，表面贴近罐壁的菌丝开始产生瘤状突起，为子实体原基，去掉塑料膜。一到两天后，成为有菌盖的微小子实体，菌盖中央凹陷，一些菌盖低于菌柄顶，形成伞形。子实体相继产生并日益长大。,分析：在宿舍培养期间，连续降水。湿度极大，温度较低，适于菌蕾发育。,出菇第一天,出菇第二天,出菇第三天,出菇第五天,结果：在第五天至第七天，平菇不再长大，表现为缺水。固体培养基逐渐缩小、变硬。在第七天后，平菇菌盖变硬。,分析：培养后期少雨，空气湿度小，气温偏高。培养基中水