槐米中芦丁的提取和精制(2010)实验报告_第1页
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文档简介

1、实验一、槐米中芦丁的提取、精制和鉴定(一)实验目的要求1. 制备芦丁,供药用。2. 通过芦丁的制备,掌握黄酮类化合物的提取分离的原理和操作。3. 熟悉重结晶技巧。4. 了解和掌握黄酮类化合物的一些主要性质和鉴定方法。(二)实验的基本原理1. 芦丁的提取原理利用芦丁结构中含有多个酚羟基,呈酚酸性,能在碱水中溶解的性质,可用碱性溶剂进行提取,提取液加酸后可沉淀析出(碱溶酸沉法)。也可利用芦丁在冷水中溶解度小,在热水中溶解度大的性质进行提取。2. 芦丁的分离原理利用芦丁结构在冷乙醇中溶解度小,在热乙醇中溶解度大,以及在热水中溶解度大,在冷水中溶解度小的性质分离。芦丁用溶剂加热溶解后,趁热抽滤,滤液放

2、冷后能析出而达到分离的目的(如不纯可再重复操作进行分离)。也可采用醇溶水沉法进行精制。3. 芦丁的鉴定原理(1)利用吸附薄层色谱的分离原理,芦丁与芦丁对照品在同一条件下进行展开,显色,以达到鉴定芦丁的目的。(2)通过专属的化学显色反应(如三氯化铝显色反应),确定芦丁的成分类型(黄酮类)。(三)实验内容1.用碱提法、水提法、醇提法提取槐米中芦丁。2.用酸沉法和冷却过饱和法分离芦丁。3.溶剂重结晶精制芦丁。4.薄层色谱法和显色反应鉴定芦丁(四) 实验药材仪器与试剂1. 实验药材 槐米20g。2. 仪器:磁力加热搅拌器、旋转蒸发仪、粉碎机、500ml烧杯,1000ml烧杯,50ml烧杯,250ml园

3、底烧瓶、500ml园底烧瓶、100ml量筒、50ml量筒、100ml锥形瓶、50ml锥形瓶、研钵、移液管、减压过滤装置,布氏漏斗,抽滤瓶、层析缸等。3. 试剂:硼砂、氧化钙、 HCI、三氯化铝、甲醇、乙醇、乙醚、丙酮、甲酸、滤纸、PH试纸等。(五)实验步骤1.提取(水提取法)称取槐米粗粉20g,在研钵中研碎后放入500ml烧瓶中,加水200ml,用磁力加热搅拌器加热煮沸30min,趁热过滤。残渣同法操作一次,合并两次滤液,放置冰箱中析晶,待全部析出后,减压抽滤,用少量蒸馏水洗涤芦丁结晶,抽干,得粗制芦丁,干燥,称重,计算得率。2.精制(醇-水重结晶法)取粗制芦丁1g,置于250ml园底烧瓶中,

4、加80%乙醇30ml加热回流15分钟,趁热抽滤。滤液置250ml烧杯中,向滤液中加蒸馏水(约34倍量)至溶液呈明显混浊,室温放置,抽滤得精致芦丁。用少量蒸馏水洗涤芦丁结晶,晾干,称重。(六) 过程与现象记录 Day 1 (2011-05-07)1.提取 称取研碎的粗槐米20.02g,组装仪器。 原料放入500mL烧瓶中加水200mL(1-2),磁力搅拌加热。烧瓶中为咖啡色悬浮液,有甘苦气味,沸腾前不断产生小气泡上,液体中有明显漩涡(1-3)。102沸腾,产生大量气泡,药渣翻滚,漩涡被气泡遮盖(1-4)。加热过程中时常停止沸腾,续略升温23。随着时间的延长,液体颜色加深。煮沸规程中应控制液量,过

5、少难以提出药品,过多容易喷出瓶口。最初用抽滤法分离残渣(1-5),但是溶液很稠且含糖分较多,难以流下(1-6),并且易阻塞和冲破滤纸,还渐渐冷却。后改用离心法,5000r,15min(1-7),效果略好,但是溶液还是冷却,溶解的提取物较少。滤液为深黄色色,粘稠,气味浓厚甘甜。再次将滤渣至于放入500mL烧瓶中加水200mL磁力搅拌加热30min,液体颜色略比第一次深。将两次得到的浸液(约300mL)收集放入冰箱备用。Day 2 (2011-05-08)2精制1.将粗提物抽滤(1-7)(1-8)(1-9),干燥得粗制芦丁(1-10)。2.取粗制芦丁1.008g,置于250ml园底烧瓶中,加80%

6、乙醇30ml,加热回流15分钟(1-11),加热前没有充分分散固体粗提物,趁热抽滤(1-12),得到黄色油状液体(1-13)。2.另旋转蒸发粗提物的滤液(1-14),没有产物。 Day 3(2011-05-14) 3.鉴定(1)点滴显色反应 从放置一周的粗提物中取芦丁的甲醇溶液(供试液)分别点在滤纸上,挥去溶剂,紫外照射,光吸收明显(1-15),然后分别添加供试液芦丁的甲醇溶液和显色剂2%三氯化铝乙醇溶液,显黄色(1-16),在紫外灯下365nm观察有明显亮斑(1-17)。(2)薄层色谱鉴定吸附剂:硅胶GF254薄层板(5.0cm X 10.0cm)。样 品:自制芦丁(用甲醇溶解,浓度约1mg

7、/ml)对照品:芦丁对照品的甲醇溶液。展开剂:三氯甲烷-甲醇-甲酸(730.5)显 色:a.先在可见光下观察,然后在紫外光下观察,有明显紫外吸收。(365nm紫外灯下观察)b.遮挡硅胶板左侧喷三氯化铝试剂(1-18), 365nm紫外灯下观察,右侧有显色剂呈黄色,左侧有明显紫外吸收(1-19)。4 .注意事项(1) 硼砂因能与芦丁中的邻二酚羟基结合,起保护邻二酚羟基,不被氧化破坏的作用。实验证明,提取时加入硼砂,产品的质量会好些。(2) 石灰乳既能达到碱溶解提取芦丁的目的,还可以除去槐米中大量的粘液质和酸性树脂(形成钙盐沉淀),但PH不能过高和长时间煮沸,因为会导致芦丁的水解而开环和形成钙鳌合

8、物,影响产品的质量和产率。(3) PH过低(酸性太强)会使芦丁形成洋盐而收率降低。(4) 称量芦丁时,先将带滤纸的漏斗称重,再将盛样品的带滤纸的漏斗称重,差重即为样品的重量。(七)结果计算及分析产率 小漏斗+滤纸重29.69g抽滤后小漏斗+滤纸+样品重30.20g样品净重0.51g产率=(0.51/1.008)100%=50.60%比移值 Rf=3/5.75=0.522分析:1、水提法不能充分溶解芦丁; 2、精制时粗提物聚集成固体颗粒,没有充分溶解; 3、抽滤、转移等过程的损失。(八)心得体会第一次做这样长时间的实验,渐渐喜欢上了实验室这样安静的气氛,在这里做实验,只需要关注操作和实验过程,思考、分析反应机理和得到某个结果的原因,不需要考虑实验之外的那些世

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