sop标准操作程序-ldh

SOP 标准操作程序 LDH 乳酸脱 氢酶（货号：OSR6127，OSR6227） 实验原理： 在心肌损伤、肝脏疾病、巨细胞贫血、肺栓塞、恶性脓包、皮肤炭疽、肌营养不良等 疾病中测定 LDH（EC 1.1.1.27） 。测定 LDH 并结合测定 CK 肌酸激酶及同功酶能确诊急性 心肌梗塞。 方法学： Olympus 公司 LDH 的测定方法采用的是改良 Wacker 法，反应方向中乳酸转化为丙 酮酸。乳酸与 N AD 在 LDH 作用下转化为丙酮酸与 NADH。NADH 在 340nm 下有强吸 收，但 NAD 没有吸收。在 340/380nm 下测定吸光度的变化可以测定标本中 LDH 的活性。 LDH 乳酸+NAD-丙酮酸+NADH+H 标本： 病人准备：无特殊要求。 类型：无溶血的血清或肝素化的血浆。凝固后尽快分离血清，尽量避免溶血。 标本准备： 各种不同的研究表明，LDH 在不同温度下稳定性各不相同。尽管结论各不一致，但比较一 致认为心脏同功酶比肝脏同功酶更加稳定。在任何性情况下，标本收集贮存要有合适的操 作程序使结果一致。最好不要放在冰箱或冰冻，在室温应尽快测定。 仪器与材料: 仪器：奥林巴斯 AU640 生化分析仪 材料：奥林巴斯 AU640 乳酸脱氢酶（LDH） 参与反应成份的最终浓度： AMP 缓冲液（PH 8.9） 230 mmol/L L-乳酸 70 mmol/L NAD 10 mmol/L 其中含有稳定剂与保护剂。 注意：1.此试剂为体外诊断用。 2.不要入口，吞下有害。保护剂为叠氮钠，与下水管中的铜反应形成爆炸性化合物， 如果排向下水道请用大量的水冲洗。 试验用试管的直径在 1216mm。 试剂准备：奥林巴斯 AU640 的 LDH 试剂是即开即用的。无需特殊准备。 执行参数（性能参数）：以下数据是根据奥林巴斯 AU640 LDH 试剂已经建立的程序。 重复性：重复性的评估是根据 NCCLS 推荐的典型方法， AU640 批内重复性小于 3%，总不 精密度小于 5%。用于分析的质控血清和数据处理符合以上的 NCCLS 的规则。 N=100 批 内 精 密 度 总 精 密 度 平均值（U/L ） SD CV% SD CV% 101 0.7 0.7 2.2 2.2 174 1.3 0.8 3.6 2.1 417 2.4 0.6 7.5 1.8 方法学比较：奥林巴斯 AU640 LDH（方法 1）与其它奥林巴斯分析仪器（方法 2） ，共同做 182 个病人标本。相关系数达到 0.998，回归方程如下： LDH 方法 1=（LDH 方法 21.04）0.8 病人结果数值分布：48821U/L 敏感度：在奥林巴斯 AU640 生化分析仪上每分钟变化 0.09 毫吸光度为 1U/L。 试剂的贮存：1.当保存于 28，不开盖情况下至标签的失效期。 2.开盖后放于仪器中可以稳定 30 天。 变质指示：当试剂有浊度时，不能继续使用。 校准： 标准液的准备：这个实验不需要标准液。 校准程序：LDH 的校准中基于 NADH 的摩尔消光系数，在 340nm 为 6300。 质控：在每一批标本中都应把奥林巴斯水平 I 与 II 质控（DR0061&62 ）做为未知标本进行 分析。 操作程序（逐步地）： AU640 开机 1.认两瓶清洗剂有足够的量。 2.打开蒸馏水供应系统的阀门。 3.如果没有设定自动开机，请按分析仪器上的POWER ON键。 4.确认打印机为开机并处于联机状态。 5.在Start Condition屏幕，输入所需信息，并按 F2 退出。 6.如果有需要请进入 password。 7.确认仪器上的在线试剂的位置是否正确、数量（体积）是否充足，不足请添加并在系统 状态中的试剂状态检查试剂。 8.在急诊台 Wash1 的位置的试管中加满一支 1N HCL 的样品针清洗液。 开始分析: 1.把定标、质控、和标本架放在仪器的 Rack Feed 上。 2.用鼠标点击在屏幕最上方开始分析 图标。 3.点击 F2 退出键退到主屏幕。 分析参数 样品体积 3 微升 吐水量 0 微升 试剂 I 体积 80 微升 吐水量 0 微升 试剂 II 体积 40 微升 吐水量 40 微升 波长 340/380 方法 Rate 读点 14/21 温度 37 完整的实验参数与操作程序可以在 AU640 用户手册中查到。 计算： 无需手工计算，结果为在 37自动以 U/L 打印。 报告结果: 参考范围： 140271U/L 参考值会因年龄、性别、饮食及地域的不同而不同。根根据一个好的实验室的经验最好建 立自已实验室的参考值。 不正常结果的处理程序： 根据仪器参数的正常值会打印异常标志。 报告格式： 自动的打印 37U/L 的报告，如果以 uKat/L 报告结果，要乘以 0.01。 操作过程注意事项： 操作过程的限制性：OlympusAU640 LDH 的线性范围是 251200U/L。样品浓度超过线性 范围应稀释重做。在 AU640 中应用自动重做功能，标本重做后会自动乘以稀释倍数。 超范围的标本也可以手工加一份血清 4 份生理盐水，轻轻地混匀，在 AU640 上当常规标本， 结果乘以 5。 干扰物质： LDH 受以下物质干扰： 乳糜 乳糜达到 1000mg/dL 时影响小于 5% 胆红素 胆红素达到 40mg/dL 时影响小于 3% 因为红细胞内含有 LDH，即使很轻微的溶血也会有明显的影响。 枸橼酸盐和草酸盐影响此实验。 Olympus 的研究结果是根据现时发表的文献， Olympus 美国公司正在进行准确性的研究， 对于其它物质的干扰，请参看 Young 发表的文献。 参考文献： 1. Tiez,N.W.,Fundamentals of Clinical Chemistry,3rd Edition, W.B. Saunders,1987 2. Roe,C.R.,Limbird,L.E.,Wagner,G.S. and Nerenberg,S.T.,J Lab Clin Med, 80:577,1972 3. Wacker,W.E.C.,Ulmer,D.D. and Vallee,B.L.,N.Eng J Med,255:449,1956 4. Tietz,N.W.(Ed),Clincial Guide to Laboratory Tests,2nd Edition,W.B. Saunders,1990. 5. NCCLS,Interference Testing in Clincial Chemistry,EP7-P,1986. 6. Young,D.S.,Effects of Drugs on