smartspec3000分光光度计使用及维护sop

GMP 管理体系 文件编号： GMPM313002 文件版本： 03文件名称 文件编写控制操作规程 文件页码: 1 of 8 拟文部门 总经办 执行日期： 2004-07-10 第 1 页 共 8 页 发放范围： 公司办 研发部 生产部 质量部 物流部 工程部 销售部 审批记录： 起草人 审核人 批准人 签 名 日 期 修订记录： 序号 版本 变更原因及变更内容 编写/修订人 生效日期 1 00 新文件 2 3 目录： 1.0 目的 2 2.0 适用范围 2 3.0 职责 2 4.0 程序 2 5.0 相关文件及附件 7 1.0 目的 建立 SmartSpec 3000 分光光度计的使用及维护保养操作规程，以规范操作。 2.0 适用范围 适用于 SmartSpec 3000（ Bio-Rad）紫外/可见分光光度计的操作及维护保养。 3.0 职责 QC 质检：执行该标准操作程序内容。 QA 人员：对测定过程和结果进行审核与检查。 4.0 程序 4.1使用注意事项 4.1.1 此设备可能会影响位于附近或同一电路回路中的一些较敏感的设备，应尽量远 离其他设备放置以避免干扰。使用时远离易燃物。 4.1.2 每次使用前检查仪器是否有损坏的元件。 4.1.3 确认正确连接电源及设备（电脑或打印机）线。 4.1.4 注意不能将液体倾入样品室，如果不慎洒入需彻底清洁。 4.1.5 不要在仪器上放置物品，不要随意打开仪器机箱盖。 4.1.6 仪器工作环境温度 2035，湿度 095%，环境清洁无过多灰尘。仪器应避 免阳光直射，并与周围保持 10cm 以上的距离以便于气体流通。 4.2仪器开机自检 开机后一起自动进入自检程序，检查灯、可选组件、二极管、电源供应及其他组件。 如未发现问题，仪器将自动显示初始界面。 4.3设置 仪器未处在检测状态时可按下 Setup 进入设置程序。若不需改变现有设置，退出设 置时，可直接按 Enter。大多数项目的设置都可以通过按动 Select 直至显示所需值的 方法来进行修改，有些项目则需要用数字键来输入数值，修改设置后按 Enter 进行 确认。 4.3.1 光程（Pathlenght） 光程与比色杯的规格相对应，按下 Select 可在 10mm、5mm、2mm、1mm 之间 切换。 4.3.2 DNA/RNA 检测的背景补偿 思洛生物技术股份有限公司思洛生物技术股份有限公司思洛生物技术股份有限公司 GMP 体系体系体系 编号：SOP081-006- 00文件名称 SmartSpec 3000 分光光度计 使用及维护 SOP 页数：3 of 8 拟文部门 质量部 生效日期： 当进行 DNA/RNA 检测时，激活此选项，仪器可自动将 320nm 的光吸收作为 背景进行扣除，按 Select 切换此项功能。 4.3.3 默认核酸类型 按 Select 切换 dsDNA、ssDNA、RNA、DNA oligo 和 RNA oligo。 4.3.4 DNA、 RNA 摩尔消光系数和分子量的默认检测方法 如果摩尔消光系数和分子量为已知，可直接将其输入；如未知仪器具有 3 种计 算方法：Length 根据寡核苷酸链的长度， Composition 根据碱基组成和 Sequence 根据寡核苷酸的序列。按 Select 进行切换。 4.3.5 默认样品重复数 对于带有平行样的一组样品，仪器可计算这一组样品的平均值和标准差。这项 功能的默认值是 1，但可通过键盘输入 19 之间的数字进行设置，并按 Enter 或 Setup 保存设置。在大多数检测中，可在 Ready 页面（Ready Screen）下选 择 Options 来进行更改。 4.3.6 新操作者的名称 当仪器打印的报告中包含操作者的名称，可在 Setup 中加入新的操作者。 4.3.7 当前操作者 按 Select 选择打印在报告单上的操作者。 4.3.8 串口输出 当此功能激活时，所有检测的吸光值和浓度值数据均可通过串口输出，否则只 有波长扫描（Scan ）和动力学（ Kinetic）检测的数据能够通过串口输出。 要通过串口输出数据，按 Select 锁定 Yes，然后按 Enter。如果此功能已经激活， 则按下 Print 时，DNA/RNA、蛋白质、OD600 和波长（）检测的吸光值数据 都可以输出，这些数据也同时被打印出来。 4.3.9 当前时间 按 Select 和 Enter 并使用数字键更改时间，按 Enter 确定。 4.3.10 当前日期 按 Select 和 Enter 并使用数字键更改日期，按 Enter 确定。 4.3.11 时间显示模式 按 Select 和 Enter 选择打印时间形式（12 小时或 24 小时） ，按 Enter 确定。 4.3.12 日期显示模式 按 Select 和 Enter 选择打印日期形式（月/日/年 或 日/月/ 年） ，按 Enter 确定。 当完成所有设置后仪器将自动回到初始界面，也可以在设置中按 Cancel 退出设置， 退出后所有的改动都会被保存。 4.4键盘功能介绍 4.4.1 Print（打印） 打印当前检测的所有样品或选定样品的数据。 4.4.2 Abs（吸光值） 仪器自动显示当前样品的吸光值。如果样品检测波长超过一个，按 Abs 选定不 同的波长。如果正在读一组重复样品，按 Abs 可查看当前样品吸光值和平均值 及标准偏差。 4.4.3 Conc（浓度） DNA Oligo 和 RNA Oligo 检测时，切换单位为 g/ml 与 pmol/l 的浓度值。对 Scan、Kinetics 和 检测无任何功能。 4.4.4 A260:A280 4.4.5 Dilution Factor（稀释倍数） 用于计算浓度时乘以稀释倍数。默认稀释倍数为 1.0，每次按下 Assay 键时稀 释倍数自动设为 1.0。 4.4.6 Setup（设置） 4.4.7 Assay Buttons（检测按钮） 下面列出了 6 种检测按钮。按下任何一个时，稀释倍数均设为 1.0，样品数设 为 1，并检查未打印数据的缓冲区。 4.4.8 DNA/RNA 仪器可自动修正 260、280、320nm 的吸光值并计算核酸浓度。浓度的计算决 定于核酸的类型。 4.4.9 Protein（蛋白质） 仪器可依据检测方法（Bradford，Lowry，BCA 或 UV Protein）的不同自动读 取一个或多个波长下的吸光值。仪器可利用标准曲线将吸光值转换成浓度值 （UV Protein 检测除外） 。 4.4.10 Scan（波长扫描） 思洛生物技术股份有限公司思洛生物技术股份有限公司思洛生物技术股份有限公司 GMP 体系体系体系 编号：SOP081-006- 00文件名称 SmartSpec 3000 分光光度计 使用及维护 SOP 页数：5 of 8 拟文部门 质量部 生效日期： 仪器可收集和打印一个样品在指定波长范围内的光吸收。可选择一个特定波长 的光吸收作为背景扣除。仪器会确定波长范围内的最大和最小光吸收值。这些 数据可以通过串口打印或输出。 4.4.11 Kinetics（动力学） 仪器可在一定时间段内按照设定的时间间隔对单个比色杯进行读数。时间间隔 和波长可由使用者设定，同时还可以设定背景波长。这些数据可以通过串口打 印或输出。 4.4.12 OD600 读取 600nm 的吸光值。这一检测用于监测细菌培养的生长状态。使用者可设 定稀释倍数来计算菌液浓度。 4.4.13 （波长） 仪器可在使用者设定的最多三个波长下收集数据，并可选择一个波长作为背景 扣除。 4.4.14 Read Blank（读空白） 仪器将监测器置零以准备读样品。 4.4.15 Read Sample（读样品） 4.4.16 Select（选择） 4.4.17 Enter（确定） 4.4.18 Cancel（取消） 取消最后一次输入的内容或退出设置。当编辑序列信息时，按 Cancel 删除碱 基。当显示 Options 时，按 Cancel 返回检测。 4.4.19 （方向键） 4.4.20 Paper Feed（送纸） 4.4.21 Alpha（字母） 切换数字和字母的输入模式。当进入字母模式时，LED 灯点亮。 4.4.22 Number pad（数字键盘） 4.5使用 4.5.1 开机，仪器进行自检，如有问题会出现提示。 4.5.2 按键选择一种检测 4.5.2.1 DNA/RNA 选择核酸类型：dsDNA、ssDNA 或 RNA，设定稀释倍数； DNA Oligo 或 RNA Oligo，输入摩尔消光系数和分子量或从仪器提供的方法中选择 适合的方法来估算这两个值。并选择是否扣除背景及背景的波长。 4.5.2.2 蛋白质 选择检测方法：Bradford，测 595nm 的光吸收；Lowry ，测 750nm nm 的光吸收；BCA ，测 562 nm 的光吸收；UV 测 260、280、320 nm 的光 吸收；其他，用户自定波长的检测。 选择标准曲线选项：生成新标准曲线，提取保存的标准曲线或无标准曲 线（仪器将由吸光值导出浓度） 。 4.5.2.3 波长扫描 设置扫描的上下限；选择是否扣除背景及背景的波长；选择快速或慢速 扫描，对于快速扫描，选择连续扫描的次数。 4.5.2.4 动力学 选择读数波长，读数持续时间和时间间隔，并选择是否扣除背景及背景 的波长。 4.5.2.5 OD600 设置换算因子。 4.5.2.6 波长 选择读取几个波长并设置，选择是否扣除背景及背景的波长。 4.5.3 如果稀释倍数不是 1.0 则需设置稀释倍数。 4.5.4 仪器归零：将装有空白对照的比色杯放入仪器，按 Read Blank。 4.5.5 读取数据：将装有样品的比色杯放入仪器中，并按 Read Sample。然后继续读 数直至完成全部样品。 4.5.6 吸光值和（或）浓度数据在读取后会自动显示。按 Abs 可查看其他波长下的吸 光值。DNA 或 RNA 寡核苷酸浓度有 g/ml 与 pmol/l 两种单位的结果，按 Conc 切换。如果显示吸光值或浓度数据，按 Enter 返回 Ready 界面，或放入下 一个样品的比色杯，按 Read Sample。 4.5.7 完成最后一个样品的读数后，按左箭头退出检测。 4.5.8 保存标准曲线（如果做了新的标准曲线） ，并打印报告。 4.6操作 思洛生物技术股份有限公司思洛生物技术股份有限公司思洛生物技术股份有限公司 GMP 体系体系体系 编号：SOP081-006- 00文件名称 SmartSpec 3000 分光光度计 使用及维护 SOP 页数：7 of 8 拟文部门 质量部 生效日期： 注：GLP（实验室管理规范）中指出本仪器光吸收的测定范围为 0.1001.500AU。 4.6.1 选择一种检测 4.6.1.1 DNA/RNA 在这一检测中，仪器自动读取 260、280、320nm 的光吸收。如果选择将 320nm 的光吸收作为背景扣除（在“设置”中选择） ，则 A260 和 A280 都先被 减掉 A230 的值，然后 A260 和 A280 才显示出来或用于浓度及 AA260：A280 的计算。 计算： 4.7维护 4.7.1 清洁溢出液体 如果有液体溢洒到样品仓中，按照下列步骤清洁： 4.7.1.1 仪器关机并拔掉电源插头。 4.7.1.2 用注射器清洗样品仓。 4.7.1.3 用棉签擦干样品仓。 4.7.1.4 用湿布清洁仪器外表面及显示屏和键盘。 4.7.2 清洗石英比色杯 4.7.2.1 用稀碱液（如 0.1M NaOH）和稀酸液（如 0.1M HCl）来洗涤比色杯， 然后再用蒸馏水冲洗几次。每次检测时都应使用干净的比色杯。 4.7