罗氏480系统特点及应用方向

1、LightCycler480实时荧光定量PCR系统及其应用 精准源于设计，极速出自创新,罗氏应用科学部,www.roche-applied-,实时定量PCR仪发展简史,1985 Kary Mullis 发明了PCR技术 1991 Hoffmann-La Roche公司获得全球PCR专利权 1993 罗氏分子系统公司Russell Higuchi发明实时定量PCR仪 1993 Kary Mullis 因发明PCR技术而获得诺贝尔化学奖 1995 罗氏诊断公司推出后来成为PCR诊断行业金标准的COBAS Amplicor分 析仪 1999 罗氏诊断公司应用科学部推出LightCycler全自动实时

2、定量PCR系统 2005 LightCycler全自动实时定量PCR系统全球销量突破 5000台，成为全球 销量最大的单型号实时定量PCR系统 2005 LightCycler 480实时定量PCR仪器上市 2007 目前至今，罗氏诊断公司拥有PCR相关专利上千项，占全球PCR专利的 90%以上。,1998,2003,2005 / 2008,2004,LightCycler 系统发展回顾,A Decade of Real-Time PCR Speed and Performance,仪器,试剂盒,预制探针,可更换温控模块,LightCycler 480荧光定量PCR系统：系统构成,LightC

3、ycler 480荧光定量PCR系统,独有的Therma-BaseTM技术提升导热效率，提高孔间温度均一性 银质散热块加快降温速度 加长光路系统改进光学检测的边缘效应,快速，高效，均一，无需内参,创新的技术改良以获得业内最好的性能,微孔板模块（银制） Peltier 半导体加热单位 冷却装置（银制）,温度高度均一性，孔间温度的精确度0.1 快速冷却和加热速度 (Heating: (4.8) C/s - Cooling: (2.5)C/s) 整个板的精确 PCR 结果 96孔模式 1 hour 384孔模式 40 min,Therma-BaseTM,温控系统构成,多孔板座,Therma-Base

4、 层,散热鳍,封闭的真空夹层，内壁为灯芯式结构，存贮工作液 通过蒸发和凝结过程快速传热 使得PCR循环快速而精确!,Peltier元件,LightCycler 480荧光定量PCR仪散热元件：Therma-Base,LightCycler 480,普通实时定量PCR仪,热均一性,不同仪器比较,LightCycler 480荧光定量PCR仪温控系统,无Therma-Base,有Therma-Base,mdr1-e26*,cyp2C9-e3*,cyp2C9-e7*,热均一性对实验结果的影响,温控的均一性保证了各个反应样品扩增的均一性，极大降低了检测误差率！,快速循环模式,更快地升降温，提高反应速度

5、，缩短反应进行的时间,单位时间内检测的工作量增大，实现更加快速的结果检测！,快速循环模式,更快地升降温，缩短了可能的非特异性结合，提高PCR 的特异性,利于PCR体系的优化！,典型的96孔板式的顶部光路系统,CCD相机,光源,由于光程差,激发光从顶部发出到达每孔的强度不一样，中心强度高于边缘，需要加入内参照来校正,光密度不一样,光学系统 顶部照射产生的边缘效应,利用优化的光学检测元件（液态光导元件，光通路元件, 滤光片和冷CCD光通路元件）将激发光源通过液态光导元件后变成均一的适合微孔板形状的光线,均一的激发和检测，无光程差 无需内参照荧光校正（ROX） 采用折叠光路增加光程，降低激发高度,L

6、ightCycler 480 光路系统,氙灯 CCD相机 5个激发通道 6个检测通道 优化光学组件排列设计 均一的激发及检测过程,LightCycler 480一大特色就是：从来无需内参染料 数据生成 (热循环模块) 数据检测 (光学系统) 数据分析 (软件系统) 每一个步骤都足够准确！,内参染料,UPL probes 1010 100 copies,LightCycler 480 与临床检测定量：动态范围,无论是强阳性样品还是弱阳性样品均能轻松同时检测！,LightCycler 480与基因表达调控微量样品的区分,精确区分1000拷贝与2000拷贝 置信度达到99.8% 是同类仪器的5倍以上

7、 （其他5000拷贝和10000拷贝）,高分辨率有助于对于样品的精细分析！,LightCycler 480与基因表达调控微量样品的定量检测性能,微量样品基因表达调控分析 干细胞研究、激光显微切割 以micro RNA的qPCR检测性能为例： 在LightCycler480上检测1、5、10、50个细胞的microRNA表达差异，实验结果与预期结果很好地吻合,即使是微量样品的检测分析也是轻松自如！,96 Samples,R/R: wild typeCGG/CGG,R/W: wt/mut2(CGG)/(TGG),R/Q: wt/mut1(CGG)/(CAG),Q/Q: mutant 1(CAG)/

8、(CAG),W/W: mutant 2(TGG)/(TGG),LightCycler 480 性能 两个邻近 SNP的区分,可互换的热循环模块 自己动手DIY，快速方便 随机附送装载箱，便于更换模块 无需厂家工程师在场 无需重新校准 更换完毕后仪器自动检测并确认模块型号,LightCycler 480荧光定量PCR仪96孔模块与384孔模块互换,结合MagNA Pure 2.0全自动核酸提取系统，实现更短的实验转换时间 优化的实验和数据处理流程 2小时内完成从核酸纯化到PCR鉴定的所有工作，而传统流程需要6小时甚至一个工作日,LightCycler 480荧光定量PCR系统 和全自动核酸提取系

9、统联用,LightCycler 480荧光定量PCR系统结合自动机械臂实现自动装板,E.g., Twister II Plate Handler (Caliper Life Science),可配机械臂，自动化分液装置 可配备读码器 可配备LIMS 可配备全自动的PCR workflow系统 试剂选择范围广,LightCycler 480荧光定量PCR仪：与自动化流程整合,LightCycler 480荧光定量PCR系统,全能 可更换热循环模块：96 384 可采用多种样品数及体积：96（10-100 l）；384（5-20 l） 用不同光学滤镜组合可检测多种荧光染料：6个检测通道 可选多种检测模式：适用目前所有的检测模式 方便强大的软件工具 模块化软件 高速 快速热循环： Heating: (4.8) C/s - Cooling: (2.5)C/s 高性能试剂 定制耗材,Lig