SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳步骤

1、.【跑电泳的步骤】1、取出电泳仪器和四个烧杯；2、将超纯水倒入烧杯中，保鲜膜封口；3、配制过硫酸铵溶液（ap）：0.1gap+0.9g超纯水，保鲜膜封口；4、取出所有药品。tris-hcl(88,6.8)，temed，sds，acry-bis，按次序排好；5、拿卷纸平铺，移液枪枪头：三个蓝，两个黄，一个白，移液枪3只；6、先配分离胶7、组装凝胶模具，插好板（1）海绵用自来水润湿，插在下面槽里；（2）板：bio-rad前后玻璃板，注意前后顺序，夹子夹好，塞枪头于夹子上。8、配胶见配方， 用2号蓝混匀所有试剂；9、加液至支架上方， 用超纯水液封（不能用气泡）；10、待界面清晰后，用滤纸将水吸干；1

2、1、配浓缩胶；12、插梳子：一个个斜着插，有字面朝向我；13、拔下梳子，转移（有字朝里，白色架子垫黄纸，将玻璃板卡在绿卡下面，不要有空隙，装去离子水，不能漏（1h），等待。），样品煮沸3分钟；14、用10ul移液枪移液，移液，每个依次加入梳槽内；15、电压（浓缩胶）90v，电流20mv；16、盖上盖子：红对红，黑对黑；插上电源插头：红对红，黑对黑。【附配方】分离胶 separating gel (5ml) ( 1个板3.5ml)1板2板精品.prescription12%10%7.5%3.5 ml7.0 mldel h2o1.6 ml1.9ml2.3 ml1.3 3ml2.66ml1.5m t

3、ris-hcl ph8.81.3 ml1.3 ml1.3 ml0.91 ml1.82 ml30%acry/bis单体胶（29.2g+0.8g/100ml）2 ml1.7 ml1.3 ml1.19ml1.38 ml10%sds50ul50ul50ul35ul70ul10%ap50ul50ul50ul35ul70ultemed2ul2ul(5 ul)2ul3.5ul7ul(夏)8ul浓缩胶stacking gel ( 2板3ml)prescriptionvolume(2 ml)(2 ml)del h2o1.4ml2.1ml0.5m tris-hcl ph6.8250ul375ul30%单体胶330

4、ul495ul10%sds20ul30ul10%ap20ul30ultemed2ul(5 ul)3ul(8 ul冬，5 ul夏)【附所需试剂配制】1、30%单体胶（30%单体胶即30%t，2.67%c） 配制50ml：丙烯酰胺acry：14.6g，甲叉双丙烯酰胺bis：0.4g； (100ml：acry 29.2g，bis 0.8g) 超纯水定容至50ml，0.45 um精品.膜过滤，4保存（一个月）；说明：单体浓度%t是指单体总质量（丙烯酰胺+双丙烯酰胺）在溶液中的百分比（m/v），可选择的范围为3%30%；%c是指双丙烯酰胺与单体总质量的比值（m/m），也指交联度。2、分离胶缓冲液ph8.

5、8配制100ml(1.5m tris-hcl ph8.8)：tris 18.15g，部分去离子水溶解，并用hcl调ph8.8，最后定容至100 ml，过0.45 um膜，4保存。3、浓缩胶缓冲液ph6.8配制50ml(0.5m tris-hcl ph6.8)：tris 3.0g，部分去离子水溶解，并用hcl调ph6.8，最后定容至50 ml， 4保存。4、10%sds：5g/50 ml h2o，配制后 4保存。5、10%ap（过硫酸铵）：用时现配，溶解状态十分不稳定，0.1g/1ml h2o。.6、电泳缓冲液：配1000 mltris 3.0g，甘氨酸14.4g，sds1.0g，去离子水定容至1000 ml。7、染色液： （1）原液：配制200 ml：考马斯亮蓝（r-250）：2.0g+200 ml去离子水； （2）染色液：配制500 ml：原液62.5ml，甲醇250ml，冰乙酸50ml，去离子水137.5ml。8、脱色液：1000 ml甲醇500 ml，冰乙酸100 ml，去离