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文档简介

1、实验二 质粒DNA的琼脂糖凝胶电泳分析,1、实验目的 ： 学习琼脂糖凝胶电泳的原理与方法, 及利用琼脂糖凝胶电泳检测纯度，浓度并分析质粒构型。 2、实验原理： 电泳检测技术 质粒构型,电泳： 是指带电粒子在电场中向与其自身带相反电荷的电极移动的现象,电泳概念及种类,琼脂糖凝胶电泳,琼脂糖凝胶电泳一般都采用水平式电泳槽，它具有灌胶、制板、点样等操作方便的优点；也可用于制备不同大小的凝胶；即使低浓度的琼脂糖凝胶也不易碎裂；而且器材廉价耐用。,DNA的分子量 DNA的构象* 琼脂糖浓度 *,影响琼脂糖电泳迁移率的主要因素,分子量Marker,DNA (EcoRI Hind III),100 bp M

2、arker,1kb Marker,不同构像质粒,质粒电泳图,pBSKSChiA,分离不同大小DNA片段的合适琼脂糖凝胶浓度,实验操作,1. 用胶带将洗净、干燥的水平板的边缘封住，形成一个胶模并水平放置。 2. 按水平板的长宽0.5cm胶厚，量取1TAE，并按1的浓度称取琼脂糖，在微波炉或电炉上加热至全熔* （清澈透明）。 3. 等凝胶温度降至大约5060以下时，加入1 mg/L溴化乙锭（EB）至终浓度为0.5ug/mL ；摇匀并平稳倒入水平电泳板中，除掉气泡，插入梳子*。,4.凝固后，将梳子轻轻拔出。 5.去掉胶带，将水平板放入加有0.5TBE电泳缓冲液的电泳槽中，并且使电泳缓冲液高出凝胶约1mm。 6.在parafilm膜（疏水性膜）上依次加： 质粒DNA 10ul 上样缓冲液 2ul （一小滴） 分别混匀后点样，记录点样次序。,7. 盖好电泳槽盖子，选择适当的电泳电压（5V/cm）及电泳方向(DNA阴极向阳极），开始电泳。 8.

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