研究生课生理学实验技术201009

专题 I：溶液的配制2010年 9月2010级硕士研究生课动物生理学实验技术1、实验台准备2、器皿的准备3、药品的准备4、浓度的确定及计算（ 1） 摩尔浓度1L溶液里含有多少摩尔溶质表示的溶液浓度称为摩尔浓度， M，计算公式：例 1：蔗糖的 C12H22O11分子量 =342， 1升水中溶解了 171g蔗糖，求蔗糖溶液的摩尔浓度？ 例 2：请配制 1mM(1mol/L)蔗糖溶液 100mL例 3：请配制 125mM的 NaOH溶液 1mL 含结晶水的盐溶液摩尔浓度的配制 需配制 0.1M的 Na2CO3溶液 1mL，现有药品为 Na2CO310H2O，如何配制？需称多少克？答案： 2.8610-2 g（ 2）当量浓度当量浓度 (N， normality) ： 1升溶液所含溶质的克当量数。过去常用，现只用于部分酸溶液。当量浓度与摩尔浓度的换算： 与化合价有关，一当量即得失一个电子盐酸 放出一个 H+，化合价为 1， 1N HCl=1M HCl硫酸 化合价 2, 放 2质子， 1M H2SO4 =2N H2SO4常用浓盐酸的浓度为 36%，密度 1.1789（ 3）百分比浓度1% NaCl： 1g， 100mL75% 乙醇， V/V请用 95%乙醇配制 75%乙醇 100mL做酒精棉球要配 250mL 1M的硫酸溶液，市售的浓硫酸为密度 1.836 g/cm3、浓度 98%，问取多少 mL这样的浓硫酸 ? 答案： 13.6 mL5、称量固体：颗粒药品粉末药品 膏状药品易潮解药品腐蚀性药品：强碱液体：挥发性液体 强酸有机溶剂自我防护、防污染配制标准溶液配制步骤：例：配制 1升 0.01mol/L的 KMnO4溶液配制标准溶液的步骤： 1 计算所需溶质 KMnO4的质量： n=0.011=0.01mol 质量 m=0.01mol158=1.58克 2 称量：称取 1.58g固体 KMnO4 3 溶解：在烧杯中用 50ml左右的蒸馏水溶解 KMnO4 4 移液：溶液必须冷却后才能转移到容量瓶中。 5 洗涤烧杯 3次，一并移入容量瓶 6 定容 7 振荡摇匀，装入试剂瓶，贴上写好的标签（浓度、时间、人）容量瓶：用于配制标准溶液或稀释溶液，有 25、 50、 100、250、 500、和 1000ml等规格。需注意 :1 溶质先在烧杯内全部溶解然后再移入容量瓶。 2 不能加热，不能代替试剂瓶用来存放溶液。 干粉倾倒入三角瓶时的注意事项普通溶液的配制： 量筒：多数生化试剂 量杯：生理盐溶液 带刻度的烧杯试管：浓度要求不高的洗涤溶液，浸泡载波片的 2%盐酸，洗液 带刻度的离心管铬酸洗液：1：强洗液 重铬酸钾 150g，蒸馏水 300ml，浓硫酸 3 000ml2：中等强度洗液 浓硫酸 50%，蒸馏水 50%，重铬酸钾 5%3：操作：将重铬酸钾加入蒸馏水中，使之自然溶解或水浴溶解，慢慢加入浓硫酸，边加边搅拌，如发热过剧则冷却后再继续加。操作时要穿橡皮围裙、长统胶靴、戴上眼镜和厚胶皮手套，以保安全。 蒸馏水：一蒸，二蒸，三蒸 开水： 自来水： 去离子水：水的选择PH的调节 精密 pH试纸：室温，自然光照pH计，用标准溶液定期标定校准贮备溶液及其稀释 室温 4 NaN3, 柳硫汞 1/1000 -20 50% 甘油， 5% 特殊溶液的配制及其注意事项1、 EDTANa2，只能溶解于 pH8.0的水中2、 DNA样品：浓溶液形式溶解于 pH8.0以上的碱性水溶液中3、 RNA样品：浓溶液形式溶解于 pH5.2以下的酸性水溶液中4、蛋白溶液：浓溶液溶于中性缓冲液 PBS中5、抗菌问题： 0.05-0.1%叠氮钠， 0.01%柳硫汞 1、苏木精 苏木精是从南美的苏木（热带豆科植物）干枝中用乙醚浸制出来的一种色素，是最常用的染料之一。苏木精不能直接染色，必须暴露在通气的地方，使他变成氧化苏木精（又叫苏木素）后才能使用，这叫做 “成熟 ”。苏木精的 “成熟 ”过程需时较长，配置后时间愈久，染色力愈强。被染材料必须经金属盐作媒剂作用后才有着色力。所以在配制苏木精染剂时都要用媒染剂。常用的媒染剂有硫酸铝按、钾明矾和铁明矾等。 苏木精是淡黄色到锈紫色的结晶体，易溶于酒精，微溶于水和甘油，是染细胞核的优良材料，他能把细胞中不同的结构分化出各种不同的颜色。分化时组织所染的颜色因处理的情况而异，用酸性溶液（如盐酸 酒精）分化后呈红色，水洗后仍恢复青蓝色，用碱性溶液（如氨水）分化后呈蓝色，水洗后呈蓝黑色。 2、洋红 洋红又叫胭脂红或卡红。一种热带产的雌性胭脂虫干燥后，磨成粉末，提取出虫红，再用明矾处理，除去其中杂质，就制成洋红。单纯的洋红不能染色，要经酸性或碱性溶液溶解后才能染色。常用的酸性溶液有冰醋酸或苦味酸，碱性溶液有氨水、硼砂等。 洋红使细胞核的优良染料，染色的标本不易褪色。用作切片或组织块染都适宜，尤其适宜于小型材料的整体染色。用洋红配成的溶液染色后能保持几年。洋红溶液出现浑浊时要过滤后再用。人工染料种类很多，应用极广。缺点是经日照易褪色，苯胺蓝、亮绿、甲基绿等更易褪色。在制片中注意掌握酸碱度，并避免日光直射，也能经几年不褪色。1、 伊红 ：有很多种。常用的伊红 Y，酸性染料，呈红色带蓝的小结晶或棕色粉末状，溶于水（ 15摄氏度时溶解 44%）和酒精（无水酒精中溶解 2%）。动物制片常用，是很好的细胞质染料2、固绿：酸性染料，能溶于水（溶解度为 4%）和酒精（溶解度为 9%）。应用极广，与苏木精、番红并列为植物组织学最常用的染料。3、苏丹 ，脂肪染色剂。弱酸性染料，红色粉末状，易溶于脂肪和酒精（溶解度为 0.15%） 4、酸性品红：酸性染料，红色粉末，能溶于水，略溶于酒精（ 0.3%）。良好的细胞质染色剂，用于动物和植物切片。与甲基绿同染，能显示线粒体。组织切片在染色前先浸酸性水中，可增强它的染色力。酸性品红容易跟碱起作用，所以染色过度，易在自来水中褪色。5、刚果红：酸性染料，呈枣红色粉末状，能溶于水和酒精，遇酸呈蓝色。染细胞质时，在动物组织制片中用来染神经轴、弹性纤维、胚胎材料等。刚果红可以跟苏木素作二重染色，也可用作类淀粉染色，由于它能溶于水和酒精，所以洗涤和脱水处理要迅速。6、甲基蓝：弱酸性染料，能溶于水和酒精。应用极广。与伊红合用能染神经细胞，还用于染细菌制、原生动物的活体染色剂。甲基蓝极易氧化，因此染色后不能长久保存。7、碱性品（复）红：碱性染料，呈暗红色粉末或结晶状，能溶于水（溶解度 1%）和酒精（溶解度 8%）。用来染色胶原纤维、弹性纤维、嗜复红性颗粒和中枢神经组织的核质。在细菌学制片中，常用来鉴别结核杆菌。8、 结晶紫 ：碱性染料，能溶于水（溶解度 9%）和酒精（溶解度 8.75%）。细胞核染色常用，用来显示染色体的中心体，并可染淀粉、纤维蛋白、神经胶质等。凡是用番红和苏木精或其它染料染细胞核不成功时，用它能得到良好的结果。用番红和结晶紫作染色体的二重染色，染色体染成红色，纺锤丝染成紫色，所以也是一种显示细胞分裂的优良染色剂。用结晶紫染纤毛，效果也很好。缺点是不易长久保存切片。 9、龙胆紫：混合的碱性染料，结晶紫和甲基紫的混合物。能与结晶紫互相替用。医药上用的紫药水，主要成分是甲基紫，需要时能代替龙胆紫和结晶紫。 10、中性红：弱碱性染料，红色粉末，能溶于水（溶解度 4%）和酒精（溶解度 1.8%）。它的碱性溶液中呈现黄色，在强碱性溶液中呈蓝色，而在弱酸性溶液中呈红色，故用作指示剂。中性红无毒，常做活体染色的染料，用来染原生动物和显示动植物组织中活细胞的内含物等。陈久的中性红水溶液，用作显示尼氏小体的常用染料。 11、番红：碱性染料，能溶于水和酒精。能染细胞核、染色体和植物蛋白质，还能染孢子囊。 12、亚甲蓝或美蓝：碱性染料，蓝色粉末，能溶于水（9.5%）和酒精（ 6%）。细胞核染料，染色不会过深。 13、甲基绿：碱性染料。绿色粉末，能溶于水（ 8%）和酒精（ 3%）常用于染染色质试剂的保存与放置 Na2CO3、 Na3PO4等弱酸强碱盐溶液不能用 磨口玻璃瓶 贮存？ 象 Na2CO3、 Na3PO4等弱酸强碱盐在水溶液极易水解生成 OH， OH与玻璃中的 SiO2成分反应生成SiO32， 这种反应在磨口玻璃瓶的磨砂处（表