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文档简介
1、1,实验二,白细胞计数及白细胞分类,2,实验要求,1.掌握白细胞计数及分类计数的操作方法, 正常参考值及临床意义。 2.学会血涂片的制备方法。,3,一、白细胞计数,4,原理,将全血用稀酸溶液稀释一定倍数并破坏红细胞后充入血细胞计数池内,显微镜下计数一定体积内的白细胞数,经换算求出每升血液内的白细胞数。,5,6,器材,一次性消毒采血针 一次性微量吸管 试管、2ml吸管 75乙醇棉球、无菌干棉球,7,试剂,白细胞稀释液:2冰醋酸加亚甲蓝,8,操作步骤,加稀释液取白细胞稀释液0.38ml于小试管中。 采血用微量吸管吸取20l加入白细胞稀释液中,用其上清清洗管腔内残余液体23次。 溶血混匀后室温静置,
2、待液体变为棕褐色,即红细胞被完全破坏。 充池混匀后冲入计数池,室温平放23min,待细胞下沉后显微镜计数。 计数低倍镜下计数四角4个大方格内白细胞总数。,9,10,11,12,计算,13,结果计算,每升血液中的白细胞数=4个大格内的白细胞数(N)/41020106/L =N50106 式中:4个大格内的白细胞总数4 算出每个大方格(即0.1ul)内白细胞平均数。 10换算为1ul。 20为血液稀释倍数。 106 将1ul换算为1L。 或(N)/20109/L,14,注意事项,1每个大方格内计得的白细胞数相差超过10个,表示悬液未摇匀结果不可靠。 2其他注意事项和计数不准确的常见原因与红细胞计数
3、相似。,15,参考值,成人4 -10109/L 新生儿15-20109/L,16,二、白细胞分类,17,(一)试剂和用具,瑞氏(vright)染液 pH6.4的磷酸缓冲液。 干净无油的载玻片 边缘光滑干净的推玻片 显微镜、香柏油、擦镜纸。,18,血 涂 片制 作:,推片,载玻片,血液,将推片匀速向前,勿停顿。涂片的厚薄取决于速度和角度:快、大(厚)。慢、小(薄),一张满意的血涂片应厚薄均匀 头 体 尾鲜明,涂片干燥后用铅笔在血涂片的头 部写上姓名和编号,李四,B 1 2 3,19,血 涂 片 染色:,勿冲洗再加瑞氏染色液5-8滴后将液和液充分混允静置10分钟,直接流水冲洗3-5分钟 (切勿先到
4、掉染液),涂片经水洗干燥后用油镜 分类计数100个白细胞,李四123,涂片干燥后加瑞氏染色液5-8滴覆盖整个血膜1分钟,20,血涂片的观察:,经染色后的血涂片先用低倍镜观察: 1.染色情况(满意、偏酸、偏碱) 2.观察细胞分布情况,选择细胞分布均匀之处转浸油镜进行白细胞分类计数。 油镜分类时应按一定走向,不要重复计数。,李四123,21,(二)方法,1常规消毒皮肤、采血。 2在载玻片的右端沾取一滴血,沾取时勿使玻片触及皮肤,把推玻片的一端放在血滴右侧,将推片略向左移触及血滴,血液即均匀附着于二片之间。 3使推片与载玻片中间形成30度夹角,平衡地向前推进,制成血涂片后,放在空气中待其自干,切勿加
5、热干燥。 4置血片于水平支架上,加瑞氏染液,直至血片被盖满为止,计算染液滴数。,22,(二)方法,5一分钟后,滴加等量缓冲液,同时轻轻振动血涂片,或用口吹气,使之与染液混匀。 6再染5-10分钟后,用水缓慢将染液冲去,冲洗前切勿将染液倾倒。 7空气中自然干燥(或用吸水纸吸干)后镜检,先用低倍镜观察血涂片染色是否良好厚薄是否适宜,选择涂片的中部及细胞分布均匀处,用油镜按一定顺序计数。,23,24,(三)注意事项,1血涂片的厚薄与下列因素有关: 血滴大则厚,小则薄; 推片与载玻片之间的角度大则厚,小则薄; 推抹涂片之速度快则厚、慢则薄。,25,(三)注意事项,2推片时用力要平衡,否则血膜出现厚薄不
6、匀现象。 良好的血片应分布均匀,位于玻片之中央,玻片两侧及上下边缘留空隙, 血片一端较薄,适于细胞形态观察; 另一端较厚,适用于寄生虫的寻找和白细胞减少时的分类计数。,26,(三)注意事项,3染色时应防止染色液干而出现沉淀物,冲洗时不能先倾倒染液应缓缓加水,使沉渣浮起溢去。 染色时间的长短与温度有关,天热时间短些,天冷时间长些,也可在显微镜下染色,白细胞的细胞核和细胞浆内之颗粒清楚显现时,即可冲洗。 稀释液过酸时,红细胞和嗜酸性颗粒染成鲜红色,白细胞核往往不易着色,或色甚浅; 稀释液过碱时,白细胞核色泽甚深,嗜酸性颗粒呈暗红色,红细胞呈紫红色。,27,(三)注意事项,4分类计数时 如见到异常或未成熟白细胞,也应按不同种类分别计数,求出其百分数, 应注意中性分叶核粒细胞内有无中毒颗粒和空泡。 如见到空泡、有核红细胞,也要同时记下,但不列入白细胞分类计数的百分率内。,28,29,30,中性杆状核粒细胞,31,中性分叶核粒细胞,32,中性分叶核粒细胞,33,单核细胞,34,单核细胞,35,小淋巴细胞,36,大淋巴细胞,37,大淋巴细胞,38,嗜碱性粒细胞,39,嗜碱性粒细胞,
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