短柄五加祛风湿酒加工工艺初探.ppt

1、短柄五加去风湿酒加工工艺初探，苏金龙、张小慧、范建龙(陇东学院生命科学与技术学院，甘肃庆阳745000 )要旨：本试验以不同浓度的乙醇为溶剂，常温下提取短柄五加茎皮内的物质，使提取液与黄酮类化合物的特征反应物发生显色反应， 并用芦丁标品和提取物进行紫外、可见光谱分析，利用单因素试验和正交试验测定不同提取方法得到的黄酮类化合物的含量，其最佳提取条件为材料液比1:10、乙醇浓度60%和提取时间20天。 基于以上条件，参照风湿病的治疗多种处方，以短柄五加茎皮、防风、香加皮、关白附、威灵仙、红药、独活为原料，以纯粮酒为提取液，具有宝石红色、酒药和谐但有苦涩味特征的短柄五加茎皮起泡消除关键词：短柄五引言

2、：短柄五加(Acanthopanax brachypus Harms.)又名倒耙牛，为五加科五加属植物，最早收载于神农本草经，常作为中药五加皮广泛使用1。 在中药典籍中，其茎皮作为五加皮入药的本草纲目有“宁得五加，不用金玉满车”，在能够充分看到其悠久药用历史的神农本草经、全国中药汇编和中药杂志中，短柄五加、细柱五加、红毛五加、 粗叶五加和轮叶五加的根皮或茎皮总称“南五加皮”，主要用于治疗风寒湿痹、筋骨瘦软、小儿迟行、体弱、浮肿的甘肃省中药材标准以短柄五加为地方标准，甘肃刺五加(Rhizoma et radix acanthopanan 产于海拔1000-1500m的灌木林中或向阳斜面，分布于我

3、国陕西北部、宁夏六盘山和明东至天水的药用为干燥的根、根茎及茎，具有健脾益气、补肾安神、祛风湿、强筋骨的功能，主要为肾阳虚、体弱无力、食欲不振、腰膝酸痛、失眠多梦、心悸健忘目前对根茎化学成分58、生殖生物学和生态学的研究较多，但开发利用研究较少。 风湿病是侵犯关节、骨骼、肌肉、血管及相关软组织或结缔组织的主要疾病，多为自身免疫性疾病，发病隐蔽慢，病程长，遗传倾向多。 临床上，风湿病给患者造成的主要危害是关节中，同样风湿性关节炎在发病期间也对患者的关节形成很大威胁，给人们的生活带来很多烦恼10。 据中国中西医药结合学会风湿病系统疾病委员会抽样调查结果显示，在中国抽样调查的106678人中，风湿病患

4、者达到18552人，占调查总数的17.4%。 目前，对于这种疾病的治疗，许多医学专家主张采用非手术治疗，即中药理疗的方法进行治疗。 在主要药物治疗风湿病的现状下，本研究结合当地短柄五加茎皮的药理功能，借鉴治疗风湿病的既成处方，开辟另一条途径，采用纯粮酒作为提取液，探索探讨了短柄五加去风湿酒的加工工艺，探讨了以短柄五加茎皮为主要材料的风湿酒1短柄五加研究情况1.1短柄五加生物学特性短柄五加为五加科五加属植物，分布范围极窄，主要分布在我国西北黄土高原上的陕北、宁夏六盘山、甘肃龙东一带的灌木林。叶有小叶的3-5叶柄非常短，长仅24毫米小叶纸，倒卵形到倒卵状的长圆形，长3-6厘米，宽1-2.5厘米，尖

5、端圆形或短尖，基部窄尖，两面都没有毛，边缘全缘，侧脉3-5对，上面不明显，下面只有3毫米长的小叶柄，伞花序单生或2-4个构成顶生短圆锥花序，直径1-1.5厘米，花多的总花梗长度1-2厘米，花后延长，无毛苞卵形，紫色，长约1毫米，前端丛生锈毛，边缘稀疏纤毛无毛花的浅绿叶有短柔的毛，边缘有5个小齿的花瓣5，卵形，前端尖，长约2毫米，开花时倒曲的雄蕊5，花丝长约2毫米子房5室花柱全部合计为柱状，长约0.8毫米果实接近球形，有5个深棱，长约5毫米，宿有花柱长约2毫米。 花期是8月11日。 1.2短柄五加化学成分的研究概况目前对短柄五加化学成分的研究不多，胡浩斌等人对短柄五加化学成分的研究表明，已经证实

6、的化学成分为香草醛、丹皮酚、香草酸、没食子酸甲酯、6，7，10 -三羟基-8-十八烷酸右旋芝麻素、16-羟基-贝壳松-19-酸、左旋对映贝壳松烯酸、-谷甾醇、-谷甾醇糖苷、硬脂酸、棕榈酸、亚麻酸、维生素a、B1等12-13目前，短柄五加的化学成分研究已经证实的化学成分为香草醛、丹皮酚、香草酸、没食子酸甲酯、6，7，10 -三羟基-8-十八烯酸、琥珀酸、扁枝衣即16-羟基-贝壳松-19-酸、左旋对映贝壳松酸、-西1.3短柄五加的药理作用研究概况短柄五加是我国特有的民间药用植物，其药用部位主要为茎皮和根，具有益气健脾、养心安神、活血化瘀、通孔经络作用。 研究表明，五加茎皮具有祛风湿、活血祛瘀、风寒

7、湿痹的治疗、壮筋骨、筋骨挛缩急性抗炎、镇痛、镇静、腰痛、阳痿、足弱、儿童延缓、水肿、脚气、疮疽毒作用，能提高血清抗体浓度、肿物毒作用，2材料和方法2.1仪器，药品和材料2.1 UV757CRT紫外可见分光光度校正、prism仪器公司电子天平ISO9001、北京塞德利斯科学仪器有限公司SHB-3型循环水为真空泵、郑州杜甫仪器工厂多的KQ-500DE型数控超声波清洗器、昆山市超声波仪器有限公司旋转蒸发器、功义市预华仪器有限责任公司DHG-9070A型2.1.2药品芦丁：上海生化试剂二厂、乙醇、石油醚、醚、硼酸氢化钠、水杨酸、H202、FeSO4、AlCl3、NaOH、HCL、FeCl3、镁粉2.1

8、.3实验材料为甘肃省正宁县中湾林场段2.2短柄五加茎皮有效成分提取方法精确称量2.00g短柄五加茎皮粉末，采用单因素分析法分别研究了材料液比、提取时间和提取液浓度对短柄五加茎皮有效成分提取效果的影响。 采用正交试验法得到短柄五加去风湿酒的最佳提取工艺。2.3萃取液中黄酮类化合物的定性分析2.3.1萃取物的颜色反应采集一定量的短柄五加茎皮萃取液，减压浓缩，用石油醚脱脂，干燥黄酮类粗品，分别与硼氢化钠、A1Cl3、Mg粉HCL、NaOH反应。 2.3.2吸收光谱分析取短柄五加茎皮提取液4ml、芦丁标准品10mg各70份乙醇定容装入100ml中，分别取一定体积测定紫外、可见光谱。 分别取上述稀释提取

9、液和芦丁标准品20ml，加入0.8ml5nan02，松弛，静置6min，进一步加入3.2 ml 10al (no3)，松弛，静置6min，进一步加入8 ml4NaOH，加入0.8 ml水。 在210410nm的范围内，以2Onm间隔测量紫外光光谱，在410810nm的范围内，以100nm间隔测量可见光谱。 2.3.3短柄五加茎皮提取液黄酮含量的测定分别加入70%芦丁标准液0.0、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、6.0、7.0、8.O ml，乙醇成20ml，按2同样操作，将短柄五加茎皮黄酮类化合物提取液的吸光度代入工作曲线求出黄酮类化合物浓度，然后代入式m=VV2CV1进行修正，可以修正

10、短柄五加茎皮黄酮类化合物提取量。 式中，v是短柄五加茎皮乙醇提取液的总体积V1是从总黄酮提取液中测定吸光度的黄酮液的体积V2是V1的稀释体积c是用回归式计算出的黄酮类化合物浓度m是提取的短柄五加茎皮的品质。 2.4短柄五加茎皮去风湿药酒的制备方案2.4.1短柄五加茎皮250g防风250g香加皮125g关白附100g威灵仙250g赤芍150g独活125g，2.4.2剥去处方中各材料的药理作用17，2.2皮，自然风干关于第二次浸出、粗滤、滤渣、第三次浸出、粗滤、滤渣表1短柄五加茎皮乙醇提取物的颜色反应综合短柄五加茎皮提取液的颜色反应结果，在茎皮提取液中含有总黄酮类化合物，在这些总黄酮类化合物中含有

11、总黄酮醇和二氢总黄酮19-20 3.2吸收光谱按2.3.2操作，测定芦丁标准品、短柄五加茎皮黄酮类化合物及其铝盐配合物的紫外、可见吸收光谱，参照图1-4。 图1芦丁，短柄五加茎皮黄酮类化合物的紫外光谱图2芦丁，短柄五加茎皮黄酮类化合物的紫外光谱，图3芦丁，短柄五加茎皮黄酮类化合物的可见光谱。 图4芦丁、短柄五加茎皮黄酮铝盐的可见光谱通过对芦丁标准液和短柄五加茎皮提取物的上述光谱曲线图进行比较，发现它们非常相似，两者在280nm、380nm和5lOnm处均有高吸收峰，短柄五加茎皮提取3.3标准曲线和萃取液中黄酮类化合物的含量的测定根据上述色谱分析选择5lOnm波长作为测定波长，利用比色法测定了工

12、作曲线和回归式(图5 )。 取出浓度(mg/ml )、OD值(A510nm )、图5芦丁标准曲线、短柄五加茎皮提取液2m1，以70的乙醇定容至20ml后，按照与制作工作曲线同样的操作，在波长51Onm下测定吸光度，工作曲线及3.4提取条件的选择3.4.1不同浓度的乙醇提取剂对黄酮类化合物提取量的影响表2不同浓度的乙醇对短柄五加茎皮中黄酮类化合物的提取效果的影响表2表明，不同浓度的乙醇提取剂对短柄五加茎皮黄酮类化合物的提取效果最差， 60%的乙醇提取效果最高的粮酒浓度越高提取效果可能越好，但直接影响药酒的口感，市场上也很难找到这样高浓度的粮酒。 3.4.2不同材料液比的黄酮类化含量的影响在常温下

13、，作为提取剂选择60%的乙醇，按照1:8、1:10、1:15、1:20的材料液比提取20天，测定结果如图6所示。 图6不同材料液对短柄五加茎皮黄酮类化合物提取量的影响一般来说，溶剂使用量越多提取效果越好，但溶剂量增大到一定值后，黄酮类化合物的提取量逐渐稳定。 材料液比过高会导致溶剂和能量的浪费，浓缩的工作量增大。 由图6可知，随着材料液比的增大，黄酮类化合物的提取量显着增大，直至1:10逐渐稳定。 可以认为，这是因为黄酮类化合物的溶出最大，作为短柄五加去风湿酒的最佳泡制材料液比选择了1:10。 3.4.3萃取时间对黄酮类化合物含量的影响，材料液比为1:10，加入60%的乙醇，常温下萃取10d、

14、15d、20d和25d (每隔1d，人工摇动5-10min )，得到萃取时间与黄酮类化合物的萃取量的关系。 图7时间对短柄五加茎皮黄酮类化合物提取量的影响如图7所示，随着提取时间的增加，短柄五加茎皮中黄酮类化合物的提取量明显增加，20d后黄酮类化合物的提取量基本逐渐稳定。 如果时间过长，则乙醇的挥发量增多，提取液的浓度降低，同时氧化分解的黄酮类化合物的量也逐渐增多，对短柄五加茎皮中的黄酮类化合物的提取量有一定的影响。 因此，作为短柄五加去风湿酒的最佳泡制时间优选20d . 3.4.4正交试验结果在上述单因素试验的基础上，进行了影响短柄五加茎皮黄酮类化合物提取液浓度、材料液比、提取时间的三因素四

15、水平正交试验，其中a为材料液比，b为提取时间，c为乙醇浓度，具体而言，短柄五加茎皮黄酮类化合物提取的影响因素水平如表3所示进行正交试验的表3的短柄五加茎皮黄酮类化合物提取的影响因素，由表4可知，试验(A2B3C4)黄酮类化合物提取量最高。 比较t值、r值，提取短柄五加茎皮黄酮类化合物的最佳工艺条件为A2B3C4，即乙醇浓度60，材料液比1:10，提取时间20天，黄酮类化合物的提取量最高。 从极差r的大小来看，材料液比、萃取时间、乙醇浓度三个因素对黄酮类化合物萃取量的影响主要依次为萃取时间的材料液比乙醇浓度(即BAC )。 3.5短柄五加去风湿酒的加工配方和技术3.5.1原料和方法配方：参照风湿治疗配方，稍作改变的提取液： 60纯粮白酒在西峰东湖酒厂购买的浸礼时间：浸礼时间为20天。 3.5.2短柄五加去风湿药酒加工技术按处方取一定量的中草药，放入预先洗净的砂目广口瓶中，然后放入60的纯粮白酒12500ml，常温下浸泡20天(每1d，手动摇摆5-10min )，粗过