江苏省高中生物4.1生物成分的分离与测定技术名师制作优质教学案2(无答案)苏教版选修1

1、名校名 推荐第四章生物化学与分子生物学课题课型新授技术实践（二） DNA的粗提取与鉴定1.尝试对植物或动物组织中的DNA进行粗提取教学目标2.了解 DNA的物理化学性质3. 理 解 DNA粗提取以及DNA鉴定的原理教学重难点DNA的粗提取和鉴定方法自主学习一基础知识1提取 DNA的方法提取生物大分子的基本思路是。对于 DNA的粗提取而言，就是要利用 DNA与、和等在物理和化学性质方面的差异，提取DNA，去除其他成分。1）DNA的溶解性DNA和蛋白质等其他成分在不同浓度的中溶解度不同，利用这一特点，选择适当的盐浓度就能使充分溶解，而使杂质沉淀，或者相反，以达到分离目的。课本图 51 是 DNA在

2、 NaCl 溶液中的溶解度曲线，请根据曲线图，【思考】在什么浓度下，DNA的溶解度最小？DNA在 NaCl 溶液中的溶解度是如何变化的？如何通过控制NaCl 溶液的浓度使DNA在盐溶液中溶解或析出？此外， DNA不溶于溶液，但是细胞中的某些蛋白质则溶于酒精。利用这一原理，可以将DNA与蛋白质进一步的分离。2） DNA对酶、高温和洗涤剂的耐受性蛋白酶能水解，但是对没有影响。大多数蛋白质不能忍受6080oC的高温，而DNA在以上才会变性。洗涤剂能够瓦解，但对 DNA没有影响。3） DNA的鉴定在条件下， DNA遇会被染成色，因此二苯胺可以作为鉴定 DNA 的试剂。2实验设计1）实验材料的选取凡是含

3、有的生物材料都可以考虑，但是选用的生物组织，成功的可能性更大。在下面的生物材料中选取适合的实验材料：鱼卵、猪肝、菜花（花椰菜） 、香蕉、鸡血、哺乳动物的红细胞、猕猴桃、洋葱、豌豆、菠菜、在液体培养基的大肠杆菌【思考】哺乳动物的红细胞的特点？2）破碎细胞，获取含DNA的滤液动物细胞的破碎比较容易，以鸡血细胞为例，在鸡血细胞液中加入一定量的，同时用搅拌，过滤后收集滤液即可。如果实验材料是植物细胞，需要先用溶解细胞膜。例如，提取洋葱的DNA时，在切碎的洋葱中加入一定的和，进行充分的搅拌和研磨，过滤后收集研磨液。【思考】为什么加入蒸馏水能使鸡血细胞破裂？加入洗涤剂和食盐的作用分别是什么？如果研磨不充分

4、，会对实验结果产生怎样的影响?1名校名 推荐此步骤获得的滤液中可能含有哪些细胞成分？3）去除滤液中的杂质阅读课本的三个方案，【思考】为什么反复地溶解与析出DNA，能够去除杂质？方案二与方案三的原理有什么不同？4）DNA的析出与鉴定将处理后的溶液过滤，加入与滤液体积、冷却的，静置，溶液中会出现，这就是粗提取的DNA。用玻璃棒搅拌，卷起丝状物，并用滤纸吸取上面的水分。取两支 20ml 的试管，各加入物质的量浓度为的 NaCl 溶液 5ml ，将丝状物放入其中一支试管中，用玻璃棒搅拌，使丝状物溶解。然后，向两支试管中各加入4ml 的。混合均匀后，将试管置于中加热 5min，待试管冷却后，比较两支试管

5、溶液颜色的变化，看看溶解有DNA的溶液是否变。3操作提示以血液为实验材料时，每100ml 血液中需要加入3g，防止。加入洗涤剂后，动作要、，否则容易产生大量的泡沫，不利于后续步骤地操作。加入酒精和用玻璃棒搅拌时，动作要，以免，导致 DNA分子不能形成絮状沉淀。二苯胺试剂要，否则会影响鉴定的效果。4结果分析与评价 疑难点拨 1 DNA的溶解度与NaCl 溶液浓度的关系：当 NaCl 溶液浓度低于0.14mol/L时，随浓度的升高，DNA的溶解度降低；当NaCl 溶液浓度高于0.14mol/L时，随浓度升高，DNA的溶解度升高。2 制备鸡血细胞液时，要在新鲜的鸡血中加入柠檬酸钠的原因制备鸡血细胞液

6、时，要在新鲜的鸡血中加入抗凝剂柠檬酸钠，防止血液凝固。其原理是柠檬酸钠能与血浆中Ca2+发生反应，生成柠檬酸钙络合物，血浆中游离的Ca2+ 大大减少，血液便不会凝固，因为鸡血红细胞，白细胞都有细胞核，DNA主要存在于细胞核中，所以在离心或静置沉淀后，要弃出上层清液血浆。3提取 DNA的第一步是材料的选取，其目的是一定要选取DNA含量较高的生物材料，否则会由于实验过程中或多或少的损失而造成检测的困难；第二步是DNA的释放和溶解，这一步是实验成功与否的关键，要尽可能使细胞内的 DNA全部溶解；第三步是 DNA的纯化，即根据 DNA的溶解特性、对酶及高温的耐受性的不同等特性，最大限度地将 DNA与杂

7、质分开；最后一步是对 DNA进行鉴定，这是对整个实验的结果的检测。4在 DNA的析出的步骤中用到玻璃棒搅拌时，注意动作要轻缓，以免加剧DNA分子的断裂，导致DNA分子不能形成絮状沉淀。5盛放鸡血细胞液的容器，最好是塑料容器。鸡血细胞破碎以后释放出的DNA，容易被玻璃容器吸附，由于细胞内 DNA的含量本来就比较少，再被玻璃容器吸附去一部分，提取到的DNA就会更少。因此，实验过程中最好使用塑料的烧杯和试管，这样可以减少提取过程的 DNA的损失。 典例解析 本实验中有三次过滤：过滤用蒸馏水稀释过的鸡血细胞液过滤含粘稠物的0.14mol/LNaCl溶液2名校名 推荐过滤溶解有 DNA的 2mol/LN

8、aCl溶液以上三次过滤分别为了获得（）A 含核物质的滤液、纱布上的粘稠物、含DNA的滤液B 含核物质的滤液、滤液中DNA粘稠物、含 DNA的滤液C 含核物质的滤液、滤液中DNA粘稠物、纱布上的DNAD 含较纯的 DNA滤液、纱布上的粘稠物、含DNA的滤液答案： A解析 : 用蒸馏水稀释鸡血细胞液，使血细胞的细胞膜、核膜破裂，释放出核物质，此时过滤只能得到含DNA 和其他物质如蛋白质的滤液，这种滤液必须经过实验中其他步骤得相继处理，方能得到较纯的DNA。 DNA 在0.13mol/LNaCl溶液中溶解度最低，成丝状粘稠物，可经过滤留在纱布上。随堂练习1. 在研究 DNA的基因样本前， 采集来的血

9、样需要蛋白水解酶处理，然后用有机溶剂除去蛋白质。用蛋白水解酶处理血样的目的是（）A. 除去血浆中的蛋白质B.除去染色体上的蛋白质C.除去血细胞表面的蛋白质D. 除去血细胞中的所有的蛋白质，使DNA释放，便于进一步提纯2与析出 DNA粘稠物有关的叙述，不正确的是（）A. 操作时缓缓滴加蒸馏水，降低DNA的溶解度B. 在操作 A 时，用玻璃棒轻缓搅拌，以保证DNA分子完整C. 加蒸馏水可同时降低DNA和蛋白质的溶解度，两者均可析出D. 当丝状粘稠物不再增加时，此时NaCl 的浓度相当于 0.14mol/L3洗涤剂能够瓦解（），但对 DNA没有影响。A. 细胞壁 B.细胞膜C.细胞核D.细胞质4在沸

10、水浴的条件下，DNA遇（）会被染成蓝色。A. 斐林试剂B.苏丹染液C.双缩脲试剂D.二苯胺5在 DNA提取过程中，最好使用塑料试管和烧杯，目的是（）A. 不易破碎B.减少提取过程中DNA的损失 C. 增加 DNA的含量 D. 容易洗刷6下列操作中，对DNA的提取量影响最小的是（）A. 使鸡血细胞在蒸馏水中充分破裂，放出DNA等核物质B. 搅拌时，要使用玻璃棒沿一个方向轻缓搅拌C. 在“析出 DNA粘稠物”时， 要缓缓加蒸馏水，直至溶液中粘稠物不再增加D. 在用酒精沉淀 DNA时，要使用冷酒精，甚至再将混合液放入冰箱中冷却E 在 DNA的溶解和再溶解时，要充分搅拌7DNA的粗提取中，将与滤液体积

11、相等的、冷却的（），静置 23min，溶液中会出现白色丝状物。A.0 9%的 NaClB.0.14mol/L的 NaCl 溶液 C. 质量分数 15%的 HCl D. 体积分数为 95%的酒精溶液8. 以血液为实验材料时，需要向血液中加入（），防止血液凝固。A. 醋酸钠B. 龙胆紫C.柠檬酸钠 D.醋酸洋红9. 在向溶解 DNA的 NaCl 溶液中，不断加入蒸馏水的目的是（）A. 加快溶解 DNA的速度B.加快溶解杂质的速度C. 减少 DNA的溶解度，加快 DNA析出D. 减小杂质的溶解度，加快杂质的析出10. 去除滤液中的杂质时，直接在滤液中加入嫩肉粉，利用嫩肉粉中的（）分解蛋白质。A. 胃蛋白酶B.胰蛋白酶C. 木瓜蛋白酶D.肠肽酶二、非选择题（3 个）1提取鸡血中 DNA时，要除去血液中的上清液，这是因为什么？3名校名 推荐2填写本实验完成下列实验操作时所用试剂。提取鸡血细胞中核物质溶解核内DNA：析出 2mol/LNaCl 溶液中的DNA DNA粘稠物的再溶解提取杂质较少的 DNA白色乳状 丝状物 DNA的鉴定3. 关于 DNA粗提取的实验材料的选择，也经过了多次实验效果的比较，最终选择鸡血做实验材料的原因是什么？请回答下列问题：鸡血细胞中红细胞，家鸡属于鸟类，新陈代谢旺盛，因而血液中细胞数目较多，可以提供丰富的。实验前由老师制备血细胞液供