微量移液器.ppt

1、微量移液器,主讲：岳爱芝 2013-11-7,微量移液器,一、定义 二、分类杂谈 三、原理 四、使用宝典 五、校准 六、维护与保养,一、定义,微量移液器 （micropipet） 是进行生化实验或分子生物学实验的必备工具。 微量移液器是一种在一定容量范围内可随意调节的精密取液装置（俗称枪）。,二、分类杂谈-国外品牌,1、在国内用的比较多的移液器品牌就是德国艾本德(EPPENDORF)，作为移液器的发明者，艾本德在移液器市场近几年无论是在全球还是国内，都稳居第一。 2、进口移液器中市场占有率比较高的就是美/法吉尔森（GILSON）和芬兰雷勃（Finnpipette），这两个品牌的移液器在国内还是

2、很受欢迎的，尤其是芬兰雷勃（Finnpipette）的彩枪和白枪由于在国内生产，所以价格较低，其性价比很高。 3、其他的进口，在网站上有很多人写出市场上比较出名的移液器品牌，比如芬兰百得（BIOHIT）、德国普兰德（BRAND）、日本立洋（NICHIRYO）、美国瑞宁（RAININ）、瑞士SOCOREX、瑞士哈美顿（Hamilton）、波兰HTL、美国Labnet和丹麦CAPP等，芬兰雷勃被美国热电收购，属于热电公司的一个子公司，而美国瑞宁也被梅特勒纳入旗下。,二、分类杂谈-国内品牌,国内比较知名的品牌还是北京大龙（Dragonmed），这个品牌的竞争力并不输于进口产品，在国内市场的占有率很高

3、，其他的品牌竞争力在国内市场上还是很低的，几乎没有什么市场，只有金花牌移液器还可以。,二、分类杂谈-价格,一般进口的移液器价格在1000元左右，不过几百元的进口移液器市场上还是有很多的。 手动移液器： Eppendorf和Gilson价格相当，约1200 1600，Thermo便宜些800 1200 ，BioHit最便宜400 1200，Dragonmed 200 400。 电子移液器： Eppendorf和Gilson相当，约8000 12000；Thermo5000 7000；Hotide4000 5000；BioHit 1800 2200 。,二、分类杂谈-实例,二、分类杂谈-代表,P1

4、0 0.5 10l P20 2 20 l P100 20 100 l P200 50 200l P1000 200 1,000 l P5000 1,000 5,000l,二、分类杂谈-移液器的四种规格,0.510l(读数窗显示0.510.0,每转1档为0.1l); 550l(读数窗显示5.050.0, 每转1档为0.5l); 20200l(读数窗显示20200, 每转1档1l); 2001000l(读数窗显示2001000, 每转1档为5l).,三、原理,依靠装置内活塞的上下移动，气活塞的移动距离是由调节轮控制螺杆结构实现的，推动按钮带动推动杆使活塞向下移动，排除活塞腔内的气体。 松手后，活塞

5、在复位弹簧的作用下恢复原位,活塞通过弹簧的伸缩运动来实现吸液和放液。在活塞推动下，排出部分空气，利用大气压吸入液体，再由活塞推动空气排出液体。,四、使用宝典-量液的操作步骤：,1. 将微量移液器装上吸头(不同规格的移液器用不同的吸头)； 2. 将微量移液器按钮轻轻压至第一停点； 3. 垂直握持微量移液器，使吸嘴浸入液样面下几毫米，千万不要将吸嘴直接插到液体底部； P10 1 mm P20, P100 2 3 mm P200, P1000 2 4 mm P5000 3 6 mm,四、使用宝典-量液的操作步骤：,4. 缓慢、平稳地松开控制按钮，吸上样液。否则液体进入吸嘴太快，导致液体倒吸入移液器内

6、部，或吸入体积减少; 5. 等一秒钟后将吸嘴提离液面； 6. 平稳地把按钮压到第一停点，再把按钮压至第二停点以排出剩余液体;,四、使用宝典-量液的操作步骤：,7. 提起微量移液器，使吸嘴在容器壁擦过; 8. 然后按吸嘴弹射器除去吸嘴。,四、使用宝典-量液操作注意问题：,1. 未装吸头的微量移液器绝对不可用来吸取任何液体。 2. 一定要在允许量程范围内设定容量，千万不要将读数的调节超出其适用的刻度范围，否则会造成损坏。 3. 不要横放带有残余液体吸嘴的移液器。 4. 不要用大量程的移液器移取小体积样品。,四、使用宝典量取介质,1、标准操作 适用的液体：水、缓冲液、稀释的盐溶液和酸碱溶液。 1)按

7、到第一档，垂直进入液面几毫米； 2)缓慢松开控制按钮，否则液体进入吸头过速会导致液体倒吸人移液器内部吸人体积减少； 3)打出液体时贴壁并有一定角度，先按到第一档，稍微停顿1s后，待剩余液体聚集后，再按到第二档将剩余液体全部压出。,四、使用宝典量取介质,2、黏稠或易挥发液体的移取 在移取黏稠或易挥发的液体时，很容易导致体积误差较大。为了提高移液准确性，建议采取以下方法：1)移液前先用液体预湿吸头内部，即反复吸打液体几次使吸头预湿，吸液或排出液体时最好多停留几秒。尤其对于移取体积大的液体(如10001)，建议将吸头预湿后再移取；2)采用反相移液法：吸液时按到第一档，慢慢松开控制按钮，打液时按到第二

8、档即可，部分液体残留在吸头内。,四、使用宝典常见的错误操作,1、吸液时，移液器本身倾斜，导致移液不准确(应该垂直吸液，慢吸慢放)。2、装配吸头时，用力过猛，导致吸头难以脱卸(无需用力过猛，选择与移液器匹配的吸头)。3、平放带有残余液体吸头的移液器(应将移液器挂在移液器架上)。,四、使用宝典常见的错误操作,4、用大量程的移液器移取小体积样品(应该选择合适量程范围的移液器)。5、直接按到第二档吸液(应该按照上述标准方法操作)。6、使用丙酮或强腐蚀性的液体清洗移液器(应该参照正确清洗方法操作)。,五、校准原因,移液器的工作量大，长期使用，将会使弹簧弹力发生变形，加之本身是塑料，不耐磨擦，就会产生误差

9、。为了保证移液器传递液体量的准确性，必须对移液器进行定期校准。 对新购进的仪器要进行校准才能使用；对正在使用的计量仪器，由于长期使用会造成其示值于度量对象的误差。 因此，对使用的移液器要定期检定、校正，并建立档案，只有这样才能使其在日常工作中更好的发挥作用。,五、校准准备,校准的基本操作条件 1. 操作室：独立房间，显示温度和湿度状态。 2. 温度控制：2025(0.5)。 3. 湿度控制：60% 90%。 4. 工作台面：防震、防尘、远离热源、无阳光直射。 5. 天平：0.000 1g精密分析天平(小数点后5位)，每年需由厂家进行校准。 6. 防蒸发装置：Eppendorf提供的湿度阱，防止

10、称量液体的挥发。 7. 测试介质：双蒸水，每4h更换一次，批次更换周期不大于2周。,5、校准-检测项目,（一）外观 （二）气密性 （三）准确性,五、校准,定量移液器的校准称量法 在万分之一级别天平上放置一个小三角烧瓶，用待标定的移液器吸取蒸馏水（隔夜存放）加入小三角烧瓶内底部，每次称重后计量，去皮重后再加蒸馏水，连续加蒸馏水10次。 移液器标定合格后，填写自校记录。,六、维护与保养原因,为了确保移液器的准确度和精确度，应根据具体使用情况进行定期保养。特别是在使用腐蚀性溶剂后，应该对移液器进行清洁。通过这些简单的清洁和保养方法，可适当地延长移液器的使用寿命。,六、维护与保养,1、外部清洗 方法：

11、根据使用情况，可以用洗洁精、肥皂水清洗，或用60异丙醇消毒，然后用双蒸水淋洗，晾干。 2内部清洗 一般密封圈无需维护，活塞清洗或更换后需要涂上薄薄一层硅酮油脂(移液器每日用完后，应旋转到最大刻度，让弹簧恢复原形，有助于保持弹簧弹性)。,六、维护与保养-水溶液和缓冲液,用蒸馏水校准移液器，结果非常准确打开移液器，用双蒸水冲洗污染的部分，可以在干燥箱中干燥，温度不超过60。 给活塞涂抹少量润滑油,六、维护与保养-无机酸碱,如果经常移取高浓度的酸碱 液，可以偶尔用双蒸水清洗移液器的下半支。最好使用带有滤芯的吸嘴。 移液器中使用的塑料材料和陶质活塞大都是耐酸耐碱材料(除了氢氟酸),但酸碱液的蒸气可能会

12、进入移液器的下部，影响其性能，清洁方法同“水溶液”部分。,六、维护与保养-具有潜在传染性的液体,为了避免污染，应该使用带有滤芯的吸嘴。或者使用正向置换方法移取对污染的部分进行121、20min高压灭菌，或者将移液器下部浸入实验室常规的消毒剂中。随后用双蒸水清洗，并用上述方法进行干燥。,六、维护与保养-细胞培养物,为了保证无菌，应使用带有滤芯的吸嘴参照“具有潜在传染性的液体”的清洁方法。,六、维护与保养-有机溶剂,密度与水不同，不许调节移液器；由于蒸汽压高和湿润行为的变化，应快速移液；移液结束后，拆开移液器，让液体挥发，通常对于蒸气压高的液体，任其自然挥发的过程就足够了，或者 将下部浸人消毒剂中(确保浸人的液面不要超过密封圈弹簧位置，以避免受到液体腐蚀)。用双蒸水清洗，并用上述干燥方法将其干燥。,六、维护与保养-放射性溶液,为了避免污染，应该使用带有滤芯的吸嘴，或者使用正向置换方法拆开移液器，将污染部分浸入复合溶液或专用的清洁溶液，用双蒸水清洗，并用上述干燥方法将其干燥。,六、维护与保养 -核酸蛋白质溶液,为了避免污染，应该使用带有滤芯的吸嘴，或者使用正向置换方法. 蛋白质：拆开移液仪，用去污剂清洗，清洗和干燥方法如上所述 核酸：在氨基乙酸盐酸缓冲液(pH20)中煮沸10min(确保琼脂糖凝胶电泳检测不到DNA残留)，用双蒸水清洗干净，并用上述的干燥方法干燥，同时给