基因工程名词解释

1、精品 料推荐基因工程一、名词解释：1蛋白质工程2基因组文库3多克隆位点4Southern 杂交5基因治疗6转基因动物7 显微注射技术8 Klenow 片段9 荧光定量 PCR10 基因芯片11cDNA文库12基因枪13 融合蛋白14 表达载体15 限制性核酸内切酶16 Northern杂交17 逆转录 PCR18 转基因植物19 体细胞核移植20 DNA改组21多克隆位点22穿梭载体23 DNA连接酶24 核酸分子杂交25 融合蛋白26 基因敲除27 反义核酸技术28 遗传工程29 生物技术30 基因工程31 细胞工程32 黏粒载体 Cosmid vecto ：33 分子克隆34 载体35 转

2、化和转染36 基因文库37 RACE38探针 Probe39逆转录 PCR(RT-PCR)40插入失活 Insert inactivation41S-D 序列1精品 料推荐42穿梭质粒载体 Shuttle plasmid vector43MCS44同裂酶（同切点酶）45同尾酶46测序酶47限制性核酸内切酶48限制性片段长度多态性（RFLP）49星号活性50克隆载体：51YAC（酵母人工染色体）：52BAC（细菌人工染色体）53表达载体54病毒表达载体：55T- 载体：56Ti 质粒（ tumor inducing plasmid）：57 粘粒载体58一元载体：59双元载体：60 卸甲载体：61

3、质粒的相容性：62质粒的不相容性：63 转移性：64T-DNA65T-DNA区：66 - 互补 ：67cos 序列（ cohesive endsite）：68COS位点：69端粒重复序列（ telomeric repeat，TEL）：70 自主复制序列：71多克隆位点72分子杂交：73菌落原位杂交：74真核细胞原位杂交：75荧光原位杂交（ fluorescence in situ hybridization， FISH）76凝胶阻滞试验：（ gel retardation assay）77盒式诱变78定点诱变（寡核苷酸介导；重叠延伸PCR、大引物 PCR）79体外随机诱变80重叠基因81DNa

4、se I 足迹试验82衔接物83DNA接头（人工接头）84接头分子连接法（ DNA接头连接法）85 ScFv2精品 料推荐86基因置换87转化子（ transformant）：88、感受态（ competence）：89 “选择（ selection）”90“筛选（ screening ）”91 目的基因：92 融合基因：93报告基因：94代表性差异分析：952m质粒：96mRNA差异技术：97动物生物反应器：98反向 PCR：99平台效应：100 RAPD技术：101 AFLP：102松弛型质粒：103亚克隆：104核酸疫苗：105基因工程疫苗：106 RDA和 SSH ：107转座子标签技

5、术 /T-DNA 标签技术：108 随机引物 (Randomprimer) ：109 引物步移 (Primerwalking)：答案：1蛋白质工程基于对蛋白质结构和功能的认识， 进行分子设计， 通过基因工程途径定向地改造蛋白质或创造合乎人类需要的新的突变蛋白质的理论或实践活动。2基因组文库把某种生物的基因组 DNA切成适当大小，分别与载体结合，导入宿主细胞，形成克隆。汇集这些克隆， 应包含基因组中的各种 DNA顺序，每种顺序至少有一份代表。这样的克隆片段的总汇，叫基因组文库。3多克隆位点一段短的 DNA 序列，含有多种限制性核酸内切酶的酶切位点，是外源基因插入的位点。4 Southern 杂交

6、利用硝酸纤维素膜或经特殊处理的滤纸或尼龙膜具有吸附DNA 的功能，先作 DNA片段的凝胶电泳，并将凝胶电泳中的DNA 区带吸附到膜上，然后直接在膜上进行同位素标记核酸探针与被测样品之间的杂交，再通过放射自显影对杂交结果进行检测。5 基因治疗就是指向有功能缺陷的细胞补充相应功能基因，以纠正或补偿其基因缺陷， 从而达到治疗的目的。3精品 料推荐6 转基因动物借助基因工程技术把外源目的基因导入动物的生殖细胞、 胚胎干细胞或早期胚胎，并在受体染色体上稳定整合， 使之经过各种发育途径得到能把外源目的基因传给子代的个体，叫转基因动物。7 显微注射技术将在体外构建的外源目的基因， 在显微操作仪下用极细的微吸

7、管注射到处于原核时期的受精卵原核中，外源基因在受精卵繁殖过程中通过 DNA的复制而整合到动物基因组中，再通过胚胎移植技术将整合有外源基因的受精卵移植到受体的子宫内继续发育，进而得到转基因动物。8 Klenow 片段DNA聚合酶的大亚基，具有53 聚合酶和 5 3 核酸外切酶的作用。9 荧光定量 PCR通过荧光染料或荧光标记的特异性探针，对 PCR 产物进行标记跟踪，实时在线监控反应过程， 结合相应的软件可以对产物进行分析。 以实时检测外源基因的表达情况。10 基因芯片将基因文库的克隆以矩阵的方式排列在芯片上，利用不同荧光标记不同组织的RNA或 cDNA或基因群，与芯片进行杂交，从而确定不同组织

8、的差异表达基因或特定基因群的方法。11、cDNA文库将某一个组织中的全部 mRNA都反转录成 cDNA，分别与载体连接形成的克隆的集合体。12、基因枪基因枪法，也称微粒轰击法，是将 DNA 包被到金粒或钨粒中，然后把这些粒子加速推进靶细胞。13 融合蛋白融合表达一般是将克隆化的基因引入某表达载体编码的高表达蛋白一起融合表达。14 表达载体含有基因表达调控序列能将目的基因在人工控制下置于生物宿主中大量生产的载体。15 限制性核酸内切酶限制性核酸内切酶是一类能识别双链 DNA 分子中特异性核苷酸序列并由此特异切割 DNA双链结构的水解酶。16 Northern杂交又称为 RNA印迹法，是将 RNA

9、 样品通过琼脂糖凝胶电泳进行分离，再转移到硝酸纤维素滤膜上，用同位素或生物素标记的 DNA或 RNA 特异探针针对固定于膜上的 mRNA进行杂交，洗脱除去非特异性杂交信号，对杂交信号进行分析，以确定目的基因的表达组织。17 逆转录 PCR以 mRNA为模板用逆转录酶进行的 PCR反应。18 转基因植物含有外源目的基因并能稳定遗传的植物体。19 体细胞核移植4精品 料推荐将外源目的基因导入能传代培养的动物体细胞 （包括动物成体体细胞、 胎体成纤维细胞等），以这些动物体细胞为核供体，通过显微操作或电融合方法使核供体与去核的原核胚细胞或去核的成熟卵母细胞核受体进行细胞重组融合， 使其不经过有性繁殖过

10、程。 然后再对重组的胚胎进行胚胎移植， 进而得到带有外源基因的转基因动物。20 DNA改组用 DNAaseI 先将一个 DNA 片段消化成许多小片段，然后不加引物进行 PCR，使得消化后 DNA小段之间重新按多种组合方式连接重组， 然后利用原来整片段 DNA 两端的引物进行加引物的 PCR扩增，以便得到一系列改组后的突变 DNA序列。21、多克隆位点：一段短的 DNA 序列，含有多种限制性核酸内切酶的酶切位点，是外源基因插入的位点。22穿梭载体：能够在两种以上的受体细胞中繁殖和扩增的载体。23 DNA连接酶：DNA连接酶负责双链 DNA中相邻 3-OH 与 5- 磷酸基团之间的磷酸二酯键的形成

11、。24 核酸分子杂交：主要是根据两条单链 DNA（或 DNA与 RNA）中互补碱基序列能专一配对的原理进行的。在一定条件下，单链 DNA 或 RNA 能与另一条单链 DNA上互补的碱基形成氢键，从而使两条单链杂交形成双链 DNA分子。通常利用已标记的某一 DNA或 RNA 片段或合成一段寡核苷酸作为探针， 探测重组 DNA分子中是否有 DNA片段与探针发生同源性杂交，然后利用放射自显影方法进行检测。25 融合蛋白：融合表达一般是将克隆化的基因引入某表达载体编码的高表达蛋白一起融合表达。26 基因敲除：利用同源重组的原理，通过载体将外源的失活的基因替换掉内源的正常的基因，从而使基因沉默而不表现突

12、变性状的方法。27 反义核酸技术：利用反义 DNA或反义 RNA能够与内源 mRNA互补杂交，从而抑制内源基因表达的技术。28遗传工程是遗传学和工程学相结合的一门技术科学。 借用工程技术上的设计思想， 在离体条件下，对生物细胞、细胞器、染色体或 DNA分子进行按图施工的遗传操作，以求定向地改造生物的遗传性。遗传工程的概念有广义和狭义之分。29生物技术又称生物工艺学， 生物工程学。 是根据生物学、 化学和工程学的原理进行工业规模的经营和开发微生物、 动植物细胞及其亚细胞组分， 进而利用生物体所具有的功能元件 ( 如基因、蛋白质 ) 等来提供商品或社会服务的一门综合性科学技术。 它包括基因工程、细

13、胞工程、酶工程和发酵工程等。30基因工程 (gene engineering)又称基因操作 (gere emanipulation) 、重组 DNA(recombinant DNA)。基因工程是以分子遗传学理论为基础， 以分子生物学和微生物学的现代方法为手段， 将不5精品 料推荐同来源的基因 (DNA分子 ) ，按预先设计的蓝图，在体外构建杂种 DNA分子，然后导人活细胞，以改变生物原有的遗传特性，获得新品种，生产新产品，或是研究基因的结构和功能。31细胞工程 (cell engineering)应用细胞生物学的原理和方法，结合工程学的技术手段，按照人们预先的设计，有计划地改变或创造细胞遗传性

14、的技术， 以及在体外大量培养和繁殖细胞， 或获得细胞产品，或利用细胞体本身的技术领域。 主要内容包括细胞融合、 细胞拆合、染色体转移、基因转移、细胞或组织培养等。由于所用细胞的来源不同，细胞工程又分为微生物细胞工程、植物细胞工程、动物细胞工程等。32黏粒载体（ Cosmid vector ）含有 cos 位点的质粒载体。33克隆 (clone)意为无性繁殖系。 DNA克隆即将 DNA的限制酶切片段插入克隆载体，导入宿主细胞，经无性繁殖，以获得相同的 DNA扩增分子。故 DNA克隆为分子克隆。34载体将外源 DNA带入宿主细胞并进行复制的运载工具，称为载体（ vector ）。克隆载体通常是由质

15、粒、病毒或一段染色体 DNA改造而成。35转化和转染将外源 DNA导入宿主细胞， 从而改变细胞遗传性状， 称为转化； 将病毒 DNA直接导入细跑，称为转染。36基因文库基因文库是指整套基因组 DNA片段分子克隆的总体。 基因文库的构建包括基因组DNA的随机片段化、载体 DNA的制备、重组体 DNA的体外包装、重组噬菌体感染大肠杆菌、基因文库的鉴定和扩增等步骤。37RACE是一种通过 PCR进行 cDNA末端快速克隆的技术，是以 mRNA为模板反转录成 cDNA 第一链后用 PCR技术扩增出某个特异位点到 3，或 5，端之间未知序列的方法。38Probe:指被标记物质标记了的核酸。39逆转录 P

16、CR(RT-PCR)：先用逆转录酶作用于 mRNA，以寡聚 dT 为引物合成 cDNA第一链，然后用已知一对引物，扩增嵌合分子，这种方法称为逆转录 PCR。40插入失活 :基因工程载体上的某些选择标记基因常常含某种或某几种限制性内切酶的单一酶切位点，在该位点用相应的限制性内切酶处理， 并将外源 DNA片段插入该位点，则插入的外源 DNA片段将破坏原有基因的读码框， 往往导致原有的选择标记基因无法翻译表达， 或即使翻译表达， 形成的也是丧失了原有生物活性的蛋白质， 这一现象称为插入失活。41S-D 序列：在大肠杆菌 mRNA的核糖体结合位点上，含有一个转译起始密码子及同 16S 核糖体 RNA

17、3，末端碱基互补的序列，该序列最初由 Shine 、Dalgarno 发现，故后来命名为 Shine Dalgarno 序列，简称 S-D 序列。42穿梭质粒载体：指一类由人工构建的具有两种不同复制起点的选择标记，因而可在两种不同宿主6精品 料推荐细胞中存活和复制的质粒载体。43MCS:指载体上人工合成的含有紧密排列的多种限制核酸内切酶的酶切位点的 DNA片段。44同裂酶（同切点酶） ：有一些来源不同的限制酶识别的是同样的核苷酸靶序列，这类酶称为同裂酶。45同尾酶：与同裂酶对应的一类限制性内切酶 , 它们来源各异，识别的靶序列也各不相同 , 但切割后都能产生相同的黏性末端 , 特称为同尾酶。4

18、6测序酶：是经修饰过的 T7 噬菌体 DNA聚合酶，是采用缺失的方法，从外切核酸酶结构域中除去 28 个氨基酸，这样使得 T7DNA聚合酶完全失去了 3-5外切酶活性，只有 5-3聚合酶活性，而且聚合能力很强，测序时常用此酶。47限制性核酸内切酶：是一类能识别和切割双链 DNA分子中特定碱基系列的核酸水解酶。限制 - 修饰系统中的限制和修饰作用： 限制 - 修饰系统中的限制作用是指一定类型的细菌可以通过限制性酶的作用，破坏入侵的外源 DNA(如噬菌体 DNA等) ，使得外源 DNA对生物细胞的入侵受到限制； 而生物细胞 ( 如宿主 ) 自身的 DNA分子合成后，通过修饰酶的作用， 在碱基中特定

19、的位置上发生了甲基化而得到了修饰， 可免遭自身限制性酶的破坏，这就是限制 - 修饰系统中的修饰作用。48 限制性片段长度多态性（RFLP）：当 DNA序列的差异发生在限制性内切酶的识别位点时， 或当 DNA片段的插入、缺失或重复导致基因组 DNA经限制性内切酶酶解后， 其片段长度的改变可以经过凝胶电泳区分，出现的这种 DNA多态性称为限制性片段长度多态性。49 星号活性：限制性内切核酸酶识别和切割特异性位点是在特定的条件下测定的。 当条件改变时，许多酶的识别位点会改变， 导致识别与切割序列的非特异性， 这种现象称为星号活性。（“非最适的”反应条件例如高浓度的核酸内切限制酶、高浓度的甘油、低离子

20、强度、用 Mn2+取代 Mg2+以及高 pH 值等。 ) 克服星号活性的方法：维持反应体系适当的离子强度、较低的温度或酶浓度，尽可能缩短反应时间或DNA样品的重新处理等。50克隆载体：主要用于扩增或保存 DNA片段，是最简单的载体。主要有：质粒载体、噬菌体载体、黏粒载体、人工染色体（YAC和 BAC）。51YAC（酵母人工染色体）：是利用酿酒酵母的染色体的复制元件构建的载体，其工作环境也是在酿酒酵母中。52BAC（细菌人工染色体）：是基于大肠杆菌（ Ecoli ）的 F 质粒构建的高通量低拷贝的质粒载体。53表达载体：是可携带外源基因进入宿主细胞进行复制并进行转录、翻译的载体。54病毒表达载体

21、：是以病毒基因组序列为基础，插入必要的表达元件所构建成的真核基因转移工具。7精品 料推荐55 T- 载体：Taq 酶的末端转移酶活性可在 PCR产物的 3端加上一个不依赖于模板的 A，根据这一特性，为方便进行 PCR产物的直接克隆而开发出 T- 载体。56Ti 质粒（ tumor inducing plasmid）：是在根癌农杆菌中发现的可决定冠瘿病 （即可诱发寄主植物产生冠瘿瘤） 的质粒。大小在 200kb 左右。57粘粒载体：由人工构建的、大小一般在 57kb 左右、含有 DNA的 cos 序列和质粒复制子的一类特殊的质粒载体。58一元载体：含目的 DNA的中间表达载体与改造后的受体（ T

22、i 质粒）通过同源重组所产生的一种复合型载体。59双元载体：是指由两个分别含有T-DNA和 vir区的相容性突变 Ti 质粒构成的系统。60 卸甲载体：将 Ti 质粒上的 T-DNA的致瘤基因全部去掉，仅保留其两边界及与T-DNA转移所必需的 25bp 序列而构建成的载体。61质粒的相容性：是指两种质粒是否可以共存于同一个细胞，如果能够共存则叫相容又叫亲和。62质粒的不相容性：两个质粒在同一宿主中不能共存的现象， 出现这种现象的原因主要是它们常常共用同一复制系统。63 转移性：质粒具转移性是指在自然条件下， 很多质粒可以通过称为细菌接合的作用转移到新宿主内。不含 tra 基因的质粒则不具备转移

23、性。64T-DNA ：能导入宿主细胞并插入其DNA中发挥作用的 Ti 质粒部分 DNA片段。65T-DNA区：即转移 DNA，能转移并整合在植物细胞核基因组上的、决定植物形成冠瘿瘤的一段 DNA。LTS 和 RTS对于 T-DNA的转移和整合是不可缺少的。66 - 互补 ：指 lacZ 基因上缺失近操纵基因区段的突变体与带有完整的近操纵基因区段的 - 半乳糖苷酶（ -galactosidase ，由 1024 个氨基酸组成）阴性的突变体之间实现互补。67cos 序列（ cohesive endsite）：DNA分子两端各有 12 碱基 (5 -GGGCGGCGACCT3)- 的单链互补粘性末端

24、，当 噬菌体进入细菌细胞后， 其 DNA可迅速按碱基互补配对结合形成双链环状 DNA分子。68COS位点：当 DNA进入细菌细胞后， 便迅速粘性末端配对形成双链环状DNA分子，这种粘性末端结合形成的双链区域叫做COS位点69 端粒重复序列（ telomeric repeat， TEL）：定位于染色体末端一段序列， 用于保护线状的 DNA不被胞内的核酸酶降解， 以形成稳定的结构。8精品 料推荐70 自主复制序列：一段特殊的序列，含有酵母菌中DNA进行双向复制所必须的信号。71 多克隆位点：含有紧密排列的多个限制性内切酶识别位点的一段DNA片段。72、分子杂交：是指在分子克隆中的一类核酸和蛋白质分

25、析方法， 用于检测混合样品中特定核酸分子或蛋白质分子是否存在及其分子量大小。73、菌落原位杂交：是将菌落或噬菌斑转到固相膜上， 原位裂解细胞后使核酸固定在膜上， 然后与探针杂交。用标记的核酸探针， 经放射自显影或非放射检测体系， 在组织细胞间期染色体上对核酸进行定位和相对定量研究的一种手段。74、真核细胞原位杂交：是一项组织化学与分子杂交相结合的技术， 使探针与固定在载玻片上的细胞组织切片内的变性染色体杂交。75、荧光原位杂交（ fluorescence in situ hybridization， FISH）：对寡核苷酸探针做特殊的修饰和标记，后用原位杂交方法与靶染色体或DNA上特定的序列结

26、合， 再通过与荧光素分子相偶联的单克隆抗体（单个细胞增殖形成的细胞群所产生的抗体）来确定该DNA序列在染色体上的位置。76、凝胶阻滞试验：（ gel retardation assay）：又叫 DNA迁移率变动试验（ electrophoretic mobility shift assay，EMSA），是用于体外研究DNA与蛋白质相互作用的一种特殊的凝胶电泳技术。77 盒式诱变：就是用一段人工合成具有突变序列的 DNA片段，取代野生型基因中的相应序列。这就好象用各种不同的盒式磁带插入收录机中一样， 故而称合成的片段为“盒”，这种诱变方式为盒式诱变。78 定点诱变（ site-directed

27、mutagenesis）：是使已克隆基因或 DNA片段中任何一个特定碱基发生取代、 插入或缺失突变的过程。79、体外随机诱变：指随机的在克隆化DNA中引入碱基置换突变。80、重叠基因不同基因的核苷酸序列有时为相邻两个基因共用， 将核苷酸彼此重叠的两个基因称为重叠基因81、DNase I 足迹试验：DNaseI 足迹试验是一种鉴别 RNA聚合酶等蛋白质在 DNA上结合位点的方法，它不仅能找到与特异性 DNA结合的目标蛋白，而且能告知目标蛋白结合在哪些碱基部位。82 衔接物：是指人工合成的由 1012nt 组成的、具有一个或数个限制性内切核酸酸识别位点的平末端的双链寡核苷酸短片段。 此方法适用于没

28、有衔接物限制性内切核酸酶酶切位点的外源 DNA片段。83 DNA接头（人工接头） :是指人工合成的含有限制酶识别顺序的核苷酸片段。 人工合成的一类具有某种限制性内切酶粘性末端，另一头为平末端的双链寡核苷酸片段。9精品 料推荐84 接头分子连接法（ DNA接头连接法）：将具有平末端的外源 DNA片段与人工接头分子在 T4 DNA连接酶的作用下连接起来；然后与具有同样粘性末端的载体 DNA分子在 T4 DNA连接酶作用下连接成重组体。85ScFv它是由抗体重， 轻链的可变区基因 (VH、VL)之间通过一段编码连接肽基因， 拼接后表达形成的重组蛋白。 是一种具有抗原结合能力的最小抗体片段， 可在一些

29、不需 Fc 段效应功能的实际应用中开展研究和应用。其优点是分子量小，易于穿透组织到达靶器官发挥功效，易于构建和生产，但易于被清除。86 基因置换是指将致病基因整个地被有功能的正常基因所置换，使致病基因永久地得到更正。87转化子（ transformant ）：经转化获得外源遗传物质 /DNA的细胞，是向有功能缺陷的细胞补充相应功能。88、感受态（ competence）：作为受体细胞的细菌经一定处理 ( 如冰冷的 CaCl2 溶液）后处于易于接受外源DNA的状态。89 “选择（ selection）” ：是指通过某种外来附加压力 （或因素）的辨别作用， 呈现具有重组 DNA分子的特定克隆类型的

30、一种方法。90“筛选（ screening ）”则是指通过某种特定的方法， 从被分析的细胞群体或基因文库中， 鉴定出真正具有所需要重组 DNA分子的特定克隆的过程。91 目的基因：指那些已被或者准备要被分离、改造、扩增或表达的特定基因或DNA 片段。92 融合基因：是指应用 DNA体外重组技术构建的一类具有来自两个或两个以上的不同基因核苷酸系列的新型基因。93报告基因：是指编码产物能够被快速测定、常用于判断外源基因是否成功地导入受体细胞（器官或组织），是否表达的一类特殊用途的基因。94代表性差异分析：利用了 PCR以指数形式扩增双链模板， 而以线形形式扩增单链模板的特性， 设计独特的接头和引物

31、，扣除共有序列，以指数形式扩增特有序列， 通过消减和富集，使得目的基因得到特异性扩增的一种基因克隆的方法。95、2m质粒：是酿酒酵母含有一个长度为 2 微米的内源质粒，它的 DNA分子通常与蛋白质结合构成复合物，存在于核区。 2 微米质粒含有自主复制起始区和 STB区， STB系列能够使质粒在供体细胞中维持稳定。96、mRNA差异技术：也是利用基因在一些组织或器官中的特异表达的原理，将两种组织的 mRNA提取出来，通过反转录和进行电泳，找出差异的带。97、动物生物反应器：从转基因动物体液或血液中收获基因产物即是所谓的动物生物反应器。10精品 料推荐98反向 PCR：用已知片段内部没有的限制性内

32、切酶切割模板 DNA，再将酶切后的 DNA片段连接成环状分子，其中至少有一个环状分子含有完整的已知片段。 根据已知片段两端的序列设计引物，可将邻近的 DNA片段扩增出来。99平台效应：在 PCR反应后期，产物的积累按减弱的指数速率增长。原因： 底物浓度因消耗而降低， dNTPorprimers ，掺入速度减慢； dNTP 或酶的稳定性下降末端产物抑制（焦磷酸、 dsDNA）非特异性竞争（非特异性引物或引物二聚体）特异性产物自身复性（ 10-8M）高浓度产物下，变性不彻底。100 RAPD技术：是建立在PCR基础之上的一种可对整个未知序列的基因组进行多态性分析的分子技术。其以基因组 DNA为模板

33、 , 以单个人工合成的随机多态核苷酸序列 ( 通常为 10nt) 为引物 , 在 Taq 酶作用下 , 进行 PCR扩增。101 AFLP：以 PCR为基础，结合了 RFLP、 RAPD的分子标记技术。把 DNA进行限制性内切酶酶切，然后选择特定的片段进行 PCR扩增 ( 在所有的限制性片段两端加上带有特定序列的“接头”， 用与接头互补的但 3端有 3 个随机选择的核苷酸的引物进行特异 PCR扩增，只有那些与 3端严格配对的片段才能得到扩增 ) ，再在有高分辨力聚丙烯酰胺凝胶电泳进行 PCR产物分离分开这些扩增产物， 从而产生 DNA 指纹，用荧光法或银染染色法均可检测之。102松弛型质粒：细

34、菌细胞中质粒的数目有很大差异。 多的每个细胞里可以达几十乃至几百份拷贝，少的则只有一到几份拷贝。 高拷贝数的质粒称为松弛型质粒， 有的质粒拷贝数较多，可随时复制，与染色体的复制不相关，称为松弛型质粒。103亚克隆：对已经获得的目的 DNA片段进行重新克隆， 即将已克隆的 DNA片段从一载体向另一载体的转移的过程。 目的在于对目的 DNA进行进一步分析， 或者进行重组改照等。104核酸疫苗：核酸疫苗又称基因疫苗或 DNA疫苗，是利用基因重组技术将编码抗原的基因装入载体，然后直接导入动物体内， 通过机体细胞的转录系统合成蛋白， 产生的蛋白作为抗原诱导免疫系统产生免疫应答， 即通过细胞和体液免疫反应

35、产生抗体， 从而达到预防和治疗疾病的目的。105基因工程疫苗：将基因工程技术应用于疫苗生产所得的疫苗即为基因工程疫苗。疫苗一般是由灭活或减毒的病原体做成的可预防相应病原物引起疾病的药物 , 通过接种人或动物在其体内建立抗感染免疫反应而产生保护作用106 RDA和 SSH ：RDA不能解决高丰度序列对低丰度序列富集的干扰， 因此通常需要进行多轮的扣除杂交过程。针对此缺陷，1996 年,Diachenko 等人在 RDA的基础上发展出了 SSH 技术。 SSH在保留 RDA的差减富集和动力学富集因素的同时，通过在杂交之前对cDNA的丰度进行均一化处理，使丰度上有差别的单链 cDNA相对含量基本一致

36、，从而解决了高丰度序列对低丰度序列富集的干扰。107转座子标签技术 /T-DNA 标签技术：11精品 料推荐当转座子或 T-DNA 转入生物基因组 , 整合到染色体上的时候 , 有可能是插入到染色体上的某个基因中 , 这时会破坏该基因的结构，从而引起表型变异，把变异个体的 DNA提取出来，构建成基因组文库，再用转座子或 T-DNA为模板制备探针，克隆出该突变基因， 再用该突变基因作探针从野生型个体中克隆出目的基因。 目的基因：指那些已被或者准备要被分离、 改造、扩增或表达的特定基因或 DNA片段。108 Randomprimer随机引物，对于一段待测的未知序列 DNA片段，往往已装载在载体上，

37、 因此待测 DNA片段的两端相当于添加了已知的载体片段。 这样就可以根据载体序列设计的通用引物测定待测 DNA片段两端的序列。109 Primerwalking引物步移，引物依次推进法是从目的片段 （在待测片段中若知道部分核苷酸序列） 的一端开始，利用载体上的序列为依据，设计第一次反应的反应引物进行测序，然后，依次根据前一次测序结果，设计下一次反应引物，递进测序，直至完成。二、填空题1. 世界上成功构建的第一个体外重组 DNA分子是在 年完成的。2. 质粒载体能够克隆 大小的 DNA片段，噬菌体能够克隆 大小的 DNA片段。3. 外源基因在动物的血液中表达，从而可以在动物血液里直接提取外源基因

38、的产物，这种基因产品的生产方式叫 。4. 用琼脂糖凝胶电泳时， DNA片段越大，离点样孔越 ，而 DNA片段越小，离点样孔越 。5. 用化学降解法进行 DNA 测序时，必须具有 个反应系统，用酶促合成法法进行 DNA测序时，必须具有 个反应系统。6. 电转化的原理是在受体细胞上施加短暂的高压电流脉冲后，结果在细胞膜上形成许多 ，从而使 容易进入到受体细胞内。7. 噬菌体根据接受外源 DNA的方式不同，可以分为 和 两种类型载体。8. 互为同裂酶的两种限制性核酸内切酶来源，产生的粘性末端 。9.酵母双杂交系统通常含有两个载体，一个载体含有酵母转录因子GAL4 的 ，另一个载体必须含有 GAL4的

39、 。10.目前抗虫转基因植物常常用到的外源基因主要是，从而达到杀死害虫的目的。11.在转基因植物中，常用的显色或发光标记的报告基因有， ， 等。12. 基因工程诞生于 年。13. 基因工程中外源 DNA与载体 DNA分子所形成的杂合分子叫 。14. 外源基因在人体表达，使人体能克服某一缺陷或疾病，这种基因工程技术叫 。15. 将抗性基因转入农作物中，使之具有某种抗病能力，得到的农作物叫。16. 用载体制作转基因植物时，最常用的载体是质粒。17. 粘粒载体能够克隆 大小的 DNA片段，人工酵母染色体 YAC 能够克隆 大小的DNA片段。18.DNA 自动测序标记的是，常规 Sanger 双脱氧链

40、终止法标记的是。19. 显微注射技术一般是在显微镜下将目的 DNA分子注射进入动物受精卵的 （ ）中，从而产生转基因动物。20. 基因工程构建基因重组体是指将 与 的进行连接重组。12精品 料推荐21. 用琼脂糖凝胶电泳时， DNA片段越大，离点样孔越 ，而 DNA片段越小，离点样孔越 。22. Northern 杂交的用途主要是用来检测 在特定组织的 情况。23. 粘粒载体是由 和 两部分组成的。24. 质粒载体能够克隆 大小的 DNA 片段，噬菌体能够克隆 大小的 DNA片段。25、将人的抗病毒干扰基因“嫁接”到烟草的 DNA分子中，可使烟草获得抗病毒的能力，形成转基因产品。试分析回答：(

41、1)人的基因工程之所以能接到植物体中去，原因是：。(4) 不同生物间基因移植成功， 说明生物共有一套 ，从进化的角度看， 这些生物具有 。(3)烟草具有抗病毒能力，说明烟草体内产生：。(4) 烟草 DNA分子被“嫁接”上或“切割”掉某个基因， 实际并不影响遗传信息的表达功能。这说明 。(5) 有人认为，转基因新产品也是一把双刃剑， 有如船能载舟也能覆舟， 甚至可能带来灾难性的后果， 你是否支持这一观点？如果支持， 请你举出一个可能出现的灾难性后果的实例：。26 疗，其方法是首先将患者的白细胞取出作体外培养，然后用逆转录病毒将正常腺苷脱氨酶基因转入人工培养的白细胞中， 再将这些转基因白细胞回输到

42、患者的体内，经过多次治疗，患者的免疫功能趋于正常。（ 1）在基因治疗过程中，逆转录病毒的作用相当于基因工程中基因操作工具中的 ，此基因工程中的目的基因是 ，目的基因的受体细胞是 。（ 2）将转基因白细胞多次回输到患者体内后， 兔疫能力趋于正常是由于产生了 ，产生这种物质的两个基本步骤是 、 。27、在植物基因工程中，用土壤农杆菌中的 Ti 质粒作为运载体，把目的基因重组入 Ti 质粒上的 T-DNA片段中，再将重组的 T-DNA插入植物细胞的染色体 DNA 中。（ 1）科学家在进行上述基因操作时，要用同一种分别切割质粒和目的基因，质粒的黏性末端与目的基因DNA 片段的黏性末端就可通过而黏合。（

43、 2）将携带抗除草剂基因的重组 Ti 质粒导入二倍体油菜细胞， 经培养、筛选获得一株有抗除草剂特性的转基因植株。 经分析，该植株含有一个携带目的基因的T-DNA片段，因此可以把它看作是杂合子。理论上，在该转基因植株自交F1 代中 ， 仍 具 有 抗 除 草 剂 特 性 的 植 株 占 总 数 的， 原因。（ 3）种植上述转基因油菜，它所携带的目的基因可以通过花粉传递给近缘物种，造成“基因污染”。如果把目的基因导入叶绿体 DNA中，就可以避免“基因污染”，原因是 :。28下图是利用基因工程技术生产人胰岛素的操作过程示意图， 请据图作答。 （1）能否利用人的皮肤细胞来完成过程？ ，为什么？。13精

44、品 料推荐（ 2）过程必需的酶是 酶，过程必需的酶是 酶。（ 3）与人体细胞中胰岛素基因相比，通过过程获得的目的基因不含有非编码区和 。（ 4）若 A 中共有 a 个碱基对，其中鸟嘌呤有 b 个，则过程连续进行 4 次，至少需要提供胸腺嘧啶 个。（ 5）在利用 AB获得 C 的过程中，必须用切割 A 和 B，使它们产生 ，再加入，才可形成 C。（ 6）为使过程更易进行，可用（药剂）处理 D。29近些年来，棉铃虫在我国大面积爆发成灾， 造成巨大的经济损失； 随之而来，化学农药的产量和种类也在逐年增加， 但害虫的抗药性也在不断增强。 针对这种情况，我国科学家采用基因工程技术， 开展了“转基因抗虫棉

45、”的研究， 成功地将细菌的毒蛋白基因导入到棉花细胞中， 从而使棉花植株的细胞内能合成这种毒蛋白。以后棉铃虫再啃食这种棉花时，就会摄入毒蛋白，虽吃得很饱，但不能消化，最后只能慢慢饿死。 这就是转基因抗虫棉不易受到害虫侵害的原因。 据以上材料，分析回答下列问题：细菌的基因之所以能嫁接到棉花体内，原因是。科学家预言， 此种“转基因抗虫棉”独立种植若干代以后，将出现不抗虫的植株，此现象来源于。在此过程中所用的质粒载体通常来自于下列哪种微生物（）A. 土壤农杆菌 B. 大肠杆菌 C. 枯草杆菌 D. 放线菌 某棉农在食用该抗虫棉种子压榨的棉籽油炒的芹菜后，出现鼻塞流涕，皮肤骚痒难忍症状，一段时间后这些症

46、状又自然消失，该现象可能是_ 利用基因工程技术培育抗虫棉，相比传统的杂交育种方法，其优点主要表现为_30. 科学家将人的生长素基因与大肠杆菌的 DNA分子进行重组，并成功地在大肠杆菌中得以表达。过程如右图据图回答：(1) 人的基因之所以能与大肠杆菌的 DNA分子进行重组，原因是。(2) 过程表示的是采取的方法来获取目的基因。 (3) 检测大肠杆菌 B 是否导入了质粒或重组质粒， 可采用的方法是 ，理由是：。(4) 如果把已经导入了普通质粒 A 或重组质粒的大肠杆菌，放在含有四环素的培养基上培养，发生的现象是 ，原因是：31. 根据实验原理和材料用具，设计实验选择运载体质粒，明确质粒的抗菌素基因

47、所抗的抗菌素类别。实验原理： 作为运载体的质粒， 须有标记基因， 这一标记基因是抗菌素抗性基14精品 料推荐因。故凡有抗菌素抗性的细菌，其质粒才可用作运载体。材料用具：青霉素、四环素的 10 万单位溶液、菌种试管、灭菌的含细菌培养基的培养皿、酒精灯、接种环、一次性注射器、蒸馏水、恒温箱。方法步骤：第一步：取三个含细菌培养基的培养皿并标为 1、2、3 号，在酒精灯旁，用三支注射器，分别注入 1mL蒸馏水、青霉素液、四环素液，并使之分布在整个培养基表面。第二步：将接种环在酒精灯上灼烧， 并在酒精灯火旁取菌种， 对三个培养皿分别接种。第三步：将接种后的三个培养皿放入37恒温箱培养 24h。预期结果：_32、限制性内切酶的识别序列和切点是 GGATCC，限制性内切酶的识别序列和切点是 GATC。在质粒上有酶的一个切点， 在目的基因的两侧各有一个酶的切点。（ 1）请画出质粒被限制酶切割后所形成的黏性末端。（ 2）请画出目的基因两侧被限制酶切割后所形成的黏性末端。（ 3）在 DNA连接酶作用下，上述两种不同限制酶切割后形成