microRNA定量检测-2.ppt

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2、RNAs with antisense complementarity to lin-14 Cell1993，75：843-854,2. C. elegans：let-7 Reinhart B J，Slack F J，Basson M ，et alThe 21-nucleotide let-7 RNA regulates developmental timing in Caenorhabditis elegansNature. 2000，403：901-906,August 24, 2020,南宁科迪技术讲座之MicroRNA,5,MicroRNA的特征,August 24, 2020,南宁科

3、迪技术讲座之MicroRNA,6,MicroRNA的特征,August 24, 2020,南宁科迪技术讲座之MicroRNA,7,MicroRNA的功能,发育 Timing (Lee et al. 1993) Cell proliferation (Brennecke et al. 2003) Stem cell 2004) 糖尿病(Poy et al. 2004) 胆固醇的生物合成(Krutzfeldt et al. 2005) DNA 甲基化与染色质修饰(Bao et al. 2004),August 24, 2020,南宁科迪技术讲座之MicroRNA,8,MicroRNA的作用原理,A

4、ugust 24, 2020,南宁科迪技术讲座之MicroRNA,9,MicroRNA的作用原理,August 24, 2020,南宁科迪技术讲座之MicroRNA,10,microRNA研究解决方案-发现新MiRNA,发现新的microRNA,August 24, 2020,南宁科迪技术讲座之MicroRNA,11,microRNA研究解决方案- MiRNA的检测,目前有很多与癌症临床诊断相关的研究在进行中。 定量PCR的方法由于其灵敏度高，需要样品量少，而被广泛应用。,MicroRNA的检测方法,August 24, 2020,南宁科迪技术讲座之MicroRNA,12,microRNA研究

5、解决方案- MiRNA的检测,August 24, 2020,南宁科迪技术讲座之MicroRNA,13,MicroRNA数据库及其应用,August 24, 2020,南宁科迪技术讲座之MicroRNA,14,microRNA靶标数据库,August 24, 2020,南宁科迪技术讲座之MicroRNA,15,MicroRNA查询数据库,August 24, 2020,南宁科迪技术讲座之MicroRNA,16,MicroRNA靶标预测,August 24, 2020,南宁科迪技术讲座之MicroRNA,17,MicroRNA靶标预测,August 24, 2020,南宁科迪技术讲座之Micro

6、RNA,18,MicroRNA靶标预测,August 24, 2020,南宁科迪技术讲座之MicroRNA,19,MicroRNA靶标预测,August 24, 2020,南宁科迪技术讲座之MicroRNA,20,MicroRNA查询方法-查找序列,已知MiRNA基因名称查询序列,August 24, 2020,南宁科迪技术讲座之MicroRNA,21,MicroRNA查询方法-查找序列,August 24, 2020,南宁科迪技术讲座之MicroRNA,22,MicroRNA查询方法-查找序列,August 24, 2020,南宁科迪技术讲座之MicroRNA,23,主 要 内 容,Augu

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8、26,加A尾与反转录一步完成,稀释至100ul，取2ul做qPCR（可以检测任何基因）。,含Primer,August 24, 2020,南宁科迪技术讲座之MicroRNA,27,Real time PCR原理-染料法,SYBR Green I：是一种能结合于所有dsDNA双螺旋小沟区域的 具有绿色激发波长的染料。,SYBR Green I,August 24, 2020,南宁科迪技术讲座之MicroRNA,28,SYBR Green I 法作用机理示意图,F,August 24, 2020,南宁科迪技术讲座之MicroRNA,29,Real Time PCR反应,已经含有,August 24

9、, 2020,南宁科迪技术讲座之MicroRNA,30,结果举例,灵敏度验证,August 24, 2020,南宁科迪技术讲座之MicroRNA,31,结果举例,microRNA定量检测多种用途,August 24, 2020,南宁科迪技术讲座之MicroRNA,32,结果举例,microRNA定量检测多种用途,August 24, 2020,南宁科迪技术讲座之MicroRNA,33,TaKaRa microRNA定量引物库,August 24, 2020,南宁科迪技术讲座之MicroRNA,34,常见问题-引物设计要求,August 24, 2020,南宁科迪技术讲座之MicroRNA,35

10、,常见问题-引物设计原则,August 24, 2020,南宁科迪技术讲座之MicroRNA,36,常见问题-模板要求,August 24, 2020,南宁科迪技术讲座之MicroRNA,37,常见问题-扩增不好可能的原因,常见问题-引用文献举例,August 24, 2020,南宁科迪技术讲座之MicroRNA,38,August 24, 2020,南宁科迪技术讲座之MicroRNA,39,主要内容,August 24, 2020,南宁科迪技术讲座之MicroRNA,40,MiRNA研究解决方案-MiRNA功能验证,MicroRNA 表达载体： 克隆表达感兴趣的MiRNA，然后进行筛选等研究

11、工作。,August 24, 2020,南宁科迪技术讲座之MicroRNA,41,MiRNA研究解决方案-MiRNA功能验证,MicroRNA 表达载体： 克隆表达感兴趣的MiRNA，然后进行筛选等研究工作。,41,August 24, 2020,August 24, 2020,南宁科迪技术讲座之MicroRNA,42,MiRNA研究解决方案-MiRNA功能验证,MiRNA的诱导表达,August 24, 2020,南宁科迪技术讲座之MicroRNA,43,联系我们,南宁科迪生物技术有限公司 地 址：南宁市大学东路98号世贸西城F座1605室电 话：13707881184传