分析方法验证--李宏业（2012,04.03）欧美GMP认证高级咨询师.ppt

1、2020/8/13,李宏业1,分析方法验证,主讲人：李宏业 欧美GMP认证高级咨询师 北京宏汇莱科技有限公司总经理 天津大学制药工程硕士班GMP课程专职讲师 国家食品药品监督管理局高级研修学院培训讲师,重点议题,法规要求 验证目的 检验项目和验证内容 分析方法确认 分析方法再验证,2020/8/13,李宏业2,分析方法的法规要求,第十二条 质量控制的基本要求： （四）检验方法应当经过验证或确认；,2020/8/13,李宏业3,分析方法的法规要求,第二百二十三条 物料和不同生产阶段产品的检验应当至少符合以下要求： （二

2、）符合下列情形之一的，应当对检验方法进行验证： 1.采用新的检验方法； 2.检验方法需变更的； 3.采用中华人民共和国药典及其他法定标准未收载的检验方法； 4.法规规定的其他需要验证的检验方法。,2020/8/13,李宏业4,分析方法的法规要求,（三）对不需要进行验证的检验方法，企业应当对检验方法进行确认，以确保检验数据准确、可靠；,2020/8/13,李宏业5,2020/8/13,6,分析方法的法规要求,药典或官方标准收载的方法 不需完整验证 需验证方法的适用性（确认） 自研方法或对官方标准进行了大幅调整 需完整验证,验证的目的,证明采用的

3、方法适合于相应的检测要求。,2020/8/13,李宏业7,2020/8/13,lihongye,8,检验项目和验证内容,注： 表示通常不需论证的项目； + 表示通常需论证的项目； 假如已论证重现性，可不需再论证中间精密度； 缺乏专属性的分析方法，应由其他分析方法来作补充； 有些情况不需要。,2020/8/13,lihongye,9,术语（1）,准确度是指用该方法测定的结果与真实值或参考值接近的程度，一般用回收率（）表示。 精密度是指在规定的测试条件下，同一个均匀供试品，经多次取样测定所得结果之间的接近程度，一般用偏差，标准偏差或相对标准偏差表示。,2020/8/13,

4、lihongye,10,术语（2）,专属性是指在其他成分（如杂质、降解产物，辅料等）可能存在下，采用的方法能正确测定出被测物的特性。如方法不够专属，应采用多个方法补充。 检测限是指试样中被测物能被检测出的最低量。 定量限是指试样中被测物能被定量测定的最低量，其测量结果应具一定准确度和精密度。,2020/8/13,lihongye,11,术语（3）,线性是指在设计的范围内，测试结果与试样中被测物浓度直接呈正比关系的程度。 范围是指能达到一定精密度、准确度和线性，测试方法适用的高低限浓度或量的区间。 耐用性是指在测定条件有小的变动时，测定结果不受影响的承受程度，为使方法可用于提供常规检验依据。,2

5、020/8/13,12,分析方法的验证项目,典型分析方法验证的项目： 专属性 specificity 精密度 precision 准确度 accuracy 检测限 detection limit 定量限 quantitation limit 线性 linearity 范围 range 耐用性 robustness,2020/8/13,13,分析方法的验证-专属性,专属性 定义：指一种方法在有可能的干扰物质（如杂质、 降解产物和基质）存在时，能够准确无误地评估 被分析物的能力 鉴别:确保可以鉴别被分析物 纯度检查：确保所有的分析过程能够为杂质的含量提供准确的数据，如相关物质检查、重金属限度检查、

6、有机挥发性杂质检查等 含量测定：提供准确的检测结果以保证含量样品中被分析物的含量或效价值准确无误,2020/8/13,14,分析方法的验证-专属性,专属性 方法 定性分析（鉴别）：样品阳性结果空白阴性结果结构相似物质的阴性结果； 杂质检查（对照品可得）：将可能的杂质对照品加入样品中； 杂质检查（对照品不可得）： 用另外一种官方的标准或经验证的方法对样品和经降解的样品分析，比较两种方法得到的杂质概况,2020/8/13,15,分析方法的验证-专属性,杂质检查（对照品不可得） 使用其他技术对峰纯度进行检查， 如二极管阵列检测器、MS等 含量测定： 被分析物与其他干扰峰完成分离。向样品中加入一定量的

7、干扰物，含量测定的结果不受干扰；检查主峰的纯度,分析方法的验证-专属性,鉴别试验： 本品的红外吸收图谱应与对照品的图谱一致。 采用与被测物结构类似的化合物以及被测物分别进行红外测试。 被测物为正反应。 被测物结构类似的化合物为负反应。被测物结构类似的化合物可选用中间体、副产物或降解产物等。,2020/8/13,李宏业16,分析方法的验证-专属性,鉴别： 化学滴定的颜色反应； 采用与被测物结构类似的化合物以及被测物分别进行鉴别试验。 被测物为正反应。 被测物结构类似的化合物为负反应。 被测物结构类似的化合物可选用中间体、副产物或降解产物等。,2020/8/13,李宏业

817,2020/8/13,18,分析方法的验证-精密度,精密度precision 定义：对均一样品重复取样检测每个检测结果间的接近程度，RSD%,CV% 重复性repeatability：短时间内同一分析人员使用 同一仪器 中间精密度intermediate precision:在同一实验 室内的变化，如不同分析时间、不同分析人员、不 同分析仪器 重现性reproducibility:在不同实验室内重复,2020/8/13,19,分析方法的验证-精密度,精密度 方法 100浓度6次 3浓度3次,2020/8/13,20,分析方法的验证-准确度,准确度 定义：方法的检测结

9、果与真实值的接近程度。 方法： 原料药：分析已知含量的对照品；第二种确定 的方法分析，结果比较 制剂：加样回收；第二种确定的方法分析，结 果比较 应在方法的范围内 计算回收率：3浓度3次,2020/8/13,21,分析方法的验证-检测限,检测限detection limit 定义：在声明的实验条件下所能检测到的被分析物的最小量。限度检查的指标；表示为在样品中的浓度, ppm 方法： 检测已知浓度的样品(对照品) 杂质的DL0.05% 信噪比2:1/3:1,2020/8/13,22,分析方法的验证-定量限,定量限quantitation limit 定义：在声明的实验条件下被分析物可被定量分析并

10、能满足合格的精密度和准确度的最小值。微量物质的定量分析：有关物质定量分析，有机挥发性物质的定量分析。，ppm 方法： 已知浓度样品（对照品） 相关物质0.05 证明精密度和准确度 信噪比10:1,2020/8/13,23,分析方法的验证-线性与范围,线性和范围 linearity and range 定义： 线性：在给定的范围内使检测结果直接或通过 数学转换后与被分析物在样品中的浓度成比例 的能力 范围：在适当的精密度、准确度和线性基 础上检测到的被分析物的最低水平到最高水平 区间,2020/8/13,24,分析方法的验证-线性与范围,方法：一定范围内的不同浓度点进样，绘制响应值（y）与浓度(

11、x)之间的回归线，计算回归方程，相关系数（r,r2） 主成分含量测定：80120检测浓度 杂质含量测定：定量限（50）120标准 装量差异：70130检测值 溶出实验：20规定范围,分析方法的验证-线性与范围,2020/8/13,李宏业25,要提供如下数据： 回归方程ya + bx 回归曲线 相关系数,2020/8/13,26,分析方法的验证-耐用性,耐用性robustness 定义：分析方法的某些参数发生微小变化时方法抗干扰的能力，表示在正常使用时的可靠性 方法：刻意改变参数，考察结果的变化 流动相的pH值、流动相的组成（极性的变化）、 不同供应商柱子、柱温、流速等

12、,分析方法的验证-耐用性,液相：评估柱温、流速、色谱柱、缓冲盐pH、有机相比例、流动相比例、溶液放置时间对检测结果的影响 气相：评估柱温、流速、色谱柱、溶液放置时间对检测结果的影响,2020/8/13,李宏业27,2020/8/13,28,分析方法的验证-系统适用性,系统适用性system suitability 耐用性验证的结果 影响参数在方法中列出 在日常样品分析前、过程中进行考察 色谱方法中尤为重要,分析方法的验证-系统适用性,液相和气相可以不同； 液相：任何两个组分之间的分离度R不小于1.5；重复进样(6次)的相对标准偏差RSD不大于2.0% 气相：任何两个组

13、分之间的分离度R不小于3；重复进样(6次)的相对标准偏差RSD不大于15%。,2020/8/13,李宏业29,2020/8/13,30,分析方法的验证,USP对不同方法验证项目的要求 * 根据不同的方法特点也可能需要 “” 需要 “” 不需要,2020/8/13,31,分析方法的验证,I类方法：制剂中原料药或活性成分（包括防腐剂）的定量分析方法； II类方法：原料药中杂质或制剂中降解化合物的分析方法；包括定量方法和限度检查； III类方法：药物性能特征分析方法：溶出，药物释放 IV类方法：鉴别实验,分析方法确认,适用于药典方法和其他已验证的法定标准。因为药典方法和其他

14、法定标准被认为是验证过的分析方法，不需要验证，但需要通过方法确认来证明方法在该实验室条件下的适应性。,2020/8/13,李宏业32,分析方法确认,对于方法确认，通常采用两种方式： 一、由两名检验人员分别独立对同一批产品进行检验（如可能使用不同的仪器）比较两人的检测结果来证明方法在本实验室（人员，分析仪器，试剂）的适用性； 二、根据验证目的和评估结果选择相关项目进行确认：（具体见下表）,2020/8/13,李宏业33,分析方法确认,2020/8/13,李宏业34,分析方法再验证,在某些情况下，如原料药合成工艺改变、制

15、剂处方改变、分析方法发生部分改变等，均有必要对分析方法再次进行部分或完整的再验证，以保证分析方法可靠。,2020/8/13,李宏业35,分析方法再验证,当原料药合成工艺发生改变时，可能引入新的杂质，杂质检查方法和含量测定方法的专属性就需要再进行验证，以证明有关物质检查方法能够检测新引入的杂质，且新引入的杂质对主成份的含量测定应无干扰。,2020/8/13,李宏业36,分析方法再验证,当制剂的处方组成改变、辅料变更时，可能会影响鉴别的专属性、溶出度和含量测定的准确度，因此需要对鉴别、含量测定方法再验证。当原料药产地来源发生变更时，可能会影响杂质检查和含量测定的专属性和准确度，因此需要对杂质检查方法和含量测定方法进行再验证。,2020/8/13,李宏业37,分析方法再验证,再验证原则：根据改变的程度进行相应的再验证。 当这种改变到达一定程度时，则需要完整的验证。如分析方法完全改变时，则应视为新方法并需要完整的验证。方法再验证是对分析方法的完善过程，应