艾滋病梅毒乙肝实验室检测技术精品医学课件

艾滋病、梅毒、乙肝实验室检测技术艾滋病抗体检测及 样品处理实验室质量管理生物安全质量控制梅毒乙肝 检测要点艾滋病抗体检测及样品处理一、 HIV抗体 检测筛查 方法酶 联 免疫吸附 试验 （ ELISA）化学 发 光或免疫 荧 光 试验快速 检测 （ RT） （建 议 配 备 合格的快速 检测试剂 ，灰区。）二、 筛查 程序初 筛 和复 检 流程 （ 图 1）三、 筛查试验结 果的 报 告 （ 建 议 用 修改后 附表 3）（例）HIV抗体 筛查试验 用附表 1进 行 报 告，阴性反 应报 告 为 “HIV抗体阴性（ -） ”；阳性反应报 告 为 “HIV抗体待复 检 ”。四、 HIV感染 产妇 所生儿童HIV抗体 检测 策略及流程 1、适用范 围HIV感染 产妇 所生 婴 幼儿；已 满 18个月的婴 幼儿，其母 亲 HIV感染状 态 不 详 ，儿童出 现 HIV相关 临 床表 现 ， 临 床 怀 疑 HIV感染的儿童。2、 检测 程序五、 样 品的 处 理 1样 品的保存 用于抗体和抗原 检测 的血清或血 浆样 品，短期（ 1周）内 进 行 检测 的可存放于 2 8， 一周以上 应 存放于 -20 以下。 2.样 品的运送 （例） （ 1） 应 符合生物安全要求； (2)应 采用三 层 容器 对样 品 进 行包装。 第一 层 容器 ：直接装 样 品， 应 防渗漏。 样品 应 置于 带 盖的 试 管内。在 试 管的周 围应垫 有 缓 冲吸水材料，以免碰碎。 第二 层 容器：容 纳 并保 护 第一 层 容器，可以装若干个第一 层 容器。要求不易破碎、带 盖、防渗漏、容器的材料要易于消毒 处理。 第三 层 容器 ：容 纳 并保 护 第二 层 容器的运输 用外 层 包装箱。外面要 贴 上醒目的 标签、 联 系方式， 还应 易于消毒。 (3) 用于抗体 检测 的血清和血 浆样 品 应在 冻 存 条件下运送。质量控制一、 艾滋病抗体 检测 的 统计学室内 质 量控制 1、 试剂 盒内部 对 照即 试剂 盒提供的阳性和阴性 对 照血清。用于判断 实验 的有效性，不能作 为 室内 质控品使用，内部 对 照 结 果无效，必 须 重新试验 。 2、室内 质 控品为 非 试剂 盒 组 份的外部 质 控品，是 为 了监 控 检测 的重复性而 设 置的，包括 强 阳性、弱阳性和阴性 质 控血清。也可以只 设 置一个弱阳性 质 控，以 该试剂 盒 临 界 值 （Cut-off）的 2 3倍 为 宜。作用：判断 该 批临 床 样 品 检测 的有效性， 每次 实验 必 须 包含室内 质 控品， 其 结 果无效，必 须 重新 试验 。二、 统计 室内 质 控的主要表示方法 建立 质 控 图 最常用的 质 控 图 是 Levey-Jennings质 控 图 ，下面以 ELISA方法 检测 HIV抗体 为 例，描述建立 质 控 图 步 骤 ： 2、 绘 制 质 控 图（ a）在常 规 条件下， 对 同一批血清 连续测 定 20次（天）或以上， 获 得一 组 S/CO值，求均数（ ）和 标 准差（ s） , 超出 2s或 3s的数据不 应删 除。（ b）将均 值 （ ）和 标 准差（ s）分 别 在质 控框架 图 中 标 示出来。以 S/CO值 作 纵 座标 （ Y轴 ），每一批次 试验 作横座 标 （ x轴）， 绘 制 质 控 图 。（ c）从第 21次起，将每次 质 控血清的 检测结 果依次点入 该质 控框架 图 中， 检验进入 质 控状 态 。 3、 质 控 规则 及其使用质 控 规则 的使用 应检 出随机 误 差和系 统误 差，目前有 许 多 质 控 规则 ，常用的是 12S和 13S规则 。（ a）告警（ 12S）：当外部 质 控品的 S/CO值 超出 +2s范 围时 ，系 统处 于告警状 态 ，应 予注意，是否可以 继续检测 需要 进 一步观 察。若将 12S做失控 标 准，有 较 高的假失控概率，所以一般不采用。（ b）失控（ 13S）：当外部 质 控品的 S/CO值 超出 +3s范 围时 ，系 统处 于失控状 态 ，本次 实验结 果不能被接受，可能是系 统误差、随机 误 差或外部 质 控品 稳 定性下降所致。（ c）漂移： 连续 几次（ 3 5次）外部 质控品的 S/CO值 都落在均 值 的一 侧则 称 为 漂移，提示 实验 条件 发 生了 较 大的 变 化。（ d） 趋势 ： 连续 几次（ 5 7次）外部 质控品的 S/CO值 几乎按一个方向分布 时 称 为趋势 ，通常由参数的 缓 慢改 变 引起。艾滋病实验室生物安全一、 HIV的生物危害第一 类 、第二 类 病原微生物 统 称 为 高致病性病原微生物。人 类 免疫缺陷病毒（ HIV）属第二 类 病原微生物，是高致病性病原微生物。二、 HIV相关 检测 的生物安全 级别 HIV抗体检测应在符合 级生物安全实验室（ BSL-2）要求的艾滋病检测实验室中进行。三、生物安全保 证 措施 1、建立安全制度艾滋病 检测实验 室 应 建立下列安全制度 (1) 实验 室的安全工作制度或安全 标 准操作程序（ S-SOP）。 (2) 意外事故 处 理 预 案，主要是生物安全意外事故。 (3) 信息安全及保密制度： （例） 2、培 训 和管理 3、个人保健和防 护 4、安全操作 5、 实验 室的清 洁 和消毒 工作完 毕应对 工作台面消毒，推荐用 0.10.2%的次 氯 酸溶液消毒；用消毒液清洗后要干燥 20min以上；操作 过 程中如有 样 品、检测试剂 外 溅 ， 应 及 时 消毒。 如有大量高 浓 度的 传 染性液体 溅 出，在清洁 之前 应 先用 1%的次 氯 酸 钠 溶液浸泡，然后戴上手套擦 净 。 离心 样 品 时 要使用密 闭的罐和密封 头 ，防止离心 时 液体溢出或在超 /高速离心 时 形成气溶胶。四、 污 染物 处 理 1、艾滋病 实验 室 产 生的所有 废 弃物，包括不再需要的 样 品、培养物和其它物品，均应视为 感染性 废 弃物， 应 置于 专 用的密封防漏容器中，安全运至消毒室， 经 高 压 消毒后再 进 行 处 理或 废 弃。 2、艾滋病 检测实验 室常用的消毒方法 （ 1 ） 物理消毒方法 a 高 压 蒸汽消毒， 121 ，保持 1520min; b 干燥空气烘箱消毒（干烤消毒）， 140，保持 2 3h。 （ 2） 化学消毒方法 含 氯 消毒 剂 （次 氯 酸 钠 ，含有效 氯 2000 5000mg/L）、 75%乙醇、 2%戊二 醛 （ 3）艾滋病 检测实验 室物品常用的消毒方法 a、