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文档简介
1、饲料中游离棉酚的测定方法一 主题内容与使用范围本标准规定了饲料中游离棉酚的测定方法本标准适用于棉籽粉、棉籽粕和含有这些物质的配合饲料中游离棉酚的测定二 原理在3-氨基-1-丙醇存在下用异丙醇与正己烷的混合溶剂提取游离棉酚,用苯胺使棉酚转化为苯胺棉酚,在最大吸收波长440nm处进行比色测定。三 试剂和溶液3.1异丙醇3.2正己烷3.3冰乙酸3.4苯胺3.5 3-氨基-1-丙醇3.6 异丙醇与正己烷的混合溶剂:6:4(V/V)3.7 溶剂A:量取约500ml异丙醇、正己烷混合溶剂(3.6)、2ml3-氨基-1-丙醇、8ml冰乙酸和50ml水于1000ml容量瓶中,再用3.6定容至刻度四 仪器4.1
2、 分光光度计4.2 振荡器4.3 恒温水浴4.4 容量瓶:25ml4.5吸量管 :1、3、10ml4.6 移液管:10、50ml4.7漏斗:直径50mm4.8 具塞三角瓶:100、250ml五 试样制备采集具有代表性的样品,至少2kg,四分法缩至250g,磨碎,过2.8mm孔筛,混匀,装入密闭容器,防止试样变质,低温保存备用。六 步骤6.1 称取1-2g试样,(精确到0.001g),置于250ml具塞三角瓶中,加入20粒玻璃珠,用移液管准确加入50ml溶剂A,塞紧瓶塞,放入振荡器内震荡1h,用干燥的定量滤纸过滤,过滤是在漏斗上加一层表玻璃以减少溶剂的挥发,弃去最初几滴液,收集滤液于100ml具
3、塞三角瓶中。6.2用吸量管吸取等量双份滤液5-10ml分别至两个25ml棕色容量瓶中a和b中,如果需要用溶剂补充至10ml。6.3用异丙醇与正己烷的混合溶剂稀释a至刻度,摇匀,该溶液用作试样测定液的参比溶液。6.4 用移液管吸取2份10ml溶剂A分别至两个25ml棕色容量瓶a0 和b0中6.5用异丙醇与正己烷的混合溶剂补充a0 至刻度摇匀,该溶液用作空白测定液的参比溶液。6.6 加2.0ml苯胺于容量瓶b和b0 中,在沸水浴上加热显色30min。6.7 冷却至室温,用用异丙醇与正己烷的混合溶剂定容,摇匀并静置1h6.8 用10nm比色池,在波长440nm处,用分光光度计以a0 为参比溶液测定液
4、b0 的吸光度,以a为参比溶液测定试样测定液b的吸光度,从试样测定液的吸光度值中减去空白测定液的吸光度值,得到校正吸光度A。七 测定结果7.1计算公式106式中:X游离棉酚含量,mg/kg A校正吸光度 m试样质量,gV测定用滤液体积,mla质量吸收系数,游离棉酚为62.5cm-1g-1L7.2 结果表示每个试样取2个平行样进行测定,以其算术平均值为结果。结果表示到20mg/kg7.3 重复性同一分析者对同一试样同时或快速连续地进行两次测定,所得结果之间的差值:在游离棉酚含量小于500 mg/kg时,不得超过平均值的15%在游离棉酚含量大于500 mg/kg而小于750mg/kg时,不得超过75mg/kg在游离棉酚含量超过750 mg/kg时,不得
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