药品的微生物学检查ppt课件

医学微生物学实验室规则一 .进入实验室必须穿白大衣 ,不必需的物品不要携带入室。 二 .保持实验室的安静和秩序 ,实验要严肃认真。三 .如有传染性材料的污染污染 ,及时报告老师。四 .实验过程中有仪器和器材的损坏要报告老师 并登记。五 .实验后的材料要放到指定的位置。六 .离开实验室前 ,要用肥皂洗手 ,接触过传染性强的实验材料要用 0.1%的新洁尔灭泡手 1-2分钟七 .值日生要作好值日工作 ,关好水 ,电 ,门窗 ,作好实验记录本的登记方可离开实验室。一、目的要求1、了解微生物学实验室常用消毒灭菌仪器设备2、了解空气、皮肤细菌检查方法3、掌握药品的微生物学检验程序和方法二、实验内容1.药品的微生物限度检查（一）1）口服药物的检查 : 药品的预处理： 大肠杆菌的检查： 细菌总数的检查：2）外用药物的检查 : 药品的预处理： 绿脓杆菌的检查： 金黄色葡萄球菌的检查：2.空气、皮肤细菌检查方法 (验证 )3.微生物学实验室常用消毒灭菌仪器设备：高压蒸汽灭菌锅、消毒煮沸器、 G6玻璃滤菌器装置、洁净工作台、移动式 紫外光灯、鼓风式干烤箱、紫外线杀菌标本。实验一 药品的微生物限度检查（一）实验室常用消毒灭菌设备空气和皮肤细菌检查方法（综合实验 +基础实验）通过实验了解药品微生物限定检查法的意义、设计方法、细菌检查常用的基本技术和程序，结果分析方法。药品的微生物限度检查 实验目的药品的微生物限度检查 实验程序一、药品的预处理二、药品的增菌培养、结果分析三、细菌分离鉴定、结果分析口服药外用药药品的微生物限度检查 实验方法 （一）1.药品的预处理2克药品加 20毫升生理盐水，研磨制成悬液2.细菌培养外 用药口 服药药品混悬液 10毫升加入 胆盐乳糖 增菌液中药品混悬液 10毫升加入 胆盐乳糖 增菌液中药品混悬液 10毫升加入 亚碲酸钠 增菌液中37 ,24小时37 ,24小时将剩余 口服药 以 10-1 10-2 10-3 10-4 进行稀释 (以生理盐水稀释 ) 3.细菌总数测定从上述四个稀释管中各取 1ml混入 溶化的琼脂培养基 中，混匀，冷却后置 37 恒温培养箱培养 24小时 。取四个中试管 各加 9ml生理盐水从剩余 10ml悬液中 取 1ml加入上述四个稀释管中 1ml1ml10-1 10-410-2 10-39ml生理盐水一、目的要求 : 1、了解细菌培养接种技术2、掌握细菌基本形态3、掌握药品的微生物学检验程序和方法二、实验内容1.药物的微生物限度检查（二）2.空气、皮肤细菌检查结果测定。3.讲授基础培养基的制备方法 （营养琼脂、营养肉汤）。4.细菌在三种不同物理性状培养基上的接种方法 (基本技能 ) 液体培养基 平板培养基斜面培养基 双糖含铁半固体斜面培养基5.显微镜下观察 细菌的基本形态 : 球菌、枯草杆菌、霍乱弧菌。特殊结构： 肺炎荚膜、变形鞭毛、破伤风芽胞。6.培养基的种类和用途普通培养基、营养培养基、厌氧培养基、选择培养基实验二 药品的微生物限度检查（二）细菌的形态学检查及培养接种技术 一、 空气、皮肤细菌培养现象观察 （一）记录空气微生物培养结果 菌落数目、大小、边缘、颜色、粗糙（光滑）（二）记录皮肤微生物培养结果比较消毒前后细菌菌落数，菌落特点。 培养基的制备培养基分类根据物理性状分类： 液体培养基 主要用于增菌半固体培养基 用于检测动力及保存菌种固体培养基 用于分离鉴定细菌根据用途分类： 基础培养基 普通琼脂培养基营养培养基 血液琼脂培养基选择培养基 SS培养基鉴别培养基 双糖铁培养基厌氧培养基 庖肉培养基 培养基的制备程序 调配 矫正 pH（ 7.0-7.6） 分装 灭菌（ 121.3， 20-30分钟） 放入冰箱冷藏备用。 因高压之后 pH值会下降 0.1左右，所以矫正 pH时应比所需的 pH高。 鉴定是否有菌可将培养基置于 37 培养 24小时，然后观察。二、细菌的接种技术材 料 普通琼脂平板、肉汤培养基、半固体斜面培养基大肠埃希菌培养物（套台） 方 法1.平板划线接种法（ 1）平行划线法（ 2）分区划线法2.琼脂斜面的接种方法3.液体培养基接种法4.半固体接种法分区划线法菌落斜面移种技术菌苔液体移种技术穿刺技术 取出前次实验培养物观察：1.口服药物1)细菌鉴定：在胆盐乳糖增菌液中有无细菌生长：增菌液变混浊 有-接种在 伊红美兰 琼脂平板培养基 上面。方法：分区划线接种。 2)细菌总数测定：选择 30-300个菌落平板，细菌总数菌落数 稀释倍数药物的微生物限度检查方法（二）2.外用药1)判定 胆盐乳糖增菌液培养物 及 亚碲酸钠增菌液培养物 有无细菌生长：增菌液变混浊 有2)细菌鉴定：（ 1）将 胆盐乳糖增菌液培养物 无菌接种在 16烷三甲基溴化胺琼脂斜面培养基 上面。方法：斜面化线接种；（ 2）将 亚碲酸钠增菌液培养物 ，无菌接种在 卵黄高盐琼脂平板培养基 上面。方法：分区划线接种。37 恒温孵育箱 24小时培养后，观察结果。细菌基本形态球菌杆菌螺形菌葡萄球菌链球菌大肠埃希菌枯草杆菌霍乱弧菌细菌特殊结构鞭毛荚膜芽孢破伤风梭菌spore一、目的要求 : 1、了解细菌的生长现象及代谢产物的观察2、掌握药品的微生物学检验程序和方法二、实验内容1.药物的微生物限度检查（三）2.细菌的生长现象及代谢产物的观察 1）液体培养基 -沉淀、浑浊、表面生长现象。 2）三葡、三链、大肠与副伤乙培养基的菌落特征、溶血环观察。3）双糖含铁培养基 - 动力、气体、硫化氢、分解乳糖观察。 4）结核杆菌菌落的观察。 3.中草药、抗生素抑菌试验1）中草药 -大蒜汁、黄连、黄芩、黄柏。2）抗生素 -青霉素、庆大、氨苄、新诺明、生理盐水。实验三 药品的微生物限度检查（三）微生物的形态学检查及药物的敏感性试验 1）从 伊红美兰 琼脂平板培养基上 -挑取 黑色带有金属光泽 的 湿润 菌落，接种在 普通琼脂斜面 培养基上面，进行细菌的 纯培养 。2）观察 外用药物 在 16烷三甲基溴化胺琼脂斜面 培养基上生长状况。记录被检菌色素的溶解性质、液化明胶的状况及菌苔粘稠度等。革兰氏染色镜下观察其菌落形态。根据上述被