分光光度法.ppt

1、生化实验技术,分光光度法是根据物质对不同波长的单色光的吸收程度不同而对物质进行定性和定量的分析方法。,（一）原理,一、分光光度法,光吸收基本定律 朗伯比尔定律,It,透光率(T%) = It /I0,吸光度(A) = lgT = Kbc,b,c,其中 T: 透射率 e: 摩尔消光系数，Lmol-cm-； l: 光程长，cm； C: 浓度，molL-,光吸收基本定律 朗伯比尔定律,（二）分光光度计及其基本部件,1)光源,钨灯或碘钨灯 340 - 2500nm 可见光区,氢灯或氘灯 160 - 375nm 紫外光区,光源,单色器,吸收池,检测器,显示,（2）单色器：包括狭缝、准直镜、色散元件,玻璃

2、能吸收UV光，仅适用于可见光区 石英不能吸收紫外光，适用于紫外和可见光区 要求：匹配性（对光的吸收和反射应一致）,（3）吸收池（又称比色皿）,（4）检测系统将光信号转变为电信号的装置,（5）数据显示系统,吸收池使用注意事项： 要彻底清洗，尤其是盛过蛋白质等溶液，干后形成一层膜，不易洗去，通常杯子不用时可放在 1洗洁净液中浸泡，去污效果好，使用时用水冲洗干净，要求杯壁不挂水珠，还可以用绸布丝线或软塑料制作一个小刷子清洗杯子。 严禁用手指触摸透光面，因指纹不易洗净。严禁用硬纸和布擦拭透光面，只能使用镜头纸和绸布。 严禁加热烘烤。急用干的杯子时，可用酒精荡洗后用冷风吹干。决不可用超声波清洗器清洗。,

3、二、离心分离技术,离心分离,离心是借助于离心机旋转所产生的离心力，使不同大小和不同密度的物质分开的技术。 根据分离物质以及杂质的大小、密度和特性，选择适当的离心机、离心方法和离心条件。,1、离心的基本原理,当物体围绕一中心轴做圆周运动时，运动物体就受到离心力的作用。旋转的速度越高，运动物体所受到的离心力越大。如果装有悬浮液或高分子溶液的容器进行高速水平旋转，在相同转速条件下，容器中不同大小的悬浮颗粒或高分子溶质会以不同的速率沉降。,离心机结构与原理示意图,离心操作的注意事项,高速与超速离心机是生化实验教学和生化科研的重要精密设备，因其转速高，产生的离心力大，使用不当或缺乏定期的检修和保养，都可

4、能发生严重事故，因此使用离心机时都必须严格遵守操作规程。 超速冷冻离心机:未经过培训和考核者不能使用。 其它普通离心机：按照操作要求进行。,1.使用各种离心机时，必须事先在天平上精密地平衡离心管和其内容物，平衡时重量之差不得超过各个离心机说明书上所规定的范围，每个离心机不同的转头有各自的允许差值，转头中绝对不能装载单数的管子，当转头只是部分装载时，管子必须互相对称地放在转头中，以便使负载均匀地分布在转头的周围。 2.离心前必须仔细检查转头各孔内有无异物。 3.若要在低于室温的温度下离心时。转头在使用前应放置在冰箱或置于离心机的转头室内预冷。,4.装载溶液时，要根据各种离心机的具体操作说明进行，根据待离心液体的性质及体积选用适合的离心管，有的离心管无盖，液体不得装得过多，以防离心时甩出，造成转头不平衡、生锈或被腐蚀，而制备性超速离心机的离心管，则常常要求必须将液体装满，以免离心时塑料离心管的上部凹陷变形。每次使用后，必须仔细检查转头，及时清洗、擦干，转头是离心机中须重点保护的部件，搬动时要小心，不能碰撞，避免造成伤痕，转头长时间不用时，要涂上一层上光腊保护，严禁使用显著变形、损伤或老化的离心管。,5.离心过程中不得随意离开，应随时观察离心机上的仪表是否正常工作，如有异常的声音应立即停机检查，及时排除故障。 6.每个转头各有其最高允许转速和使用累积限时，使用转头时要查阅说明书