药品分析方法建立及验证——从质量控制出发ppt课件

药品分析方法建立及验证 从质量控制出发2016.03.23目录方法开 发 考 虑方法哪里来开 发 什么方法检测 方法初 识分析方法 验证分析方法确 认 及再 验证方法考虑原则p预期的监督机构期望p产品质量参数对安全性和有效性的预期影响p分子的具体开发经验p来自之前以开发的类似分子的平台经验方法开发考虑 折叠结构可以防止生物制品降解，但同时使分子的某些部分难以被检测到p被结构所保护的易受影响基团延缓了降解过程（氧化、脱酰胺基、切断和聚合）p完整结构使得分析方法很难检测到内部的变化p在某些分析中保持三维结构是很重要的（如 SEC），但在其他一些分析中则需拆开折叠结构（如变性凝胶电泳）方法开发考虑 如何解释不是针对完整分子而是针对裂解部分所进行的检测而获得的数据p有时有必要将一个蛋白分子裂解为所需的片段，然后对所关注的片段进行分析，如用于蛋氨酸氧化测定肽图p多数时候片段并非以简单直接或线性的方式与完整分子相关联（不再是 1： 1）p需要明确地确定完整分子的片段进行分析而得到的某些参数的报告值方法开发考虑 从不同正交试验或从主要和辅助试验所得的杂质量并不是可以累加的p生物制品需要多项检测来检量其多种特性，如电荷、分子大小等p如果一个分子包含多种修饰，则它将被多次计算，但是降解的分子仍然只有一个p所以不同检测所得到的值是不能累加的方法开发考虑 对于所要分析的蛋白质物种，通常无法获得纯的样品p 用来进行加样 /回收的物质是所要分析的蛋白质物种（杂质）的富集物，而不是纯化物 很多时候，峰并不能达到基线分离p 可容许实验误差较大p 定量限较高方法开发考虑 基质（配方组成）或酸碱度变化、自由巯基的出现等，可能在分析过程中形成原来并不存在的杂质p通过溶液交换消除基质影响p减少暴露于过高或过低酸碱度溶液的时间p在某些特定方法中，自由巯基会导致分析方法造成的杂质p这些都是要设法避免方法开发考虑 1. 生物学活性：是反映生物技术药物质量的重要指标，通常使用细胞或动物进行测定，误差相对较大。不同批细胞、血清、或其它易变性物质对测定方法的准确度和精密性均有影响。 2. 生物技术药物多为生物大分子药物，具有分子量大、结构 多样性和 可变性等特点，结构的细微变化可影响药物的活性和质量。 3. 对酸、碱、高温、冻融等不稳定，保存、运输条件不当会影响 药品 质量，并可能导致方法转移困难或失败。 4. 标准物质：活性标准品、含量标准品、理化对照品，根据情况 可能 分别制备，保存、运输条件相对较高，需对其稳定性进行 认真分析 与评价。方法哪里来标准方法（或正式方法、法定方法） u一般是指已有国家标准的质控方法， WHO 推荐的质控方法也可作为重要参考。此类方法在被确定为标准方法前已经过了适当的验证。申报者应说明方法的来源，并附具体方法。研制单位在首次采用此类方法前，也应对该方法进行适当的验证，如进行专属性和精密度的验证，以便证明在实际的使用条件下该方法也是适用的。 标准方法的替代方法 u此类方法系指由申报者提出的可取代标准方法的替代方法。申报者在决定采用此类方法时应持慎重的态度，并需提供表明新方法等同于或优于原方法的依据以及全面的验证资料，包括两种方法的比较性资料。 来自参考文献的方法 是指在专业杂志或著作上发表并介绍的方法，一般要认真对待此类方法，并需进行全面的验证。应说明参考文献的出处，附原文及译文。 自己建立的方法 u对于某些产品，尤其是创新性产品来讲，由于缺少可参考的方法，通常需要自己建立一种新的分析方法，对于这类方法需进行全面而严格的验证。开发什么方法 适用于所有分子的方法p蛋白浓度或含量p紫外 /可见光光度法（基于消光系数，灵敏度低，干扰物多）p高效液相色谱法（基于标准样校正）pBCA/TCA/G250（基于标准样 校正，基质有 可能干扰 )p电荷概括p离子交换色谱（原始状态）p毛细管等电聚焦法（原始状态和局部变性状态）开发什么方法 适用于所有分子的方法p分子大小概况pSEC（原始状态）p凝胶电泳法（非折叠（变性）状态）p病毒样颗粒概况p电镜（局部原始 状态，人为影响因素大）pDLS（原始 状态，分辨率差，大小精准）pSEC（原始状态，流动相会影响蛋白状态）开发什么方法 适用于所有分子的方法p杂质残留量pHPLC（基于标准样校正或自身对照）pGC（对残留溶剂）pICP/AAS （对元素测定）pElisa （宿主蛋白、杂蛋白测定）pSouthern Blot/荧光光谱 （残留 DNA）开发什么方法 适用于特定分子的方法p分子鉴定p肽图 （纯度较高）pWestern Blot （使用范围广）p紫外扫描图 （纯度及基质要求高）p氨基酸测序 (纯度及基质要求高，样品末端无封闭）p偶联密度pADC （抗体药物偶联物）p抗原与载体蛋白偶联物（疫苗类药物）p结合力 抗原与佐剂相互作用开发什么方法 适用于特定分子的方法p活性测定pElisa（体外评价）p动物实验 （体内评价）p中和实验 （细胞测定特定表位）p降解物测定pHPLC/MS（ 基于标准样校正或自身对照 ）p凝胶电泳 （基于特异分子带）pSEC/荧光光谱 （解聚或聚合）开发什么方法检测方法初识 电泳及毛细管电泳检测方法初识 SEC检测方法初识 DAD光谱检测方法初识 荧光光谱检测方法初识 HPLC肽图检测方法初识 UV Cp-Temp检测方法初识 HPLC肽图睫状神经营养因子 (ciliary neurotrophic factor,CNTF)检测方法初识 ESI-MS分析方法验证 法规要求资料 6.质量研究资料，临床前有效性及安全性研究资料（ 1）质量研究及注册标准研究资料；（ 2）检定方法的研究以及验证资料；（ 3）与同类制品比较研究资料；（ 4）产品抗原性、免疫原性和动物试验保护性的分析资料；（ 5）动物过敏试验研究资料；（ 6）动物安全性评价资料。分析方法验证 法规要求1.6探索性 研究及其检验结果分析1.6.1开展探索性研究项目及其目的。叙述开展探索性研究的项目，研究目的，采用的主要方法。1.6.2探索性研究及其检验结果分析。逐项叙述探索性研究项目详细研究方法，样品与对照品的典型图谱或照片，研究结果与结论。该项目的方法学按中国药典附录验证，详细方法学验证内容在附件中列出。分析方法验证 法规要求分析方法验证 法规要求分析方法验证 法规要求第十二条 质量控制的基本要求： （四）检验方法应当经过验证或确认； 第二百二十三条 物料和不同生产阶段产品的检验应当至少符合以下要求： （二）符合下列情形之一的，应当对检验方法进行验证： n 1.采用新的检验方法； n 2.检验方法需变更的； n 3.采用 中华人民共和国药典 及其他法定标准未收载的检验方法； n 4.法规规定的其他需要验证的检验方法。 （三）对不需要进行验证的检验方法，企业应当对检验方法进行确认，以确保检验数据准确、可靠；分析方法验证 验证项目验证项目ChP鉴别试验 杂质定量 杂质限度 活性测定