PD2 PA2测定 乙酰胆碱和维库溴铵对Nm-R的亲和力测定.ppt_第1页
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文档简介

1、乙酰胆碱和维库溴铵对Nm-R亲和力测定（ pA2、 pD2的测定）,【实验目的】 1学习蟾蜍腹直肌标本的制备方法和受体激动剂量-效曲线的测定方法。 2掌握药物的 pD2及pA2的定义。 3.掌握乙酰胆碱和竞争性肌松药（维库溴铵）对骨骼肌Nm-R的pD2和pA2值的测定和计算方法及其意义,【实验原理】 1. pD2为激动剂激动受体产生50%最大效应所需的摩尔浓度的负对数值 2. pA2为 竞争性拮抗剂摩尔浓度的负对数值，在此浓度下，激动剂要产生原有效应其浓度必须增大1倍。,乙酰胆碱能激动腹直肌上的Nm受体，使腹直肌收缩；维库溴铵是竞争性Nm受体拮抗剂，与乙酰胆碱竞争Nm受体，阻遏乙酰胆碱对腹直肌

2、的收缩作用。 本实验预先加入一定量的Nm受体竞争性拮抗剂维库溴铵，乙酰胆碱要达到原有效应必须增加剂量。由此出现维库溴铵 使 乙酰胆碱 的量效曲线平行右移，根据曲线右移情况，可求得乙酰胆碱对Nm受体的pA2值。,【动物】 蛙或蟾蜍 【方法】 1. 制备长约1.5 cm宽约3-4mm的上腹直肌。 2. 标本安装、固定同前腹直肌实验，水浴管营养液体积10ml，充入空气（1-3个/秒）。打开BL-410系统，选择药理实验模块，肌张力测定（或pA2和pD2测定），给予大约2g前负荷，平衡10min。,3. 描记正常张力曲线后，依次给药，观察张力的变化 以累加量效曲线法获得Ach激动Nm受体的量效曲线。加

3、入顺序和量如下：Ach10-5mol/L 0.1ml， Ach10-5mol/L 0.2ml ， Ach10-4mol/L 0.07ml， Ach10-4mol/L 0.2 ml， Ach 10-3mol/L 0.07ml， Ach 10-3mol/L 0.2ml， ， Ach终浓度分别是10-7, 310-7, 10-6，310-6，10-5, 310-5，10-4, 310-4 mol/L。,用任氏液冲洗3次，待基线基本恢复正常后，加入0.267%维库溴铵溶液（10-7mol/L）0.1ml，5-10min后重复(1)步骤，记录维库溴铵对Ach量效曲线的影响。 4. 以Ach效应为纵坐标，浓度对数为横坐标作图，初步估计Ach对Nm-R的pD2值。,5. 直线回归法求Ach pD2值： E/D = Emax/KD E/KD E为对应Ach浓度D产生的效应。令E/D为Y, E为X，上式为直线方程。其中截距（a）为Emax/KD，斜率（b）为-1/KD。以BL-420分析系统或3600P计算器求出pD2，a、b和r值。,6. 计算维库溴铵的pA2值： 按下述公式计算维库溴铵对Nm-R的pA2值。 维库溴铵的pA2值 = 维库溴铵摩尔浓度负对数值 + Log(无维库溴铵时AchpD2/有维库溴铵时AchpD2)

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