植物基因转化常用方法(植物遗传,农杆菌、病毒介导和基因枪转化法)_第1页
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文档简介

1、.一. 植物遗传转化的方法植物遗传转化技术可分为两大类：一类是直接基因转移技术，包括基因枪法、原生质体法、脂质体法、花粉管通道法、电激转化法、 PEG 介导转化方法等，其中基因枪转化法是代表。 另一类是生物介导的转化方法， 主要有农杆菌介导和病毒介导两种转化方法，其中农杆菌介导的转化方法操作简便、成本低、转化率高，广泛应用于双子叶植物的遗传转化。二.农杆菌介导的基因转化方法（一）农杆菌的Ti 质粒与 T-DNA 的整合机制几乎所有双子叶植物都容易受到土壤农杆菌感染，而产生根瘤。它是一种革兰氏阴性土壤杆菌（ A. tumefaciens ）。其致瘤特性是由 Ti （ tumor inducing

2、 ）质粒介导的。农杆根瘤菌之所以会感染植物根部是因为植物根部损伤部位分泌出酚类物质乙酰丁香酮和羟基乙酰丁香酮，这些酚类物质可以诱导Vir（ Virulence region) 基因的启动表达，Vir 基因的产物将Ti 质粒上的一段TDNA 单链切下，而位于根瘤染色体上的操纵子基因产物则与单链T DNA 结合，形成复合物，转化植物根部细胞。T DNA 上有三套基因，其中两套基因分别控制合成植物生长素与分裂素，促使植物创伤组织无限制地生长与分裂，形成冠瘿瘤。 第三套基因合成冠瘿碱， 冠瘿碱有四种类型： 章鱼碱（ octopine ）、胭脂碱（ nopaline ）、农杆碱（ agropine ）、

3、琥珀碱（ succinamopine ），使农杆菌生长必需的物质。1. Ti 质粒的结构在发现根瘤农杆菌诱发冠瘿瘤的本质是Ti 质粒后， Ti 质粒便成为冠瘿瘤形成基因鉴定与分析的主要研究对象。Ti 质粒大约在160 240kB 之间。其中 T-DNA 大约在 15kb-30kb 。Vir 基因区在 36kb左右。除此之外， Ti 质粒上还存在Con 区（region encoding conjugation)和 Ori 区（ originof replication) 。.T-DNA 上共有三套基因和左右两个边界，LB 和 RB 是长为 25bp 的末端反复重复顺序，在切除及整合过程具有重要意义。tms 由两个基因组成：tms1 （ iaaM）和 tms2 （ iaaH）.tmr 由一个基因组成iptz ：tmt 由若干基因构成，合成稀有氨基酸 衍生物，称为opines 。它有三个成员：octopine 精氨酸与丙酮酸的缩合物Napaline 精氨酸与酮戊二酸的缩合物Agropine 谷氨酸与二环糖的缩合物据此可将 Ti 质粒分为三大类，感染的植物诱导合成这些有

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