重组乙型肝炎疫苗 ppt课件

重组乙型肝炎疫苗重组乙型肝炎疫苗 动物细胞工程制药动物细胞工程制药 制作者：黄玉玲制作者：黄玉玲 背景背景 乙型肝炎是由病毒引起的，约占所有病毒性乙型肝炎是由病毒引起的，约占所有病毒性 肝炎的肝炎的4040 ，它可以急性发病，也可以形成，它可以急性发病，也可以形成 慢性肝炎，并进而引发肝硬化，肝癌，而其慢性肝炎，并进而引发肝硬化，肝癌，而其 中很大一部分人可以是健康的病毒携带者，中很大一部分人可以是健康的病毒携带者， 不出现症状，但表面抗原（不出现症状，但表面抗原（HbsAgHbsAg）阳性，）阳性， 或者同或者同e e抗原（抗原（HbeAgHbeAg）阳性，常常是重要）阳性，常常是重要 的传染源。在我国，人口众多，而这样的慢的传染源。在我国，人口众多，而这样的慢 性病毒携带者约有一亿人，是对公共卫生的性病毒携带者约有一亿人，是对公共卫生的 一个重要威胁。一个重要威胁。 乙肝病毒属乙肝病毒属DNADNA病毒科，有三种外壳的基因编码病毒科，有三种外壳的基因编码 。乙肝病毒具有五种抗原抗体系统：即表面抗原。乙肝病毒具有五种抗原抗体系统：即表面抗原 抗体抗体(HBsAg(HBsAg与抗与抗-HBs)-HBs)、e e抗原抗体抗原抗体(HBeAg(HBeAg与抗与抗- - HBe)HBe)、核心抗原抗体、核心抗原抗体(HBcAg(HBcAg与抗与抗-HBc)-HBc)、x x抗原抗抗原抗 体体(HBxAg(HBxAg与抗与抗-HBx)-HBx)和和HBv-DNAHBv-DNA。有临床意义的。有临床意义的 主要有主要有HBsAgHBsAg与抗与抗-HBs-HBs、HBeAgHBeAg与抗与抗-HBe-HBe和抗和抗- - HBcHBc，简称，简称“ “两对半两对半” ”。 临床主要表现为食欲减退、恶心、厌油、乏 临床主要表现为食欲减退、恶心、厌油、乏 力、巩膜黄染、黄色尿、肝脏肿大、肝区痛等。力、巩膜黄染、黄色尿、肝脏肿大、肝区痛等。 简介简介 重组乙型肝炎疫苗是由重组酵母或重组重组乙型肝炎疫苗是由重组酵母或重组 CHOCHO工程细胞表达的乙型肝炎表面抗原，工程细胞表达的乙型肝炎表面抗原， 经纯化、灭活及加入佐剂吸附制成。前者经纯化、灭活及加入佐剂吸附制成。前者 为重组酵母乙型肝炎疫苗，后者为重组为重组酵母乙型肝炎疫苗，后者为重组 CHOCHO乙型肝炎疫苗。其性状为白色混悬液乙型肝炎疫苗。其性状为白色混悬液 ，静置形成可摇散的沉淀。，静置形成可摇散的沉淀。 疫苗用法疫苗用法 (2)(2)注射部位为上臂三角肌肌内。注射部位为上臂三角肌肌内。 (1)(1)本疫苗注射时要充分摇匀。本疫苗注射时要充分摇匀。 (3)(3)新生儿第新生儿第1 1针在出生后针在出生后2424小时内注射，小时内注射，1 1 个月及个月及6 6个月后注射第个月后注射第2 2、3 3针针; ;其他人群免其他人群免 疫程序为第疫程序为第0 0、1 1、6 6个月，剂量均为个月，剂量均为5ug/5ug/支支 。 疫苗制备疫苗制备 取国家批准的重组酵母乙型肝炎疫苗的原始菌种，经一代取国家批准的重组酵母乙型肝炎疫苗的原始菌种，经一代 扩增，制成生产菌种，逐级扩增后接种于发酵罐，在适宜扩增，制成生产菌种，逐级扩增后接种于发酵罐，在适宜 温度和时间内进行三级发酵，收集细胞，经破碎，吸附粗温度和时间内进行三级发酵，收集细胞，经破碎，吸附粗 提，疏水色谱法精提乙型肝炎表面抗原，再经硫氰酸盐处提，疏水色谱法精提乙型肝炎表面抗原，再经硫氰酸盐处 理，除菌滤过，甲醛灭活，氢氧化铝吸附等，加入硫柳汞理，除菌滤过，甲醛灭活，氢氧化铝吸附等，加入硫柳汞 作为防腐剂。作为防腐剂。 取国家批准的重组取国家批准的重组CHOCHO乙型肝炎疫苗的细胞株，用静置培乙型肝炎疫苗的细胞株，用静置培 养或旋转法培养细胞，当乙型肝炎表面抗原的分泌量达到养或旋转法培养细胞，当乙型肝炎表面抗原的分泌量达到 每每1.0mg/L1.0mg/L时，收获培养液，经硫酸铵盐析，时，收获培养液，经硫酸铵盐析，2 23 3次密度次密度 梯度离心和色谱法纯化后，再经浓缩，除菌滤过，甲醛灭梯度离心和色谱法纯化后，再经浓缩，除菌滤过，甲醛灭 活，氢氧化铝吸附等，加硫柳汞作为防腐剂，分装制成。活，氢氧化铝吸附等，加硫柳汞作为防腐剂，分装制成。 鉴别与检查鉴别与检查 【鉴别鉴别 】 取本品，照取本品，照中国生物制品规程中国生物制品规程酶酶 联免疫吸附法，与已知乙型肝炎表面抗体确证其联免疫吸附法，与已知乙型肝炎表面抗体确证其 为乙型肝炎表面抗原。为乙型肝炎表面抗原。 【检查检查】照照中国生物制品规程中国生物制品规程规定的方法检规定的方法检 查如下项目。查如下项目。 纯度 纯度 不得低于不得低于98%98%。 氢氧化铝 氢氧化铝 每每1ml1ml不得过不得过1mg1mg。 硫柳汞 硫柳汞 不得过不得过0.01%0.01%。 甲醛 甲醛 不得过不得过0.01%0.01%。 异常毒性 异常毒性 取本品，依法检查，应符合规定。取本品，依法检查，应符合规定。 热原 热原 取本品，依法检查，应符合规定。取本品，依法检查，应符合规定。 无菌 无菌 取本品，用直接接种法检查，应符合规取本品，用直接接种法检查，应符合规 定。定。 【效价测定效价测定】取本品，照取本品，照中国生物制品规程中国生物制品规程 测定，应符合规定。测定，应符合规定。 酵母乙型肝炎疫苗的 酵母乙型肝炎疫苗的ED50ED50不得过不得过1.5g1.5g。体。体 外相对效力试验抗原含量与参比苗的抗原比值不外相对效力试验抗原含量与参比苗的抗原比值不 低于低于0.50.5。 CHOCHO乙型肝炎疫苗的乙型肝炎疫苗的ED50ED50与参比苗的与参比苗的ED50ED50比比 值不低于值不低于1.01.0。 【类别类别】亚单位疫苗。亚单位疫苗。 【规格规格】酵母乙型肝炎疫苗酵母乙型肝炎疫苗 0.5ml:5g 0.5ml:5g CHOCHO乙型肝炎疫苗乙型肝炎疫苗 1ml:10g 1ml:10g 【贮藏与效期贮藏与效期】在在2 28 8的暗处保存。有效的暗处保存。有效 期期2 2年。年。 重组乙型肝炎疫苗的种类及生产现重组乙型肝炎疫苗的种类及生产现 状状 血源血源乙肝疫苗乙肝疫苗经过十年上亿人份人群接种，证明经过十年上亿人份人群接种，证明 具有良好的安全性的免疫原性，但存在对生产者具有良好的安全性的免疫原性，但存在对生产者 和献血者健康有潜在危险性，生产成本高等缺陷和献血者健康有潜在危险性，生产成本高等缺陷 ，我国已经完成同重组乙肝疫苗对血源疫苗的替，我国已经完成同重组乙肝疫苗对血源疫苗的替 代工作。代工作。 目前重组乙肝疫苗主要分为酵母，（酿酒酵 目前重组乙肝疫苗主要分为酵母，（酿酒酵 母和甲基营养型酵母）以及中国仓鼠卵巢细胞（母和甲基营养型酵母）以及中国仓鼠卵巢细胞（ Chinese Hamster Ovary cell,CHOChinese Hamster Ovary cell,CHO）表达疫苗。）表达疫苗。 （一）酿酒酵母（一）酿酒酵母 19821982年年ValenzuelaValenzuela首先在酿酒酵母中成功表达乙首先在酿酒酵母中成功表达乙 型肝炎病毒表面抗原（型肝炎病毒表面抗原（HBsAgHBsAg），），19861986年年9 9月美国月美国 默克公司的重级酵母乙肝疫苗首次取得专利并得默克公司的重级酵母乙肝疫苗首次取得专利并得 到美国到美国FDAFDA的批准。的批准。19891989年年7 7月比利时史克比成公月比利时史克比成公 司的另一重组酵母乙肝炎疫苗也取得专利。目前司的另一重组酵母乙肝炎疫苗也取得专利。目前 重组酵母乙肝疫苗的生产厂家除默克公司，史克重组酵母乙肝疫苗的生产厂家除默克公司，史克 公司外，我国北京天坛生物，深圳康泰公司也大公司外，我国北京天坛生物，深圳康泰公司也大 量生产该种疫苗。其优点为：酵母为低等真核微量生产该种疫苗。其优点为：酵母为低等真核微 生物，易于在营养成份简单的培养基中高密中发生物，易于在营养成份简单的培养基中高密中发 酵培养，利用工业化生产，表达量高，目前世界酵培养，利用工业化生产，表达量高，目前世界 上大规模生产和上市的疫苗大多数由该表达系统上大规模生产和上市的疫苗大多数由该表达系统 制备而成。制备而成。 （二）（二） 甲基营养型酵母甲基营养型酵母 共有共有4 4种表达系统。甲基营养型酵母生产种表达系统。甲基营养型酵母生产 HbsAgHbsAg具有培养基廉价，目的基因与酵母染具有培养基廉价，目的基因与酵母染 色整合的优点，色整合的优点， 不仅可克服质粒丢失，还不仅可克服质粒丢失，还 可提高表达量。汉逊酵母（可提高表达量。汉逊酵母（Hansenula Hansenula PolymorphaPolymorpha，H.P.H.P.）和毕赤酵母（）和毕赤酵母（Pichia Pichia PastorisPastoris，P.P.P.P.）系统已应用于工业化生产）系统已应用于工业化生产 。已上市的酿酒酵母和甲基营养型酵母表。已上市的酿酒酵母和甲基营养型酵母表 达乙肝疫苗为含达乙肝疫苗为含HbsAgHbsAg成份的疫苗。成份的疫苗。 （三）（三） CHOCHO疫苗疫苗 本疫苗系用基因工程技术将乙型肝炎表面本疫苗系用基因工程技术将乙型肝炎表面 抗原基因片段重组到中国仓鼠卵巢细胞抗原基因片段重组到中国仓鼠卵巢细胞 (CHO)(CHO)内，通过对细胞培养增殖，增殖分泌内，通过对细胞培养增殖，增殖分泌 乙肝表面抗原乙肝表面抗原(HBsAg)(HBsAg)于培养液中，经纯化于培养液中，经纯化 加佐剂氢氧化铝后制成。疫苗外观有轻微加佐剂氢氧化铝后制成。疫苗外观有轻微 乳白色沉淀。乳白色沉淀。 国产酵母乙肝疫苗的效果国产酵母乙肝疫苗的效果 研究证明：国产血源乙肝疫苗的保护效果至少维研究证明：国产血源乙肝疫苗的保护效果至少维 持持9-109-10年，国产重组乙肝疫苗（主要为酵母疫苗年，国产重组乙肝疫苗（主要为酵母疫苗 ）的免疫效果和免疫持久性如何，是人们关心的）的免疫效果和免疫持久性如何，是人们关心的 重点。因为乙肝病毒缺乏易感动物模型，乙肝疫重点。因为乙肝病毒缺乏易感动物模型，乙肝疫 苗的免疫效果考核只能应用人体考核来评价，既苗的免疫效果考核只能应用人体考核来评价，既 往研究证明应用乙肝苗阻断往研究证明应用乙肝苗阻断HbsAgHbsAg、HbeAgHbeAg双阳双阳 性母亲的新一儿传播性母亲的新一儿传播HBVHBV是评价乙肝疫苗的效力是评价乙肝疫苗的效力 的最直接指标，且的最直接指标，且1-101-10岁儿童对乙肝疫苗反应较岁儿童对乙肝疫苗反应较 好。我们选择新生儿和儿童作为疫苗考核对象，好。我们选择新生儿和儿童作为疫苗考核对象， 进行国产酵母乙肝疫苗的免疫效果和持久性研究进行国产酵母乙肝疫苗的免疫效果和持久性研究 。阶段结果报告如下：。阶段结果报告如下： 免疫效果免疫效果 新生儿新生儿 （1 1） 母婴传播阻断保护率：应用母婴传播阻断保护率：应用6 6批国产量批国产量5 g5 g酵母疫酵母疫 苗对苗对163163例例HbsAgHbsAg，HbeAgHbeAg双阳性母亲的新生儿进行母婴双阳性母亲的新生儿进行母婴 传播阻碍断效果考核，结果保护率在传播阻碍断效果考核，结果保护率在81.48-92.07%81.48-92.07%之间之间 ，远高于文献报道的，远高于文献报道的10 g10 g（59.2%59.2%）和）和20 g20 g（74.3%74.3%） 血源乙肝疫苗血源乙肝疫苗, ,与与30 g30 g血源乙肝疫苗的保护率血源乙肝疫苗的保护率(85.1%)(85.1%)相相 当当, ,而进口而进口5 g M5 g M苗苗(46(46例例,)10 gA,)10 gA苗苗(58(58例例) )和和10 g S10 g S酵母酵母 疫苗疫苗(30(30例例) )的保护率分别为的保护率分别为90.33%90.33%、86.59%86.59%和和92.58%92.58%。 表明国产酵母疫苗免疫效果达到国外同类产品和表明国产酵母疫苗免疫效果达到国外同类产品和30 g30 g国国 产血源乙肝疫苗的保护水平。产血源乙肝疫苗的保护水平。 2 2） 抗体抗体GMTGMT：未发现第一针免后：未发现第一针免后3 3、9 9、1212月时，月时，HbsAgHbsAg 、HbeAgHbeAg双阳性孕妇所生新生儿的抗体双阳性孕妇所生新生儿的抗体GMTGMT与与HbsAgHbsAg单阳单阳 性及健康孕妇所生新生儿抗体性及健康孕妇所生新生儿抗体GMTGMT有显著差异有显著差异。 小学生：小学生： （ （1 1） 抗体阳性率：第一针免后抗体阳性率：第一针免后1 1年时，进口年时，进口 酶母疫苗，国产酵母疫苗和国产酶母疫苗，国产酵母疫苗和国产CHOCHO疫苗抗体阳疫苗抗体阳 性率在第一针免疫后性率在第一针免疫后3 3、9 9、1212月均无显著差异。月均无显著差异。 （ （2 2） 抗体抗体CMTCMT比较：第一针免后一年时，比较：第一针免后一年时， 进口酶母疫苗（进口酶母疫苗（10 g10 g）和国产）和国产CHOCHO疫苗（疫苗（10 g10 g ）抗体）抗体GMTGMT峰值较高，国产酵母疫苗（峰值较高，国产酵母疫苗（5 g5 g）较）较 低。低。 免疫持久性免疫持久性 对应用对应用0 0、1 1、6 6月程序免疫的小学生进行了月程序免疫的小学生进行了 随访观察。随访年及随访观察。随访年及3 3年时，年时，2 2批国产酵母批国产酵母 疫苗具有保护性抗体（疫苗具有保护性抗体（10mIU/ml10mIU/ml）的阳转）的阳转 率分别为率分别为81.48%81.48%；68.66%68.66%和和92.11%92.11%； 74.14%74.14%，而进口，而进口A A和和MM疫苗分别为疫苗分别为90.38%90.38% ；69.56%69.56%和和93.10%93.10%；78.05%78.05%。2 2批国产酵批国产酵 母疫苗抗体母疫苗抗体GMTGMT分别为分别为123.99123.99；146.10146.10和和 92.1192.11；83.5283.52，A A和和MM疫苗分别为疫苗分别为120.56120.56； 67.0767.07和和145.75145.75；74.6274.62。 对应用对应用0 0、1 1、2 2月程序免疫的月程序免疫的400400名小学生进行了名小学生进行了 免后免后4 4年的随访观察，结果年的随访观察，结果3 3批国产酵产疫苗阳性批国产酵产疫苗阳性 率分别为率分别为87.50%87.50%；77.33%77.33%；79.49%79.49%，而对照，而对照MM （5 g5 g）疫苗为）疫苗为91.89,91.89,抗体抗体GMTGMT分别为：分别为：65.5765.57； 71.4071.40；59.2059.20和和74.8474.84。由抗体峰值。由抗体峰值6 6月至月至4 4年时，年时， 3 3批国产疫苗抗体阴转率分别为批国产疫苗抗体阴转率分别为7.27.2；5.265.26和和 13.79%13.79%，对照，对照MM苗为苗为5.17%5.17%。无论抗体阳性一率。无论抗体阳性一率 ，抗体，抗体GMTGMT以及以及4 4年抗体阴转率，年抗体阴转率，3 3批国产疫苗和批国产疫苗和 MM苗间增无显著差异。苗间增无显著差异。 我们最近随该结果表明，我们最近随该结果表明，2 2批国产酵母乙肝疫苗免批国产酵母乙肝疫苗免 后后5 5年时抗体阳性率已降至年时抗体阳性率已降至70%70%以下，而同期血源以下，而同期血源 乙肝抗体阳性率在乙肝抗体阳性率在81-69%81-69%之间。之间。 结果表明：国产酵母重组乙肝疫苗的近期免 结果表明：国产酵母重组乙肝疫苗的近期免 疫效果达到了进口酵疫苗的免疫水平，但抗体阳疫效果达到了进口酵疫苗的免疫水平，但抗体阳 性率和抗体性率和抗体GMTGMT下降较快，考虑当前乙肝疫苗供下降较快，考虑当前乙肝疫苗供 应充足，酵母疫苗的加强接种应提到议事日程。应充足，酵母疫苗的加强接种应提到议事日程。 乙肝疫苗的发展乙肝疫苗的发展 （一）联合疫苗：（一）联合疫苗： 联合疫苗具有减少注射针次、接种副反应及 联合疫苗具有减少注射针次、接种副反应及 提高接种覆盖率的优点。已上市的联合疫苗如提高接种覆盖率的优点。已上市的联合疫苗如SBSB 公司的百白破公司的百白破- -乙肝四联疫苗、甲乙肝四联疫苗、甲- -乙肝联合疫苗乙肝联合疫苗 ，MSDMSD公司的流感嗜血杆菌乙型肝炎偶联疫苗等公司的流感嗜血杆菌乙型肝炎偶联疫苗等 。我国全细胞百白破。我国全细胞百白破- -乙肝四联疫苗和无细胞百白乙肝四联疫苗和无细胞百白 破破- -乙肝四联疫苗已完成临床前研究，甲乙肝四联疫苗已完成临床前研究，甲- -乙肝联乙肝联 合疫苗的开发研究制也在进行。合疫苗的开发研究制也在进行。 （二）治疗性疫苗（二）治疗性疫苗 1 1） 现有疫苗增加前现有疫苗增加前S S基因或替换现有铝佐剂基因或替换现有铝佐剂 研究开发植物来源、细胞因子、人工合成和可生物降 研究开发植物来源、细胞因子、人工合成和可生物降 解的高分子聚合物等佐剂，目的在于提高细胞免疫效果，解的高分子聚合物等佐剂，目的在于提高细胞免疫效果， 国外已有制品进行临床研究。国外已有制品进行临床研究。 2 2） DNADNA疫苗：可以肌肉细胞内表达乙肝表面抗菌原疫苗：可以肌肉细胞内表达乙肝表面抗菌原 ，诱导细胞免疫应答，同时具有长期表达抗原，可减少加，诱导细胞免疫应答，同时具有长期表达抗原，可减少加 强免疫及成本低，储存方便的特点。强免疫及成本低，储存方便的特点。 3 3） 增大剂量酵母疫苗（增大剂量酵母疫苗（10 g/10 g/支）的生产：支）的生产： 我国现阶段生产和使用的酵母乙肝疫苗均为 我国现阶段生产和使用的酵母乙肝疫苗均为5 g/5 g/支支 ，由于以下原因：，由于以下原因：、实际应用反映、实际应用反映5 g5 g酵母疫苗的抗体酵母疫苗的抗体 阳性率和滴度较低。阳性率和滴度较低。、我们对接种、我们对接种5 g