微生物实验课件：沉 淀 反 应

1、医学微生物学与免疫学实验室规则,白大衣；勿在实验室饮食 实验中意外事故处理 实验结束后洗手 值日生打扫 实验报告（题目、目的、原理、材料、方法、结果、讨论）,实验成绩组成,操作考核分：按实验结束后进行的实验考核情况打分。 实验报告分：按实验报告的完成情况打分，为所有报告的平均分。 平时及作业分：按每次实验的出勤、纪律、值日情况，以及作业本完成情况打分（注：作业本可以购买、复印或自行抄写，学期末理论考试结束后由学习委员统一收齐交任课老师评阅打分）。,沉 淀 反 应,温州医学院微免教研室,沉淀反应 Ag + Ab 可溶性抗原 （如血清、毒素等）,温度、pH 浓度、电解质,抗原抗体 复合物,分类,沉

2、 淀 反 应,环状沉淀反应,絮状反应,琼脂扩散试验,双向扩散,单向扩散,电 泳 技 术,火箭免疫电泳,对流免疫电泳,一、双向免疫琼脂扩散 实验原理：可溶性抗原与相应抗体在半固体 琼脂内进行扩散，当两者比例合适时， 就出现白色沉淀线（阳性反应）。 沉淀线的形态、清晰度及位置反映抗原或抗 体的特异性和浓度等。利用已知抗原或抗体 检测未知抗体或抗原。,实验目的：,待测的标本甲或乙中是否含有AFP,一、双向免疫琼脂扩散 材料： 1盐水琼脂， 诊断血清（AFP Ab）, 阳性血清（含AFP Ag）， 生理盐水（NS）， 待检血清甲、乙。 载玻片，打孔器，湿盒，微量加样器，吸头。,一、双向免疫琼脂扩散 实

3、验方法： 1、融化1盐水琼脂； 2、制备半固体琼脂凝胶板：4 4.5ml/片 3、打孔：梅花孔 4、加样（每孔约10l）； 5、标记，放湿盒，37温箱24h后观察结果。,诊,乙,阴,乙,阳,甲,甲,实验结果分析,1,1,Anti-1,一、双向免疫琼脂扩散 结果判读： 阳性血清与诊断血清间形成沉淀线 生理盐水与诊断血清（抗体）之间无沉淀线 待检血清、阳性血清与诊断血清间形成沉淀线且融合，说明待检血清和阳性血清抗原相同。,二、对流免疫电泳 【实验原理】 蛋白质抗原在碱性缓冲液中带负电荷，在电泳时从负极向正极移动。抗体属球蛋白，在碱性缓冲液只带微弱的负电荷，而且相对分子质量较大，电泳力较小，在琼脂电

4、渗力作用下反而由正极向负极移动。 这样就使抗原和抗体定向对流，在两孔间相遇时发生反应，并在比例合适处形成肉眼可见的白色沉淀线。,对流免疫电泳实验原理,电泳力,电渗力,【实验材料】 1电泳缓冲液：pH 8.6巴比妥缓冲液。 2抗体：诊断血清（AFP抗体）。 3抗原：阳性血清、待检血清甲乙。 41盐水琼脂。 5电泳仪、电泳槽、载玻片、打孔器、移液器、移液头。,【实验方法】 1制板 2打孔：双排孔 3加样 4电泳 将加好样品的琼脂板置电泳槽上，抗原侧置阴极端，抗体孔侧置阳极端。搭好桥后，接通电源，控制电压610 V/cm板长，电泳约3060 min。 5关闭电源，取出琼脂板，观察结果。,正极,负极,Ag Ab,Ag Ab,【实验结果】 将玻片对着强光源观察，生理盐水孔与诊断血清间无沉淀线，阳性血清孔与诊断血清之间有白色沉淀线，若待检血清孔与诊断血清孔之间有沉淀线出现，则表示AFP阳性，否则为阴性。,电渗：指在电场中液体对于一个固定固体的相对移动称