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文档简介

1、,生物选修3,1.2基因工程的基本操作程序,专题1 基因工程,三、目的基因导入受体细胞,1、什么是转化？ 2、目的基因导入植物细胞常用的方法是什么？具体过程是怎样的？ 3、目的基因导入动物细胞常用的方法是什么？基本操作程序是怎样的？ 4、目的基因导入大肠杆菌的方法是怎样的？钙离子有什么作用？,转化,目的基因进入受体细胞内，并且在受体细胞内维持稳定和表达的过程。,三、目的基因导入受体细胞,1.目的基因导入植物细胞,常用的方法: 农杆菌转化法、基因枪法、花粉 管通道法,农杆菌的特点: a.易感染双子叶植物和祼子植物。 b.具有趋化性。 c.Ti质粒上的T-DNA可转移到受体细胞，并整合到受体细胞染

2、色体的DNA上,三、目的基因导入受体细胞,三、目的基因导入受体细胞,1.目的基因导入植物细胞,农杆菌转化法的导入过程:,构建基因表达载体,转入,农杆菌,植物细胞,导入,稳定维持和表达,.目的基因导入动物细胞,常用的方法: 显微注射技术 操作程序：,三、目的基因导入受体细胞,a.先提纯含目的基因的表达载体 b.从动物体内取出卵(受精卵） c.显微注射仪进行显微注射 d.将含目的基因的受精卵移植到输卵管或子宫中发育成新个体,3.目的基因导入微生物细胞,原核生物的特点: 繁殖快，多为单细胞，遗传物质相对较少。,大肠杆菌的转化过程:,用Ca2+处理细胞,增加细胞壁的透性，与细胞膜无关,三、目的基因导入

3、受体细胞, 感受态细胞,重组表达载体DNA分子与感受态细胞混合,感受态细胞吸收DNA分子,四、目的基因的检测与鉴定,1、导入目的基因后需要检测哪些方面？各采取什么方法？ 2、什么是DNA分子探针？检测时的DNA探针通过什么原理来检测目的基因和相应的mRNA？ 3、利用抗体抗原杂交检测的原理是什么？,1.目的基因是否插入受体细胞染色体的DNA上,目的基因的检测内容和方法,检测方法:,DNA分子杂交技术,DNA探针：,用放射性同位素等作标记的含有目的基因的DNA片段。,四、目的基因的检测与鉴定,2.目的基因是否转录出mRNA,目的基因的检测内容和方法,检测方法:,分子杂交技术,用DNA探针与mRN

4、A杂交。,四、目的基因的检测与鉴定,目的基因的检测内容和方法,检测方法:,抗原抗体杂交,3.目的基因是否翻译出蛋白质,四、目的基因的检测与鉴定,4、个体生物学水平的鉴定,四、目的基因的检测与鉴定,珠蛋白是动物血红蛋白的重要组成成分，当它的成分异常时，动物可能患某种疾病，如镰刀型细胞贫血症，假如让你用基因工程的方法使大肠杆菌生产出鼠的珠蛋白，想一想，应该如何设计？,思考与探究,思考与探究,1.从小鼠中克隆出珠蛋白基因的编码序列（CDNA）。 2.将cDNA前接上在大肠杆菌中可以适用的启动子，另外加上抗四环素的基因，构建成一个表达载体。 3.将表达载体导入无四环素抗性的大肠杆菌中，然后在含有四环素的培养基上培养大肠杆菌。如果表达载体未进入大肠杆菌中，大肠杆菌会因不含有抗四环素基因而死掉

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