cpg-odn的免疫刺激作用

CpG-ODN的免疫刺激作用的免疫刺激作用 陈军浩南京大学医学院附属鼓楼医院CPG概念n 为非甲基化的胞嘧啶鸟嘌呤二核苷酸重复序列，即 CpG 基序。n 一种免疫佐剂n 作用靶点 TLR9n 细胞免疫，体液免疫Th1免疫应答n 慢性乙型肝炎患者细胞免疫低下n HBV免疫耐受，持续感染n 肿瘤微小残留病的清除CPG提高 PBMC中 Th1细胞Th1占淋巴细胞百分比CPG提高 PBMC中 Th1 、 Tc1细胞百分率*： 与对照组比较， P0.05 CPG刺激 BPMC分泌细胞因子*： 与对照组比较， P0.05 CPG诱导 PBMC杀伤靶细胞n 收集 CPG活化的 PBMCn 细胞毒性实验：效应细胞为 CPG活化的PBMC；靶细胞为 CFSE预染的 K562细胞。对照组效应细胞为未经 CPG活化的 PBMC。n 效：靶 20： 1，混合培养 2h。流式细胞术检测靶细胞死亡率。CPG诱导 PBMC杀伤靶细胞CFSE染色靶细胞n 浓度为 5mol/ L 的 CFSE （ 2羧基荧光素二醋酸盐琥珀酰亚胺酯）工作液n 取对数生长期的靶细胞浓度 108/ Ln 细胞悬液与等体积 CFSE 工作液混合n 37 孵育 10 min。n 离心洗涤两次后n 悬浮细胞备用CFSE染色靶细胞实验结果CpG活化 PBMC对 K562细胞的杀伤作用(N=5)CPG活化 PBMC 16.85 5.14 %对照组 8.62 2.83 %*： 与对照组比较， P0.05 CIK细胞杀伤靶细胞CIK细胞杀伤靶细胞研究背景通过主动免疫、过继特异性免疫、过继非特异性免疫等方式，清除慢性乙肝患者体内残存的 HBV，达到治疗效果 。研究背景B淋巴细胞具有抗原递呈细胞的性质，同时具有 CpG-ODN受体： TLR-9。本研究探讨 CpG-ODN诱导 B淋巴细胞成为高效 APC，使之具有类似于树突状细胞功能的可行性 。TOLL受体TOLL受体在血细胞中的表达活化 B细胞负载核心抗原n 磁珠分选 B淋巴细胞n CPG活化 B淋巴细胞n 核心抗原肽 :FLPSDFFPSV-FITCn 流式细胞仪、荧光显微镜检测抗原负载状况磁珠分选 B细胞分选前 B细胞 7.89% 分选后 B细胞 89.6% 活化 B细胞负载抗原肽活化 B细胞负载核心抗原荧 光 显 微 镜观 察 B细 胞 负载 HBcAg18-27肽 APC与 T细胞作用机制CPG对 B细胞抗原递呈相关分子的作用研究n CpG2006、 2216由上海生物工程技术服务有限公司合成，全硫代化修饰n 对照组为含 10%FCS的 RPMI1640外周血 PBMC，细胞量 107/孔，37 、 5%CO2、 48小时n 实验组加入 CpG2006或 CpG2216，终浓度均为 1umol/mL，余同上CpG提高淋巴细胞 CD69表达T淋巴细胞 B淋巴细胞CD69表达率（%） *： 与对照组比较， P0.05 B细胞 CD80、 CD86表达对照组 加 CPG-ODN组 加 CPG-ODN组CpG提高 B细胞表面 CD80、CD86的表达 CD80 CD86CD80、CD86表达率（%）*： 与对照组比较， P0.05 B细胞 MHC- 、 MHC- 表达对照组 加 CPG-ODN组CpG提高 B细胞表面 MHC- 、MHC- 的表达MHC- MHC-MHC表达量（MFI）* *： 与对照组比较， P0.05 活化 B细胞诱导 CTLn 负载了抗原的活化 B细胞与淋巴细胞混合培养 (含 IL-2的 RPM