香菇多糖的制备--许祥博.ppt

1、香菇多糖的制备,制作人：许祥博 生物技术1111,一、含义,又称香蕈、椎耳、香信、冬菰、厚菇、花菇，英文名：Lentinan。香菇是我国传统的著名食用菌，在世界上最早人工驯化栽培。香菇营养丰富，味道鲜美，被视为“菇中之王”。其中含 香菇多糖 有十多种氨基酸，其中有异亮氨酸、赖氨酸、苯丙氨酸、蛋氨酸、苏氨酸、缬氨酸等7种人体必需的氨基酸，还含有维生素B1、B2、PP及矿物盐。,二、成分功能,香菇多糖是从优质香菇子实体中提取的有效活性成分，香菇多糖中的活性成分是具有分支的 (13)D葡聚糖，主链由(13)连接的葡萄糖基组成，沿主链随机分布着由(16)连接的葡萄糖基，呈梳状结构。研究表明香菇的活性多

2、糖成分(13)D 葡聚糖对抑制异源的、同源的、甚至是遗传性的肿瘤都有效。,分子式：(c6h10o5)n ，分子量：4080万。香菇的主要成分是多糖类和不饱和脂肪酸，还含有大量的可转变为维生素D的麦角甾醇和菌甾醇，经热水提取的香菇多糖可调节人休内有免疫功能的T细胞活性，可降低甲基胆蒽诱发肿瘤的能力。香菇对癌细胞有强烈的抑制作用，对小白鼠肉瘤180的抑制率为97.5%，对艾氏癌的抑制率为80%。香菇还含有双链核糖核酸，能诱导产生干扰素，具有抗病 毒能力。,功能主治：不能手术或复发性胃癌、肝癌、膀胱癌，使用本品能缓解症状，提高病人免疫功能，纠正微量元素失调。 香菇含有水溶性鲜味物质，可用作食品调味品

3、，其主要成分是5-乌苷酸等核酸成分。香味成分主要是香菇酸分解生成的香菇精（lentionione）。所以香菇是人们重要的食用、药用菌和调味品。,三、服用注意事项,1、目前尚未有用于早产儿、新生儿和婴幼儿的临床经验，要慎重使用。 2、虽然临床试验仅有很少数病人发生头晕、胸闷、面部潮红等一过性反应，临床仍应注意过敏反应的可能性。 婴幼儿 3、加入溶剂后，要用力振摇，使完全溶解，即刻使用。 4、应根据医生处方和遵照医嘱。 5、本品和维生素C混合，会使溶液变浑浊，应避免混用。,四、实验原理,在组织中，多糖多与蛋白质以共价相结 合，所以在生化产品制备工艺中，往往第 一步多用酶降解蛋白质部分或用碱使多 糖

4、蛋白质间的键裂开，以促进多糖在提 取时的溶解。碱性提取可避免多糖中硫酸 基团水解而破坏。现多采用碱性提取的同 时用蛋白质水解酶处理组织。提取液中存 在的蛋白质可用普通蛋白质沉淀剂使之沉 淀，也可用其他方法使变性沉淀，如适当 调pH和加热等。,五、实验目的,掌握水溶醇沉法分离多糖类 化合物的原理和方法,六、实验步骤,1、材料：香菇 2、试剂：试剂：活性炭、氯仿、 无水乙醇、丙酮、乙醚、苯酚、 浓硫酸、甘露糖、Sephadex G100凝胶 3、设备和仪器：水浴锅、抽滤装 置、离心机、分光光度计,七、操作步骤,（1）多糖的提取 取香菇10g，于组织捣碎机内粉 碎，加20倍量的水，90水浴加热 30

5、min,抽滤，得滤液，加活性炭 （1mg/ml），搅拌吸附1h，抽滤， 得滤液，用氯仿萃取（3次）以除 尽蛋白质，萃余液中加无水乙醇， 使其乙醇最终浓度为80%，沉淀12h 后，于离心机中离心4000r/min 30min，沉淀物分别用无水乙醇， 丙酮，乙醚洗涤3次，即得香菇多 糖提取物。,2）多糖提取 Sephadex G-100凝胶充分溶 胀后装柱，用蒸馏水平衡48h。 取香菇多糖提取物溶于蒸馏水 中，离心去除不溶物，上清液 上柱分离，用蒸馏水洗脱，洗 脱速度5ml/20min，200nm波 长紫外检测，收集主要峰分， 冷冻干燥得白色香菇多糖，称 重。,3）香菇多糖分析检测 定性分析-苯酚

6、-硫 酸法 苯酚-硫酸试剂：苯酚3g， 浓硫酸5ml，溶于95ml无水乙 醇中，喷后，110 加入几分 钟，糖显棕色 定量分析-分光光度 法 A制备标准曲线 精密称取60 干燥至恒重的甘 露糖标准品0.1g，置于100ml容量 瓶中，加蒸馏水溶解并稀释至刻度， 用移液管量取对照品溶液0、0.5、 1.0、2.0、2.5、3.0ml分别置50ml 容量瓶中，加蒸馏水至刻度，在各 精密吸取1ml置于比色管中，准确 移取8%苯酚溶液1ml，快速加入浓 硫酸5ml，置水浴中加热15min，取 出冷却至室温，橘黄色溶液从小到 大逐渐加深，将溶液于490nm波长 的可见分光光度计处测定吸光值， 绘制标准曲线 。