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文档简介
1、实验七 稀释平板计数法及土壤中真菌的分离纯化,一、实验目的,掌握活菌计数的基本原理及方法 掌握从样品中分离目的微生物的原理及方法,二、实验原理-稀释平皿计数法,将微生物细胞充分稀释到单个分散,把这些单个分散的细胞均匀涂布在平皿培养基上,培养后长出的菌落肉眼可见,每个菌落都由原液中单个细胞发育而来,计算菌落数,通过公式可以求出单位原样品中的活菌数。 每ml(g)样品中的活菌数=(每皿菌落数平均值/取样体积)稀释倍数,二、实验原理-土壤中真菌的分离纯化,马丁孟加拉红-链霉素培养基 马丁培养基 孟加拉红 链霉素,三、实验器材,(一)培养基 1、牛肉膏蛋白胨培养基 2、马丁孟加拉红-链霉素培养基 (二
2、)其他 1、无菌培养皿 2、无菌吸管 3、无菌水 (三)仪器 1、超净工作台 2、玻璃刮铲 3、酒精棉球,四、实验步骤-稀释平板计数法,1、熔化培养基 2、倒平皿 3、梯度稀释法稀释原菌样品,四、实验步骤,4、涂平皿: 选取1/106,1/107,1/108三个稀释度计数,每皿取菌液0.1ml,用玻璃刮铲涂布均匀,每个稀释度做一个重复。 5、37倒置培养2天 6、计数:,每ml原菌样品中微生物的活细胞数(菌落形成数,CFU (同一稀释度平板上菌落平均数稀释倍数)/原菌样品体积(ml),菌落计数规则: (一)选择平均菌落数在30300间的平板 1、只有一个稀释度符合,以该稀释度的平均菌落数乘以稀
3、释倍数报告; 2、有两个稀释度符合,取决于二者比值(高稀释度的菌落数除以低稀释度的菌落数的值): 1)若0.5比值2,以两稀释度的菌落数乘稀释倍数所得的值的均值报告。 2)若2比值或比值 0.5,则取其中较少的菌落总数进行报告。 (二)所有菌落数均不在30300间 以最接近30或300的平均菌落数乘稀释倍数 1、若所有稀释度的菌落平均数均大于300,则按稀释倍数最高的平均菌落数乘以稀释倍数报告; 2、若所有稀释度的菌落平均数均小于30,则按稀释倍数最低的平均菌落数乘以稀释倍数报告;,四、实验步骤-从土壤里分离真菌,1、熔化培养基 2、倒平皿 3、捻碎土样,将土样溶解在90ml无菌水三角瓶中 4、梯度稀释法稀释土样,10g,90ml,10-1,10-2,10-3,10-4,10-5,4、涂平皿: 每个稀释度均需要涂布平皿,每皿取菌液0.1ml,用玻璃刮铲涂布均匀。 5、28倒置培养37天 6、观察并描述真菌菌落特征,五、实验结果及分析,稀释平皿计数法:,每ml原菌样品中微生物的活细胞数(菌落形成数,
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